儿童不同亚型呼吸道合胞病毒感染的临床流行特征及气候因素分析

吴守业，林道炯，王亚洲

(海南省妇女儿童医学中心儿科，海南 海口 570206)

呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是急性下呼吸道感染(acute lower respiratory tract infections,ALRTIs)的最为常见病原菌，是引起支气管肺炎、毛细支气管炎、大叶性肺炎、间质性肺炎及哮喘发展的主要原因，常表现为发热、咳嗽咳痰、喘息等症状，可闻及肺部湿罗音或哮鸣音，RSV感染后可出现气道黏膜水肿、黏液分泌增多、上皮细胞脱落，呈现为气道高反应、气道慢性炎症，是患儿出现反复感染喘息甚至哮喘的重要原因[1,2]。RSV可分为RSV-A和RSV-B两种亚型，可引起不同的临床流行病学特征，给患儿及家庭带来了一定疾病负担，严重影响患儿的生活质量[3]。目前有关儿童RSV流行病学特征及疾病负担的相关研究较多，而儿童不同亚型RSV临床流行病学特征及气候因素的系统性研究甚少。因此，本研究拟分析不同亚型RSV感染的流行特征、临床特点及气候因素的相关性研究，以期为RSV的预防控制及诊治提供重要的参考依据。

1 资料与方法

1.1研究对象:选择2018年1月至2020年12月我院住院RSV感染急性下呼吸道感染患儿309例，男188例(60.84%)，女121例(39.16%)，平均年龄为5.05(2.02～13.56)月，所有研究对象均进行鼻咽分泌物病毒检测。入选标准：病程在1个月内存在急性下呼吸道感染及哮喘发作的患儿，鼻咽分泌物检测存在RSV感染者。排除标准：存在先天性心脏病、支气管发育不良、肺大泡、肺脓肿、支气管扩张、其他系统性疾病患儿；鼻咽分泌物检测非RSV感染者。

1.2方 法

1.2.1鼻咽分泌物采集:一侧鼻腔咽部以下插入一次性无菌吸痰管快速吸取，将鼻咽分泌物置于2mL无菌生理盐水中稀释，进行病原学检测，先震荡混匀，将标本移至离心管中，500rmp，离心5min，弃上清，加入PBS 300μL吹打为悬液。

1.2.2免疫荧光法检测RSV:取25mL悬液于干燥玻片上，干燥箱干燥1h，加入冷丙酮溶液固定细胞，采用美国Chemicon公司呼吸道病毒检测试剂盒检修检测，在玻片上加入10μL荧光标记的呼吸道病毒单抗，37℃孵育30min，PBS洗3次，干燥后加入固定液，盖上盖玻片后于显微镜下观察，在200倍荧光显微镜下≥5个荧光细胞为RSV感染阳性。

1.2.3荧光定量PCR检测RSV分型:将鼻咽部分泌物用Trizol(美国Invitrogen公司)裂解充分后，加入200μL氯仿，震荡混匀，12000rpm离心10min，取上层液至新的EP管中，加入100μL异丙醇，充分震荡混匀后离心，弃上清，采用乙醇洗后离心，加入无酶水制为RNA，采用逆转录酶(南京诺唯赞公司)逆转录为cDNA，采用Xpert Xpress Flu/RSV Assay检测盒对RSV亚型检测，进行荧光定量PCR扩增(RT-PCR)，引物：RSV-AF：5’-AGATCACTTCTGTCATCCAGCAA-3’、RSV-AR:5’-TTCTGCACATCATAATTAGGAG-3’，RSV-A探针:CACCATCCAACGGAGCACAGGAGAT，RSV-BF:5’-AAGATGCAAATCATAAATTCACAGGA-3’，RSV-BR:5’-TGATATCCAGCATCTTTAAGTA-3’，RSV-B探针：TTTCCCTTCCTAACCTGGACATA，反应条件：95℃ 30s 预变性，95℃ 10s，60℃ 30s，40个循环，37℃ 5S结束。S型扩增曲线为相应HSV亚型阳性，典型S型曲线设定阈值为循环次数CT值≤40。混合感染检测：采用荧光定量PCR对HSV阳性患儿进行流感病毒、副流感病毒、腺病毒、偏肺病毒、冠状病毒、鼻病毒、博卡病毒等检测。

