不同炮制手段对丹参所含丹酚酸B医治胃炎患者的影响

奥东塔娜　岱青　乌汉其木格

摘要 目的：研究不同炮制手段对丹参所含丹酚酸B医治胃炎患者的影响。方法：首先以不同的炮制手段完成丹参的制备，获取炒丹参、丹参炭、米炒丹参、酒丹参、醋丹参，之后通过高效液相色谱法对上述各种丹参炮制品内的丹酚酸B与多糖含量进行测定。结果：酒丹参的丹酚酸B含量位居首位，依次为醋丹参屈、生丹参、米炒丹参、炒丹参、丹参炭。不同炮制手段的丹参中多糖含量按照从多到少分别是酒丹参、醋丹参、米炒丹参、生丹参、炒丹参、丹参炭。结论：酒丹参与醋丹参中的丹酚酸B含量较高，其医治胃炎的重要机制可能和活血化瘀、抗炎镇痛以及促进胃酸的分泌有关。此外，酒丹参和醋丹参中的丹参多糖含量相对较高，值得临床重点关注。

关键词 丹参;丹酚酸B;炮制手段;胃炎;治疗机制

Abstract Objective：To study the effect of different processing methods on salvianolic acid B contained in salvia miltiorrhiza and Its mechanism in gastritis patients.Methods：Salvia miltiorrhiza was prepared with different processing methods.Salvia miltiorrhiza toasted，salvia miltiorrhiza toasted to black，salvia miltiorrhiza toasted with rice，salvia miltiorrhiza liquor and salvia miltiorrhiza vinegar were obtained.Then the salvianolic acid B and polysaccharide content in salvia miltiorrhiza products were determined using HPLC.Results：The salvianolic acid B content of salvia miltiorrhiza liquor ranked first，and the rest in turn are salvia miltiorrhiza vinegar，raw salvia miltiorrhiza，salvia miltiorrhiza toasted with rice，salvia miltiorrhiza toasted and salvia miltiorrhiza toasted to black.The contents of polysaccharides in salvia miltiorrhiza were as follows：wine salvia miltiorrhiza，vinegar salvia miltiorrhiza，rice fried salvia miltiorrhiza，raw salvia miltiorrhiza，fried salvia miltiorrhiza and salvia miltiorrhiza charcoal.Conclusion：The salvianolic acid B content of salvia miltiorrhiza liquor and vinegar is relatively high.Its mechanism of treating gastritis may associated with promoting blood circulation，removing blood stasis，anti-inflammatory and analgesic functions，and promoting the secretion of stomach acid.In addition，they also have high content of polysaccharides，which may attract further clinical research.

Keywords Salvia miltiorrhiza; Salvianolic acid B; Means of processing; Gastritis; Treatment mechanism

中图分类号：R284;R573文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.18.005

中医学认为丹参这一中药材具有通经止痛和活血祛瘀等重要功效[1-2]。药理学证实，丹参能优化心脏状态，并可改善血液流变学，同时对于脂质代谢，以及血管内平滑肌细胞的有关增殖、迁移及调控等过程中均发挥着不同程度的作用，对心血管类疾病的治疗意义重大[3-5]。丹参的药用炮制方式比较多，如酒丹参及醋丹参等，不同的炮制方式所获得的丹参炮制品药效存在显著差异[6-8]。因此，寻找一类科学有效的炮制方式十分必要，亦为提升丹参药物价值的重要途径。丹参酮Ⅱ值、丹酚酸以及丹参素等是丹参重要组成成分之一，其中丹酚酸B的含量将直接影响丹参的治疗效用[9-11]。鉴于此，本研究通过探讨不同炮制手段对丹参所含丹酚酸B的作用及医治胃炎的机制并进行分析，旨在为临床丹参的炮制提供一种相对较好的方式。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 1）电子天平（Sartorius公司，德国，型号：BSA822;2）高效液相色谱仪（岛津公司，日本，型号：Prominence LC-20A）;3）薄層色谱仪（GAMAG公司，瑞士，型号：REPROSTAR3）;4）十万分之一电子天平（Sartorius公司，德国，型号：R200D）;系统连接器（GAMAG公司，瑞士，型号：GMB-20A）;定量点样器（GAMAG公司，瑞士，型号：NANOMAT4）;TV双光束紫外可见分光光度计（北京谱析通用仪器有限公司，型号：tu1901）;进样阀（美国罗丹妮公司，型号：7725i），二极管阵列检测器（日本岛津公司，型号：SPD-M20A），柱温箱（日本岛津公司，型号：GTO-10AS），微量进样器（日本岛津公司，型号：GCMS），LC solution工作软件（日本岛津公司，型号：LC solution）。

