血红蛋白电泳在地中海贫血筛查中的应用价值

张湘，梁庄严（通信作者）

1 潮州市湘桥区妇幼保健院检验科 （广东潮州 521000）；2 广东医科大学顺德妇女儿童医院检验科 （广东佛山 528000）

地中海贫血的发病机制为遗传基因缺陷，属于常见的遗传性疾病[1]。对于该病患者，目前临床缺乏有效的治疗方法，患者需依靠输血改善贫血症状，导致其家庭负担较大，因此，尽早筛查地中海贫血对减少地中海贫血患儿的出生具有重要意义[2]。基因检测为地中海贫血的诊断金标准，但检测费用相对较高，检测耗时相对较长，导致其推广存在一定局限性。既往研究报道，血红蛋白（hemoglobin，Hb）电泳诊断地中海贫血的灵敏度和特异度较高，具有重要的临床诊断价值[3]。本研究随机选择1 000 例行地中海贫血筛查的患者作为研究对象，均予以Hb 电泳检测，对结果异常的患者行地中海贫血基因检测，并以基因检测结果为金标准，分析Hb 电泳的诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选择2017年12月至2019年12月于潮州市湘桥区妇幼保健院检验科进行地中海贫血筛查的1 000例患者作为研究对象，其中男533例，女467例；年龄19～50岁，平均（29.15±4.51）岁；已婚440例，未婚528例，离异32例；受教育年限2～15年，平均（8.15±1.37）年。

纳入标准：年龄>18岁；语言及自主行为正常；签署知情同意书。排除标准：凝血功能障碍；合并白血病及多发性骨髓瘤等血液系统疾病；拒绝参与研究。

1.2 方法

患者均被抽取两管2 ml 静脉血，分别用于Hb 电泳检测和地中海贫血基因检测。

采用全自动Hb 电泳仪（伯乐生物科技有限公司，型号Bio-Rad）、扫描仪（北京录典世纪科技有限公司，型号LD-FI10MZ）、分析系统（北京君意华鑫科技有限公司）及相关配套试剂（济南森蓝科贸有限公司）进行Hb 电泳检测，点样电泳（22.50±2.50）min 后，由仪器自动完成分离区带、染色、脱色、透明及烘干等操作。

Hb正常参考范围为：HbA≥95.0%， HbF<2.0%，HbA2为2.5%～3.5%。异常Hb条带判定标准为：在碱性条件下[pH为（8.5±0.1）]，蛋白移动速度为HbH、HbBart's、HbJ/K、HbA、HbF、HbS/D、HbA2/C/E；无上述条带的特殊Hb条带，可通过扫描比对发现异常条带。将HbA2<2.5%及（或）出现异常条带HbH、HbBart's的患者划分为疑似α-地中海贫血组，将HbA2>3.5%及（或）HbF≥2.0%的患者划分为疑似β-地中海贫血组。以上均进行地中海贫血基因检测，采用医院现有的地中海贫血基因检测试剂盒（深圳亚能生物科技有限公司）及相关配套仪器（东莞市龙晟生物科技有限公司）以聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）+导流杂交法进行检测[4]。

1.3 观察指标

以基因检测结果为金标准，分析Hb 电泳的诊断价值。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 Hb 电泳检测结果

1 0 0 0 例患者中，H b 电泳检测异常4 4 2 例，占比44.20%；其中HbA2<2.5%共计187例，HbA2>3.5%及（或）HbF≥2.0%共计251例，HbH、HbBart's异常条带分别有1例和3例。

异常条带和正常成人Hb 电泳条带的对比见图1，其中a 为HbF ≥2.0%和HbA2>3.5%；b 为检出异常条带HbH，同时HbA2减低；c 为HbA2>3.5%；d 为HbA2含量异常增高及含有异常血红蛋白HbC/E （可疑）；e 为存在大量HbF 的新生儿Hb 电泳条带；f 为含有少量HbF 的孕妇条带；g 为检测出异常条带HbBart's；h 为检测出异常血红蛋白HbJ/K；i 为HbA2<2.5%；j 为正常成人Hb 电泳条带。

图1 异常条带和正常成人Hb 电泳条带

2.2 Hb 电泳检测及基因检测结果

以基因检测结果为金标准，Hb电泳诊断地中海贫血的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确度分别为94.94%（300/316）、11.11%（14/126）、72.82%（300/412）、46.67%（14/30）、71.04%（314/442），见表1。

表1 Hb 电泳诊断地中海贫血及基因检测结果（例）

2.3 地中海贫血确诊患者的Hb 电泳结果比较

α-地中海贫血患者的HbA2及HbA 值均低于阴性者，差异均有统计学意义（P<0.05）；β-地中海贫血患者的HbA2值高于阴性者，HbA 值低于阴性者，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。

表2 地中海贫血确诊患者的Hb 电泳结果比较（%，±s）

表2 地中海贫血确诊患者的Hb 电泳结果比较（%，±s）

注：与未检出患者比较，aP<0.05；Hb 为血红蛋白

项目 例数 HbA2 HbA α-地中海贫血 121 2.61±0.77a 94.05±5.83a β-地中海贫血 195 5.97±3.48a 93.22±7.91a未检出 134 3.34±1.28 97.66±7.84

3 讨论

地中海贫血是临床上常见的遗传性疾病，我国南方地区的发病率明显高于北方地区[5]。该病是由于基因遗传缺陷致使Hb 中一种或多种珠蛋白链合成缺如或不足所导致的贫血或病理状态[6]，临床多根据症状和实验室检查结果并结合家族史进行诊断，但地中海贫血患者表现各异，常规诊断难度较大[7-8]；而且由于基因调控水平的差异，相同基因突变类型的地中海贫血患者的临床表现并不相同，因此多需要基因检测进行确诊，但基因检测耗时较长且检测费用高，导致其临床推广具有一定的局限性[9]。

地中海贫血主要包括α-地中海贫血和β-地中海贫血，前者的HbA2水平显著下降，而后者的HbA2和HbF 水平显著上升[10]。Hb 电泳是根据Hb 的等电点不同，将不同的Hb 成分分离出来后进行定量，该技术不仅能有效提示异常Hb，还可相对准确地提示地中海贫血的类型，且检测速度较快，价格较实惠，易被患者所接受[11]。有研究指出，Hb 电泳在地中海贫血筛查中具有良好的诊断价值，可以有效鉴别诊断地中海贫血及其他血红蛋白病[12]；但是对于α-地中海贫血，其诊断特异度欠佳，可能是由于α-地中海贫血的HbA2也存在减低[8]。施雄飞等[13]报道，Hb 电泳能够测定Hb 中HbA 及HbA2的构成比例，并可据此判断患者的地中海贫血分型。唐宝佳等[14]也指出，Hb 电泳技术诊断地中海贫血的准确率高达90.13%。

本研究结果显示，以基因检测结果为金标准，Hb 电泳诊断地中海贫血的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确度分别为94.94%、11.11%、72.82%、46.67%、71.04%；α-地中海贫血患者的HbA 及HbA2值均低于阴性者；β-地中海贫血者的HbA 值低于阴性者，HbA2值高于阴性者。

综上所述，在地中海贫血的筛查中，Hb 电泳具有良好的应用价值，可以作为常规筛查手段之一，但鉴于其还存在一定的假阳性及假阴性，因此需通过基因检测作进一步确诊。