1.2.4观察指标:收集所有研究对象的一般临床资料(月龄、出生体重、性别、生产方式、足月儿、湿疹史、过敏史、喘息史)、流行特征(年份、年龄、季节、病情程度)、临床特点(发热、咳嗽、喘息、混合感染、病程和住院时间)及气候因素，病情程度依据2013年版社区获得性肺炎管理指南判断轻度和重度患儿[4]，气候因素包括平均气温(℃)、月总降雨量(mm)、月相对湿度(%)、月日照时间(h)、月平均风速(m/s)、空气污染PM2.5(μg/m3)、PM10(μg/m3)、O3(μg/m3)、SO2(μg/m3)、NO2(μg/m3)、CO(mg/m3)的含量。

2 结 果

2.1不同RSV亚型感染的一般临床资料分析:309例RSV患儿中，RSV-A患儿186例(60.19%)，RSV-B患儿123例(39.81%)，以RSV-A型为优势，两组患者在月龄、出生体重、性别、生产方式、足月儿、湿疹史、过敏史、喘息史等一般临床资料上比较差异无统计学意义(P均>0.05)，见表1。

表1 不同亚型RSV感染患儿一般临床资料比较n(%)

2.2不同 RSV亚型感染的流行特征分析:流行病学特征分析中，RSV-A和RSV-B组在不同年份、不同季节上差异有统计学意义(P均<0.05)，2018年和2019年以RSV-B感染为优势，2020年以RSV-A感染为优势，RSV-A和RSV-B感染患儿以3岁以内、冬春季感染和轻度症状为主，RSV-A和RSV-B组在不同月龄、病情程度上差异无统计学意义(P均>0.05)，见表2。

表2 不同亚型RSV感染患儿流行病学特征分析n(%)

2.3不同 RSV亚型感染的临床特点分析:临床特点分析中，RSV-A和RSV-B组在发热、咳嗽、喘息、混合感染等临床症状、病程及住院时间上差异无统计学意义(P均>0.05)，见表3。

表3 不同亚型RSV感染患儿临床特点

2.4不同RSV亚型感染与气候因素的相关性分析:经Spearman相关性分析示，RSV-A感染与PM2.5、PM10、SO2、NO2、CO呈正相关(r=0.658，P<0.001；r=0.612，P=0.002；r=0.501，P=0.008；r=0.728，P=0.001；r=0.642，P<0.001)，与平均气温、月总降雨量、月平均风速及O3呈负相关(r=-0.592，P=0.001；r=-0.502，P=0.005；r=-0.618，P=0.002；r=-0.654，P<0.001)，与月相对湿度、月日照时间无明显相关性(P>0.005)；RSV-B感染与CO呈正相关(r=0.559，P<0.001)，与月平均温度、月总降雨量及O3呈负相关(r=-0.581，P=0.001；r=-0.368，P=0.025；r=-0.598，P<0.001)；与月相对湿度、月日照时间、月平均风速、PM2.5、PM10、SO2、NO2无明显相关性(P>0.05)，见表4。

表4 不同亚型RSV感染患儿与气候因素的Spearman相关性分析

3 讨 论

RSV是导致婴幼儿ALRTIs的主要病因，主要表现为毛细支气管炎、间质性肺炎和哮喘急性发作，由于婴幼儿免疫功能相对薄弱，发生感染机率增加，易导致暴发流行和重复感染，而RSV的反复感染最为常见，尤其是2岁以内儿童至少经历过一次RSV感染[5]。RSV属于副黏病毒科的肺病，由基质蛋白、疏水性小蛋白和糖基化表面蛋白(F蛋白和G蛋白)等构成的包膜，可根据G蛋白的记忆特性和对抗体的反应，可分为RSV-A和RSV-B型[6]。近年来，世界范围内流行的RSV-A株为ON1基因型，RSV-B株为BA基因型[7]。不同国家及地区RSV感染存在一定特征，因此，本研究通过分析海南地区不同亚型RSV感染的流行特征、临床特点及气候特征，为该病的防治提供重要的临床流行病学特征。