1.2 试剂 丹酚酸B对照品购自中国药品生物制品鉴定所，批号：11562-200907。甲醇为色谱纯甲醇（国药集团上海化学试剂公司，货号：021103），水为超纯水（上海砾鼎公司，货号：21134），乙腈（北京迈瑞达公司，货号：M157-1L）均为分析纯。

1.3 分析样品 丹参原材料均购自苏州市天灵中药饮片厂，批号：02159，所有丹参均与2010年的《中华人民共和国药典》中所制定的相关质检合格标准相符。

2 方法与结果

2.1 丹参制备 1）炒丹参：使用文火将其炒至紫褐色，且呈现焦斑后，放凉即可获得。2）丹参炭：以武火炒至焦黑色，喷洒少量凉水，取出放凉即得。3）米炒丹参：以水湿润锅，将米撒贴于锅中，将其加热冒烟，添加丹参，而后持续翻动，待丹参由红色转为深紫色，即可出锅筛除米粒，常规冷却即可。此过程丹参片与米的质量比为5∶1。4）酒丹参：将200 g生丹参，与20 g白酒拌匀，而后待其闷透，置于锅中以文火炒干，放凉即得。5）醋丹参：将200 g生丹参，与25 g醋拌匀，闷透，放置在锅内以文火炒干，取出放凉即得。

2.2 HPLC检测丹酚酸B含量

2.2.1 色谱条件 流动性：乙腈与0.1%磷酸混合液，前者与后者比值为21∶79;流速：1.0 mL/mL。色谱柱：Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）。柱温：室温。波长：286 nm。

2.2.2 对照品的溶液配制 将12.65 mg丹酚酸B对照品，置50 mL量瓶中，添入甲醇到刻度，并充分摇匀，获得浓度是253 mg/L的丹酚酸B对照品药物溶液。

2.2.3 供试品溶液的配制 取供试品0.500 g，加浓度为75%的甲醇溶液总计25 mL，通过封口膜实施密封，再给予0.5 h的超声干预及冷却。而后以0.45 μm型微孔滤膜实施滤过，最后获得供试品溶液。凭借上述色谱条件能够得到丹酚酸B的色谱图和丹参样品的色谱图。见图1～2。

2.2.4 线性关系考察 将丹酚酸B的对照品以1、2、4、8、16、32 μL分别进样，计算峰面积相关积分值。并以进样量设置为横坐标，色谱峰面积设置为纵坐标，进行回归分析，得到回归方程y=234 476.4x+26 514.3（r=1.000），所得结果显示丹酚酸B为0.252～9.098 μg，线性关系良好。

2.2.5 精密度测定 将10 μL丹酚酸B对照品，遵照上述色谱条件常规进样，得到丹酚酸B的峰面积，计算相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD）为0.65%。

2.2.6 重复性试验 依据上述的供试品制作步骤，实施丹参70%的乙醇回流提取物的有关供试品溶液制作，总计5份，溶液中所含丹酚酸B的平均值是6.254 8%，RSD是2.12%，表明此法重复性较好。

2.2.7 稳定性试验 取10 μL的丹酚酸B对照品以及供试品溶液，在0、2、4、8、16 h分别进样，实施峰面积测定，其中RSD分别是0.73%及0.88%。表明丹酚酸B对照品同供试品溶液于16 h内的稳定性相对较佳。

2.2.8 加样回收率 采集上述5份丹参70%乙醇回流提取物药粉，每份为0.050 0 g，置25 mL量瓶中，分别加入5、5、7.5、7.5、10 mL的浓度是10.75 mg/L的丹酚酸B对照品，添加甲醇到刻度，通过上述步骤实施供试品溶液配制，获得5份样品平均加样的回收率。

