宫颈HPV E6/E7mRNA联合TCT检查对未明确意义的非典型鳞状上皮细胞诊断意义

吴翡斐

浙江省金华市人民医院(321000)

近年来，随着宫颈细胞学筛查的广泛应用，癌前病变及宫颈癌患者可获得早诊断、早治疗，但随之而来的过度治疗及频繁复查，不仅增加患者经济负担及心理压力，且过度消耗医疗资源，尤其是未明确意义的非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)人群，目前无统一诊治标准。细胞学结果异常在宫颈癌筛查中占3%～7%，而ASCUS在细胞学异常中较常见[1]。薄层液基细胞学检查(TCT)具有灵敏度高及特异度高等优势，但仍存在一定不足，如病理学医生主观判断性较强、随访追踪难度大等[2]。宫颈人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7mRNA是一种新型检测方式，E6/E7为HPV感染后分子转化的主要因素，拷贝数>1copy/ml时(阳性)表示HPV病毒癌基因可能已整合并转录翻译，可反映病变进展。本研究就HPV E6/E7mRNA联合TCT在ASCUS的诊断意义进行分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年8月-2019年8月本院接受宫颈癌筛查妇女120例，年龄(42.9±6.3)岁(20～65)岁，月经初潮年龄(15.2±3.0)岁，性生活史(10.5±3.9)年；未绝经85例，绝经35例，均因外阴瘙痒、白带异常、接触性出血等症状就诊。纳入标准:①年龄20～65岁；②性生活史≥2年。排除标准:①既往有子宫切除术等宫颈外科手术史；②伴有心、肝、肾等重要脏器功能衰竭；③既往有宫颈上皮内瘤变、宫颈癌、急性生殖道炎症等疾病；④处于妊娠期或哺乳期；⑤伴有自身免疫性疾病或正接受免疫抑制治疗。纳入对象均知情同意，本研究经伦理委员会批准。

1.2 方法

使用采集刷常规收集宫颈脱落细胞置标本瓶中。取1:20保存液1ml行HPV DNA检测，其余保存液用于TCT检查。利用宫颈稳态检测试剂盒[科蒂亚(新乡)生物技术有限公司]测定HPV E6/E7mRNA表达。结果判定标准：HPV E6/E7mRNA拷贝数(测3次取平均值)<1copy/ml阴性，>1copy/ml阳性。利用全自动薄层液基细胞学检测系统(徐州市信达医疗电子设备有限公司)进行细胞学诊断。结果判断依据2014年子宫颈细胞学Bethesda分类系统(TBS)：未见上皮内病变、无恶性改变为TCT阴性，即未见肿瘤细胞(NILM)；不能明确意义的非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、鳞状细胞癌(SCC)，本研究中选择NILM(阴性)、ASCUS病例(阳性)。阴道镜检查及活检：于宫颈表面涂抹5%醋酸，1min后借助阴道镜对鳞状上皮、转化区及柱状上皮的血管、颜色及形态变化进行观察，根据出现醋白上皮的表面形态、厚度、浑浊度及范围等进行判断，具体操作参考相关文献[3]。所有组织学及细胞学阅片均由本院2名高年资病理医师担任，若出现不一致情况讨论统一结果。

1.3 观察指标

分析阴道镜活检结果，并将其结果作为金标准评估并对比HPV E6/E7mRNA、TCT单一及联合检查ASCUS的诊断效能，即灵敏度=真阳性例数/(真阳性例数+假阴性例数)×100%，特异度=真阴性例数/(真阴性例数+假阳性例数)×100%，准确度=(真阳性例数+真阴性例数)/总例数×100%。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0数据处理。计数资料用(%)表示，比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 阴道镜活检结果

120例宫颈癌筛查者中，经阴道镜活检确诊为ASCUS 52例，NILM 68例。ASCUS的52例中，慢性宫颈炎26例(50.0%)、LSIL17例(32.7%)、HSIL8例(15.4%)和宫颈癌1例(1.9%)。

2.2 诊断效能

以阴道镜活检结果为金标准，E6/E7mRNA+TCT对ASCUS的诊断敏感度、特异度、准确度、阳性预测值及阴性预测值均高于E6/E7mRNA、TCT单一检测 (P<0.05)。见表1、表2。

表1 各检测方法与阴道镜活检结果对比(例)

表2 各检测方法诊断ASCUS的效能[% (例)]

3 讨论

作为子宫颈细胞学Bethesda分类系统(TBS)中的描述性诊断之一，ASCUS涵盖了几乎所有宫颈病变过程，如炎症、低及高级别病变、浸润癌等[4]。ASCUS伴有进展为宫颈癌的风险。因此，早期筛查、早期治疗在预防宫颈癌前病变及宫颈癌发生中尤为重要。

TCT具有宫颈异常细胞检出率高、标本满意度高、操作简单及妇女接受度高等特点，可明显减少标本中粘液、血液及炎症等组织残迹，细胞标本获得率较高；此外，还可检出病毒、滴虫、霉菌、衣原体等诸多微生物感染，已成为ASCUS的主要诊断方式[5]。HPV DNA在良性宫颈病变中常以游离状态存在，而以整合状态存在于恶性病变中。在机体免疫力降低及HPV持续感染下，HPV基因组整合于宿主细胞染色体的脆弱区中，导致宿主细胞的DNA受损应答，造成E6/E7两种癌基因蛋白表达过度。而HPV E6/E7为关键致癌基因，其病毒载量变化与宫颈癌发生进展均密切相关。其中E6可与抑癌基因P53相结合，并抑制P53，抑制细胞凋亡逃逸免疫监视，阻断细胞周期凋亡，进而促进肿瘤细胞的增殖及扩散，增加癌变风险；E7可抑制pRB抑癌基因，激活端力酶活性，导致肿瘤细胞异常增殖，最终造成细胞周期失控，转化为癌细胞[6]。

本研究中，HPV E6/E7mRNA检测ASCUS的特异度(76.5%)略高于TCT，提示可作为弥补TCT的辅助检查方式：①若TCT为阴性，HPV E6/E7mRNA拷贝数较高时，可行阴道镜活检；②若TCT为阴性，HPV E6/E7mRNA拷贝数较低时，可随访或多次复查TCT；③若二者均为阳性，则进一步接受组织学宫颈活检[7]。有研究发现ASCUS病例中，慢性炎症、低度病变、高度病变及癌分别占比60%、20%、<5%及<1%[8]。本研究中，经活检组织病理确诊为ASCUS的 52例患者中，慢性宫颈炎、LSIL、HSIL和宫颈癌各占50.0%、LSIL32.7%、HSIL15.4%和宫颈癌1.9%，与上述报道数据接近。本研究发现，以活检组织病理结果为金标准，E6/E7mRNA+TCT联合检测对ASCUS的诊断灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值及阴性预测值均高于单一检测，联合检查在ASCUS人群分流中具有较高的诊断效能，可提升疾病诊断准确率。

综上所述，HPV E6/E7mRNA、TCT检查在ASCUS有一定诊断意义，二者联合诊断效能更高，可为临床诊断治疗提供更多的参考依据，提高宫颈癌早期病变的筛查准确率。