本研究中，分析了2018年至2020年儿童RSV感染的流行病学特征，研究发现RSV-A患儿186例(60.19%)，RSV-B患儿123例(39.81%)，以RSV-A型为优势，与大部分国家支持的观点以RSV-A感染为流行株，可能是RSV-A患儿基因型内的遗传变异度高，致病性更高，易引起A亚型的流行[8]。通过不同年龄段分析不同亚型RSV感染的流行特征中，2018年和2019年以RSV-B感染为优势，2020年以RSV-A感染为优势，冬春季感染为主，表明RSV存在两亚型交叉循环感染趋势，在每个流行季以一个亚型为优势群，而发病主要集中在春秋季。另外，RSV-A和RSV-B感染患儿以3岁以内感染为主，尤其是1岁以内婴幼儿感染占72.49%(224/309)，但RSV-A和RSV-B组在不同月龄上无显著差异，与既往研究报道存在一致性[9,10]。可见，RSV感染好发于小年龄的婴幼儿，可能是婴幼儿各系统尚未发育完全，免疫系统尚不成熟，针对融合蛋白F和吸附蛋白G的IgA、IgM、IgG等抗体较少，而胎儿通过胎盘传递的母体IgG抗体不足，机体免疫力低下，易引起RSV感染增加[11]。

既往研究提示，不同亚型RSV感染所引起的病情严重度存在差异，而不同地区报道存在不一致性[11]。在本研究中，以轻度症状为主，RSV-B型病情严重度稍高，但两组间在病情严重度上尚未达到统计学意义。在临床特点分析中，相对较高比例的患者出现咳嗽和喘息等症状，发热、混合感染症状少见，但两组不同亚型RSV感染中在发热、咳嗽、喘息、混合感染等临床症状、病程及住院时间上无显著差异，今后需进一步扩大样本量和多中心进行临床特点分析，以及分析不同亚型RSV感染的基因型特点。

研究表明，RSV流行与气温、降水等气候特征密切相关，而不同亚型RSV感染与气温、降雨量、日照时间及风速存在相关性[12]。海南地区处于热带地区，四季温差小，常年日照时间长，夏季高温湿热，低风速和降雨量较多，全年相对湿度变化不大，冬春季节温度有所降低可引起上呼吸道黏膜血管收缩，纤毛摆动下降，气道分泌物的排除下降，易导致RSV感染。大气中O3是一种强氧化剂，可与RSV发生反应，阻止病毒辅助，可将紫外线转化为热能，具有保护作用。SO2长期接触可引起气道黏膜水肿、渗出增多，有利于RSV的粘附复制。空间中PM2.5、PM10颗粒物质易在肺内沉积，可导致呼吸道黏膜破坏，造成感染几率增加。本研究发现RSV-A感染与气温、降雨量、风速和O3呈负相关，与空气PM2.5、PM10、SO2、NO2、CO呈正相关，RSV-B感染与CO呈正相关，与月平均温度、月总降雨量及O3呈负相关，提示不同亚型RSV-A感染与气候特征存在明显相关性。

综上，RSV-B感染在2018年和2019年流行，RSV-A感染在2020年流行，RSV-A和RSV-B感染患儿以3岁以内、冬春季感染和轻度症状为主，主要表现为咳嗽和喘息等临床症状，不同亚型RSV感染与气候环境因素存在相关性，RSV-A与气温、降雨量、风速和空气质量相关性，RSV主要与气温、降雨量、O3及CO相关。这些不同亚型RSV感染的2018年至2020年RSV感染的流行病学、临床特征及气候特点，为早期防控RSV感染患儿提供重要的理论依据。