2.2.9 样品测定 提取20 μL的对照品溶液以及相关供试品溶液，分别进样并测定，统计样品中丹酚酸B的含量。

2.3 丹参多糖含量测定

2.3.1 丹参多糖提取 丹参样品各10 g，粉碎并添加100 mL纯化水，再静置1 h，待物料彻底润湿后，超声提取3次，30 min/次，过滤。按照相同的条件重复提取2次，混合提取液35 mL，通过减压浓缩处理后获得70 mL溶液，随后加入630 mL的无水乙醇沉淀后干燥，即得丹参粗多糖。

2.3.2 标准曲线绘制 将50 mg的葡萄糖置于500 mL的量瓶内，获得浓度0.1 mg/mL的标准溶液。再依次吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL溶液放入试管内，添入纯化水至2 mL，加4%的苯酚1 mL后摇匀。加入5 mL浓硫酸，摇匀，置于40 ℃水浴加热0.5 h，室温放凉，于490 nm下算出吸光度。将标准品浓度作为横坐标，将吸光度记为纵坐标，绘制“吸光度-浓度”的有关标准曲线。获得回归方程r=0.999 8，说明多糖于40～120 μg/mL内线性关系良好。

2.3.3 多糖含量测定 将上述获取的干燥多糖精密称取100 mg至100 mL量瓶内，加入纯化水定容到刻度。加入10 mL上述溶液于100 mL量瓶中，加纯化水定容至刻度，获取0.1 mg/mL的样品液。量取2 mL样品液放置试管内，添加6 mL的0.4%蒽酮硫酸液。混匀并于40硫水浴下加热0.5 h，室温放凉，于490 nm下算出吸光度。丹参多糖含量=干燥粗多糖质量×纯度/丹参药材的质量×100%。

2.4 丹参药材所含丹酚酸B的加样回收率的检测结果 丹参药材平均加样回收率分别是98.87%，RSD是1.33%。见表1。

2.5 差异性炮制手段所得丹参内丹酚酸B的含量酒丹参所含的丹酚酸B的含量最多，依次為醋丹参、生丹参、米炒丹参、炒丹参、丹参炭。见表2。

2.6 不同炮制手段的丹参中多糖含量测定结果 不同炮制手段的丹参中多糖含量按照从多到少的顺序分别为酒丹参、醋丹参、米炒丹参、生丹参、炒丹参、丹参炭。见表3。

3 讨论

丹酚酸B主要是有1个分子的咖啡酸与3个分子的丹参素缩合而成，具有2个羧基，且以差异性盐的形式存在，其属于丹参水溶性成分的重要组成部分之一，是目前临床上被广泛用于反映丹参有效成分含量的一个敏感指标[12-14]。随着近年来相关研究的日益深入，越来越多的学者发现丹酚酸B作为丹参的药物物质基础，存在明显的抗氧化和抗血栓形成，以及细胞保护和抗凝血等重要功效，对机体内的心血管系统和肾、肝脏等器官具有一定的保护作用，同时可发挥抗肿瘤作用[15-16]。丹酚酸B因有酯键，从而使得其于水溶液中具有一定的不稳定性，且在煎煮、浓缩过程中会促使少部分的丹酚酸水解生成自草酸以及丹参素，更有部分丹参素会在酸性的条件下转变成迷迭香酸[17-18]。相关研究报道表明，丹酚酸B对于温度具有较高的敏感性，伴随着加热方式的差异，丹参提取液内的丹酚酸B含量会出现一定的差别，且含量随温度变化的规律和动力学方程相符[19-20]。由此可见，选择一种有效的炮制方式对提高丹参提取液中的丹酚酸B含量具有极其重要的意义[21-23]。

本研究结果表明，酒丹参的丹酚酸B含量最多，其次是醋丹、生丹参、米炒丹参、炒丹参、丹参炭。这和其他研究结果相似[24-26]，提示酒丹参和醋丹参所含的丹酚酸B含量水平最高，存在丹参炮制品相关制备的首选潜力。分析原因，丹酚酸B对温度的敏感性较高，而加热方式对丹酚酸B的影响程度存在明显差异。与此同时，丹酚酸B的含量可受pH值和提取溶液剂，以及有关缓冲盐的浓度等因素影响，当其在1

综上所述，酒制丹参及醋制丹参中的丹酚酸B、多糖含量较高，从而可有效提高临床医治肾炎的效果，值得临床重点关注。

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（2020-01-07收稿 责任编辑：杨覺雄）