高效液相色谱法测定隐形眼镜护理液中聚乙烯吡咯烷酮

徐萍华，张莉，韩银，鲍娇慧，诸丹，徐畅

（浙江省医疗器械检验研究院，杭州 310018）

聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrrolidone，简称为PVP）是一种非离子型高分子化合物，是N-乙烯基酰胺类聚合物中有特色且被研究得最深、最广泛的精细化学品品种之一。PVP 作为一种合成水溶性高分子化合物，具有水溶性高分子化合物的一般性质，如胶体保护作用、成膜性、粘结性、吸湿性、增溶或凝聚作用。但PVP 最具特色的是其优异的溶解性能及生理相容性［1-10］，也因此倍受人们重视。PVP 不参与人体新陈代谢，又具有优良的生物相容性，对皮肤、粘膜、眼等不形成任何刺激。PVP用于隐形眼镜，可增加镜片的亲水性和润滑性，这使得PVP 在隐形眼镜护理液中得到了广泛应用。

GB 19192—2003 《角膜接触镜护理液卫生要求》第4 条明确提出对角膜接触镜护理液有效成分含量检测的技术要求［11］。聚乙烯吡咯烷酮作为隐形眼镜护理液的有效成分之一，应明确其实际加入的有效量，并建立有效、快捷、准确的分析测定方法。

目前PVP 含量的测定方法主要有紫外分光光度法［12-14］、凝胶色谱检测法［15-16］，但是这些方法的灵敏度不高，方法条件复杂，操作过程繁琐，且干扰不易消除。角膜接触镜护理液中基体复杂，样品的杂质峰干扰相对严重，难以准确定量，目前此样品尚无有效的检测方法。笔者采用SAX 色谱柱对隐形眼镜护理液样品进行分离，在220 nm 波长处进行PVP 的定量分析，经过一系列方法学试验验证，证明该方法准确、简单、高效。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

液相色谱仪：U 3000 型，美国赛默飞世尔科技公司。

紫外分光光度计：UV2550 型，日本岛津仪器有限公司。

超纯水机：MC24T30CN 型，出水电阻率为18.2 MΩ，默克密理博（中国）有限公司。

电子天平：ME104E 型，感量为0.1 mg，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司。

氯化钠：色谱纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

PVP 对照品：纯度（质量分数）不小于99.0%，美国Sigma Aldrich 公司。

角膜接触镜护理液样品：市售。

1.2 仪器工作条件

检测器：二极管阵列检测器；色谱柱：Oligo-SAX 强阴离子交换柱（150 mm×4.6 mm，5 μm，美国赛默飞世尔科技公司）；流动相：20 mmol／L 氯化钠 水溶液；流量：1.0 mL／min；柱温：30 ℃；波长：220 nm；进样体积：10 μL。

1.3 样品处理

根据角膜接触镜护理液样品中PVP 的标示含量，若PVP 标示含量在0.01～0.5 mg／mL 之间，可直接进样；若PVP 标示含量大于0.5 mg／mL，取适量护理液样品，用超纯水稀释至约0.05 mg／mL，作为供试液，待测。

1.4 溶液配制

PVP 标准溶液：准确称取PVP 对照品约0.1 g，用超纯水配成1 mg／mL 的储备液。

PVP 系列标准工作溶液：采用逐级稀释法，用超纯水配制PVP质量浓度分别为0.01、0.025、0.050、0.10、0.25、0.50 mg／mL 的系列标准工作溶液。

2 结果与讨论

2.1 仪器工作条件的优化

2.1.1 色谱柱

常规检测中，一般采用普通的C18反相色谱柱进行物质分离，而大分子量的样品，采用凝胶尺寸排阻色谱进行分离。试验考察了TSK—Gelα3000 型亲水性凝胶色谱柱(300 mm×7.8 mm，7 μm，日本TSK 公司)和Oligo-SAX 强阴离子交换柱的分离效果，结果发现，采用TSK—Gelα3000 型凝胶色谱柱进行分离时，峰形拖尾严重且不对称，而在Oligo-SAX 强阴离子交换色谱柱下，PVP 能实现完好的分离，且无拖尾现象产生。因此采用Oligo-SAX 强阴离子交换柱进行检测分析，可快速有效地分离PVP。

