瑶药材串连珠质量标准研究

莫单丹，唐炳兰，龚小妹，欧春丽，王硕，周小雷，赵以民*（1.广西药用植物园，广西药用资源保护与遗传改良重点实验室，南宁 530023；2.广西药用植物园，广西壮族自治区中药资源智慧创制工程研究中心，南宁 530023）

串连珠为茜草科植物短刺虎刺Damnacanthus giganteus（Mak.）Nakai 的干燥根，别名岩石羊（灌阳）、半球莲（恭城）、树莲藕（临桂）、大黄沙[1-5]。短刺虎刺生于山地疏林或密林下和灌木丛中，主要分布于安徽、浙江、江西、福建、湖南、广东、广西、贵州、云南等省区[6-7]，在广西主要分布在恭城、阳朔、灌阳、罗城、环江、桂林、临桂、龙胜、那坡等地[2，8]。串连珠为瑶族民间习用药材，具有补气收敛止血、舒筋活血、补养气血、祛风除湿、安神止咳的功效，主要用于肾虚腰疼、遗精、贫血萎黄、瘰疬、骨结核、咳嗽、肝脾肿大、体弱血虚、月经不调、崩漏、白带、小儿疳积、风湿痹痛、黄疸、肠风下血、肝炎、肿瘤、神经衰弱、跌打损伤等症[2，7]。目前研究表明，串连珠主要化学成分是茜根定-1-甲醚、短刺虎刺素、8-羟基短刺虎刺素、5-羟基虎刺素-ω-乙基醚、8-羟基虎刺素-ω-乙基醚（1-甲氧基-2-乙氧甲基-3，8-二羟基蒽醌）[3，9]。现代药理研究表明串连珠具有抗肿瘤作用[3]。桂林灌阳县当地民间用串连珠治疗颈淋巴结核，对鼻咽癌、颈转移淋巴结有一定的疗效，且具有镇静、镇痛、抗炎、镇咳的作用[10]。串连珠为瑶族民间习用药材，但国家和地方标准均未收载，《广西壮族自治区瑶药材质量标准（第二卷）》拟收载该品种。因此，本研究通过对串连珠性状、显微及薄层色谱（TLC）进行鉴别，并对水分、总灰分、浸出物含量测定等项目进行研究，为该药材的质量控制提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

石蜡切片机（德国Leica RM2255）；HH-6数显恒温水浴锅[邦西仪器科技（上海）有限公司]；FA2004 电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；电子分析天平（CP2250D，Sartorius）； 超纯水仪（美国Millipore Milli-Q Academic）；DZTW 调温电热套（北京市永光明医疗仪器有限公司）；LEICA 生物显微（DM2000 LEICA/Germany）。

1.2 试药

硅胶GF254 薄层板（青岛海洋化工有限公司），甲醇、石油醚（60～90℃）、三氯甲烷等均为分析纯。串连珠10 个样品分别采于广西桂林市恭城瑶族自治县、灌阳县等地，经韦松基教授和黄云峰副研究员鉴定为茜草科植物短刺虎刺Damnacanthus giganteus（Mak.）Nakai，10 批样品的详细信息见表1。以CLZ-3 样品作为串连株的对照药材与其他样品进行对比；将样品干燥、粉碎处理，过40 目筛，备用。

表1 串连株样品信息Tab 1 Sample source information of Damnacanthus giganteus

2 方法与结果[11-13]

2.1 药材性状与显微特征

2.1.1 方法 药材性状通过对药材的形状、大小、颜色、断面、气、味等进行观察并描述分析。显微特征分别取药材根按石蜡切片法制作切片，取药材粉末按粉末制片法制作粉末片，在显微镜下观察拍照并描述。

2.1.2 药材性状 本品呈圆柱形，略弯曲，自然缢缩而呈念珠状，缢缩处常有表皮包被而不露出木部，直径4～9 mm。表面棕褐色，有不规则纵皱纹，横裂纹明显。质坚脆，易折断，断面皮部淡紫色或黄白色，木部黄白色。气微臭，味微甘，嚼之稍发黏（见图1）。

图1 串连株药材Fig 1 Crude drug of Damnacanthus giganteus

2.1.3 根横切面 木栓层为数列木栓细胞；皮层宽广，内外两侧均有石细胞单个或多个成群散在，直径30～80 μm，薄壁细胞可见草酸钙针晶束，长达150 μm；韧皮部窄，有的细胞含细小草酸钙针晶束，长30～50 μm；形成层呈环状；木质部导管呈放射状排列。（见图2）。

