实验室标准方法验证分析

郭彦秀

（晋中市水文水资源勘测站，山西 晋中 030600）

1 检测方法评价

随着科技的发展，水质监测实验室仪器设备越来越完善，利用大型仪器实现水质项目检测，需选择适用的现行有效的标准方法。在首次使用标准方法时，仅仅验证测试操作正确与否，是相对片面的，要先对此标准进行方法验证，以确定检测机构是否有能力，按此标准开展检测工作。

方法验证是评定检测机构是否有能力，在满足方法要求的情况下，开展检测活动的过程。首次使用标准方法前，检测机构应验证其在现有实验室条件（人员、设施设备、环境等)下，用该方法是否能获得令人满意的结果；当检测标准发生变更，变更内容涉及方法原理、环境设施、仪器设备、适用范围、操作方法时，需重新进行方法验证，证明其使用新标准的能力。

标准方法验证需对照标准进行，当标准内容对技术指标要求不明确时，要从人、机、料、法、环、测六方面做好验证工作，才能使标准方法都能满足要求。

2 方法验证步骤

方法验证的实施，需对照标准，根据本实验室现有情况，从人、机、料、法、环、测六个方面逐一进行验证。

2.1 人员验证

人员指完成整个实验过程所涉及的全部人员，一般指检测人员，涉及到样品采集时，也包括采样人员、抽样人员、收样人员及样品管理员等与化学检测相关的人员。人员方面应从数量、资质等方面进行验证。

在人员数量方面，同一检测项目至少应有两名上岗的检测人员，即确保双人上岗。

在人员资质方面，检测机构应验证检测人员是否具有本领域工作经历，是否熟悉和掌握此标准方法、仪器的操作、维护保养及期间核查，并培训上岗，是否被授权仪器操作并对其进行能力确认等。采样人员及其他相关人员，应验证其是否理解标准条款，是否对其进行能力确认并满足要求。所有人员的能力测试均可通过人员监督、比对等方式进行。

2.2 仪器设备验证

检验检测所需仪器设备，包括检测仪器、玻璃器皿及为确保满足检测环境条件而配备的监控设备。

检测机构应验证相关仪器设备是否满足方法要求，如判定仪器参数和性能等是否符合要求，仪器设备是否可溯源（是否检定或校准并确认合格）等。以色谱仪器为例，除确认仪器参数外，还应确认色谱柱是否符合要求。

2.3 检测耗材验证

检测耗材包括检测所需样品、试剂和标准物质（样品）。机构应验证检测样品的制备储存是否满足方法要求，管理是否科学；试剂纯度是否符合要求，是否验收合格；标准物质（样品）是否可溯源。

2.4 标准方法验证

机构应定期对所用标准方法进行查新，确保其为最新有效版本，即验证方法的有效性。实验室应对所选标准进行受控管理；标准如果足够详细，则可直接使用；若其内容对检测要求不够明确时，检测机构应制定相对应的作业指导书[1]。

2.5 环境验证

实验室环境条件，包括测试条件和样品、试剂的储存条件。机构应验证实验室环境条件（如温湿度等），是否能满足方法要求；实验室对环境条件的控制是否有效等。

实验室环境条件对检验检测结果有影响时，机构应配置相应的监控设备来监控环境条件，并做好监控记录[2]。

2.6 技术指标测试验证

当标准方法有明确技术指标要求时，按方法内容要求逐一进行验证；技术指标要求不明确的，做常用参数的验证，验证结果满足一般要求即可。

2.6.1 测试参数的选择

通过比较《检测和核准实验室能力认可准则在化学检测领域的应用说明》（CNAS-CL01-A002：2020）《环境监测分析方法标准制修订技术导则》（HJ168-2010）[3]、《合格评定化学分析方法确认和验证指南》（GB/T27417-2017）[4]等中对方法性能参数的说明，发现检出限、精密度、准确度是必不可少的参数。

方法验证参数涉及检出限、精密度、准确度及标准规定的其它参数，如测定下限、线性范围等。

2.6.2 常用参数测试验证过程

（1）线性范围（标准曲线）的验证

若方法对标准曲线制作有要求，按要求的浓度进行测定；若没有明确要求，可自行确定曲线浓度点，至少需要6个（包括零点），确保被测浓度在标准曲线线性范围内。

方法对线性回归方程的相关系数有要求的，测试结果应满足其要求。方法没有要求的，定性或半定量方法需满足：R≥0.98（R为曲线线性相关系数），定量方法则要满足：R≥0.99[5]。

（2）检出限的验证

目前常用的方法检出限测定法是低浓度加标法，即使用空白添加标准物质作为样品，按样品分析的全部步骤，平行测定7次以上，计算检出限。检出限的计算公式：

式中：MDL——方法检出限；

n——样品的平行测定次数；

t——自由度为n-1，置信度为99%时的t值，详见表1；

表1 t值表

S——n次平行测定的标准偏差。

（3）精密度的验证

精密度的确定，可采用标准样品或实际样品进行测定，一般用高、中、低三种不同浓度的标准样品，或1到3个同类型样品，分别平行测定6次以上，计算其相对标准偏差，与方法要求进行对比，判定验证结果。

（4）准确度的验证

方法准确度的确定，可直接用有证标物进行测定，也可通过对实际样品进行加标测定，具体按方法要求进行，方法无明确要求的，可以选择至少其中一种方法进行验证，若水利方法中无加标量及加标回收率范围要求的，参照水环境监测规范的相关要求。

若利用有证标准物质确定准确度，需对1～3个不同浓度的有证标准物质分别平行测定6次以上，计算相对误差。若利用实际样品加标确定准确度，需选择至少3个加标浓度，分别平行测定6次以上，计算加标回收率。

用以上测定结果对比方法要求，确定是否满足要求。

3 方法验证案例

如实验室新配备离子色谱仪一台，在经过方法选择及标准查新后，决定选用《水质无机阴离子（F-、Cl-、NO2-、Br-、NO3-、PO43-、SO32-、SO42-）的测定 离子色谱法》（HJ84-2016）现行有效的方法，用作氟离子的检测，在使用之前，需先做方法验证，方法验证内容见表2。

表2 氟离子检测HJ84-2016标准方法验证内容

4 总结

当检测人员对照标准，完成人、机、料、法、环、测六个方面的验证后，可将验证结果进行汇总，生成标准方法验证表，验证表是整个验证过程及结果最直观的反馈，内容需包括验证项目、使用的标准方法、方法有效性、适用范围、方法要求、结果的符合性确认信息、验证结论及上级审核意见等信息。

方法验证的过程和结果应形成报告，并能提供验证过程的相关原始记录及溯源文件，保证方法验证过程可追溯。