2.1.2 流动相

当采用纯水作为流动相时，色谱峰虽能分离，但出现拖尾现象，因此需要配制一定的缓冲溶液对PVP 进行洗脱。试验采用氯化钠溶液作为流动相，考察氯化钠的质量浓度分别为0、10、20、50、100 mmol／L 时对PVP 含量测定的影响，结果发现当溶液中氯化钠的质量浓度为20 mmol／L 时，拖尾现象消失，但随着氯化钠浓度的增大，PVP 的分离没有其它变化。为了延长色谱柱的寿命，宜选用较低浓度的流动相，因此，采用20 mmol／L 氯化钠溶液作为流动相较为适宜。

2.1.3 检测波长

分别取PVP 标准工作溶液与空白基质溶液（按照隐形眼镜护理液的配方，配制不含PVP 的隐形护理液作为空白基质溶液），在波长为200～300 nm 范围内进行扫描，结果显示PVP 在波长220 nm 附近有较大吸收，且空白基质溶液吸收较小，因此选择220 nm 作为PVP 含量的检测波长。

图1 PVP 标准工作溶液与空白基质溶液紫外吸收图

2.2 色谱行为

按照1.2 仪器工作条件，对0.05 mg／mL PVP标准溶液和待测护理液的供试液进行测定，色谱图分别见图2 和图3。由图2 和图3 可知，PVP 的保留时间为0.933 min。

图2 PVP 标准溶液色谱图

2.3 基质效应

常规护理液中主要有消毒剂（如聚胺丙基双胍等）、清洁剂（如泊洛沙姆）、螯合剂（如乙二胺四乙酸二钠盐）、保湿润滑剂（羟丙基甲纤维素、透明质酸酸钠等）及其它缓冲盐溶液，这些添加成分均可能对PVP 的测定产生影响［17-18］。按照1.2 仪器工作条件，对空白基质溶液进行测定（图4），并与PVP 标准溶液图谱（图2）进行对照，在目标物峰位置处无明显干扰，表明该护理液中其它成分不影响PVP 含量的测定，方法具有专属性。

图4 空白基质溶液色谱图

2.4 线性方程与检出限

在1.2 仪器工作条件下，分别测定0.01、0.025、0.050、0.10、0.25、0.50 mg／mL 的PVP 系列标准工作溶液，以PVP 的质量浓度（x）为横坐标、色谱峰面积（y）为纵坐标，绘制标准工作曲线，计算线性回归方程和相关系数。以3 倍信噪比（S／N=3）对应的浓度值作为检出限，10 倍信噪比（S／N=10）对应的浓度值作为定量限。PVP 的线性范围、线性方程、相关系数、检出限和定量限见表1。由表1 可知，PVP 的质量浓度在0.01～0.5 mg／mL 范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.999 0，检出限为0.000 3 mg／mL，定量限为0.001 mg／mL，表明该方法灵敏度较高，适于定量。

表1 PVP 的线性范围、线性方程、相关系数、检出限和定量限

2.5 精密度试验

取适量隐形眼镜护理液样品，按照1.3 方法进行处理，在1.2 仪器工作条件下进行6 次平行测定，试验结果见表2。由表2 可知，6 次测定结果的相对标准偏差为1.2%，表明该方法具有较高的精密度，满足分析要求。

表2 精密度试验结果

2.6 重复性试验

取适量隐形眼镜护理液样品，按照1.3 方法进行处理，在1.2 仪器工作条件下，对该溶液分别进行隔日测定，测定6 次，试验结果见表3。由表3 可知，测定结果的相对标准偏差为1.7%，表明该方法具有较好的重复性。

表3 重复性试验结果

2.7 加标回收试验

按照所建方法，对已测的护理液样品进行3 种浓度水平的加标回收试验，计算PVP 的回收率和平均回收率，试验结果见表4。

表4 PVP 加标回收试验结果（n=6）

由表4 可知，加标样品中PVP 的回收率为90.1%～104%，平均回收率为98.4%，表明该法具有良好的准确度。

3 结语

隐形眼镜护理液中聚乙烯吡咯烷酮含量分析方法的建立，为生产企业产品质量控制提供了有效的科学依据，为后续行业内产品标准方法的制订提供了理论基础。相比较常规的凝胶色谱-示差检测法，本方法采用强阴离子交换柱分离，220 nm 波长下进行测定PVP 的含量，精密度及准确度良好，分离效果更好，灵敏度更高，专属性更强。