图2 串连珠根横切面显微图Fig 2 Cross section of Damnacanthus giganteus root

2.1.4 粉末特征 本品粉末灰棕褐色。草酸钙针晶束散在或存在于薄壁细胞中，针晶长30～150µm；石细胞棕黄色，类长方形、类椭圆形、或不规则形，长50～200 µm，宽15～50 µm，壁较厚，纹孔及孔沟明显；木纤维单个散离或成束，比较薄，可见点状纹孔；多见孔纹导管。木薄壁细胞类长方形、类椭圆形，木化，长47～200µm，宽29～34 µm，见图3。

图3 串连株粉末显微图Fig 3 Powder of Damnacanthus giganteus

2.2 薄层色谱鉴别

2.2.1 溶液的制备 取本品粉末2 g，加乙醇50 mL，超声处理（功率200 W，频率40 kHz）30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL 使溶解，用三氯甲烷萃取两次，每次10 mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加甲醇2 mL 使溶解，作为供试品溶液。另取串连株对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。

2.2.2 薄层色谱条件及结果 照薄层色谱法[《中国药典》2015年版四部通则0502]试验，吸取上述两种溶液各2～5 μL，分别点于同一硅胶GF254 薄层板上，以石油醚（60～90℃）-三氯甲烷-甲醇-水（8∶17∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点（见图4）。

图4 串连株样品TLC 图Fig 4 TLC chromatogram of Damnacanthus giganteus

2.3 水分、总灰分、酸不溶性灰分及浸出物的测定

2.3.1 测定方法 水分测定参照《中国药典》2015年版四部通则0832 水分测定法测定；总灰分、酸不溶性灰分测定参照《中国药典》2015年版四部通则2302 灰分测定法测定；浸出物参照《中国药典》2015年版四部通则2201 项下的冷浸法进行测定。

2.3.2 测定结果 10 批样品的水分、总灰分、酸不溶性灰分和浸出物的测定结果见表2。10批样品水分含量在7.91%～12.85%，总灰分含量在3.33%～5.58%，酸不溶性灰分含量在0.16%～0.76%，70%乙醇浸出物（冷浸法）含量在5.77%～11.08%。

表2 串连珠样品水分、总灰分、酸不溶性灰分及浸出物测定结果(n ＝3，%)Tab 2 Determination of moiture，ash，acid insoluble ash and extract of Damnacanthus giganteus (n ＝3，%)

3 讨论

目前，关于串连珠的化学成分、药理作用研究较少，其主要化学成分为蒽醌类，有抗肿瘤、镇静、镇痛、抗炎、镇咳的作用。串连珠为瑶族民间习用药材，其物质基础及作用机制研究还未见报道。经查阅文献和预试验，本研究未找到合适的指标成分用于薄层鉴别和含量测定，因此采用经专家鉴定的串连珠作为对照药材用于薄层鉴别。

薄层色谱鉴别比较了三氯甲烷-石油醚-甲醇-水（10∶5∶2∶1）、三氯甲烷-石油醚-甲醇-水（10∶5∶1∶1）、三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-水（20∶2∶1∶1）、三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-水（7∶2∶1∶1）等展开系统，经过反复试验确定以石油醚（60～90℃）-三氯甲烷-甲醇-水（8∶17∶2∶1）为展开剂，得到的薄层色谱斑点分离度较好。同时考察了不同厂家、不同类型预制板，不同展开温度和湿度，结果均表明本法的耐用性良好。

根据测定结果，考虑到串连珠药材为南方所产，而南方气候较为湿润，因此拟订水分不得过13.0%，总灰分不得过6.0%，酸不溶性灰分不得过1.0%；采用冷浸法和热浸法来进行试验，结果两者提取率相当，浸出溶剂的选择方面，采用不同浓度的乙醇和水作为溶剂来提取，结果不同浓度其浸出物含量不同，水溶性大于醇溶性浸出物含量，低浓度的乙醇浸出物含量较大，为了降低药材无效成分的溶出度，重点富集瑶药串连株蒽醌类和部分水溶性成分等主要活性成分，因此浸出物测定采用以70%乙醇作为溶剂的冷浸法，含量不得少于5.0%。本研究所建立的方法准确可靠，可为瑶药串连珠的质量评估、监管等提供参考。