酒炙胡芦巴炮制工艺研究

付凌燕，聂姗姗，李梦瑶

（吉林省吉林市食品药品检验所，吉林 吉林 132000）

0 引言

胡芦巴为豆科植物胡芦巴（Trigonella foenum-graecum L.）的干燥成熟种子。夏季果实成熟时采割植株，晒干，打下种子，除去杂质。性温，味苦，归肾经，具有温肾、祛寒、止痛等功效[1]。临床主要用于肾脏虚冷，小腹冷痛，小肠疝气，寒湿脚气，是我国传统的温肾补阳药物。由于胡芦巴生品质坚硬，不易破碎。酒炙后易于粉碎，利于有效成分溶出，并且能增强温肾作用。

1 炮制历史沿革

1.1 古代炮制方法

胡芦巴始载于《嘉祐本草》，别名苦豆、香草、芦巴子，为豆科植物胡芦巴（Trigonella Foenum-graecum Linn.）的干燥成熟种子。性温，味苦，归肾经，具有温肾、祛寒、止痛等功效，临床主要用于肾脏虚冷，小腹冷痛，小肠疝气，寒湿脚气，是我国传统的温肾补阳药物。胡芦巴自宋代应用于临床至今已有近千年的历史，具有多种不同的炮制方法。在胡芦巴漫长的应用过程中，有关胡芦巴炮制的方法也得到了不断地发展和丰富。

1.2 现代炮制方法

胡芦巴现代多采用盐炙法，通过对历版《中国药典》《全国中药炮制规范》、各省、市等地方炮制规范收载的有关胡芦巴的炮制方法进行归纳整理可知，胡芦巴的炮制方法比较一致，全国各地的炮制方法主要为盐胡芦巴。

2 炮制工艺研究

胡芦巴药材现代的炮制方法中酒炒比较少见，《浙江省中药炮制规范2015年版》中收载的炮制方法为“取胡芦巴饮片，照酒炙法炒至表面深黄棕色时，取出，摊凉。用时捣碎”[2]。《福建省中药饮片炮制规范2012年版》中收载的炮制方法为“取净胡芦巴，照酒炙法炒干”[3]。《甘肃省中药炮制规范2009年版》中收载的炮制方法为“取净胡芦巴，用黄酒拌匀，稍闷润，置锅内，用文火加热，炒至表面深黄棕色，出锅，放凉，用时捣碎”[4]。《广东省中药材饮片加工炮制手册1977年版》中收载的炮制方法为“取净胡芦巴，每10斤加入酒2斤，拌匀，稍闷，使吸尽酒液，蒸2 h晒干或用文火炒至身干转黄色有香气时取出放冷，用时打碎”[5]。上述工艺火候仅表述为文火炒干，依靠主观判断，人为影响因素较大，易使饮片质量参差不齐。

2.1 评价指标的选择

胡芦巴原药材标准中收载了性状、鉴别、检查、浸出物及含量测定项，其中含量测定项以胡芦巴碱为测定指标。基于此，我们选择以胡芦巴的外观性状、浸出物和胡芦巴碱含量作为评价指标来筛选酒炒工艺参数，通过正交试验来确定最佳的黄酒加入量、黄酒闷润时间、炒制时间。

2.2 仪器与试药

高效液相色谱仪（Waters e2695，四元低压梯度泵，自动进样器、紫外检测器），色谱柱：Apollo C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），超声波清洗器（JCX-400Z型，山东省济宁市超声电子仪器厂）。胡芦巴碱对照品（纯度78.4%，中国食品药品检定研究院提供，批号：110883-201604 20 mg）。甲醇[色谱纯，霍尼韦尔贸易（上海）有限公司]，纯净水（吉林娃哈哈食品有限公司），冰醋酸（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）。CY-2型炒药机（河北安国东方制药机械厂）。

2.3 评价指标的测定方法

采用高效液相色谱法（《中国药典》2015年版，四部，通则0512）测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05%十二烷基磺酸钠溶液-冰醋酸（20:80:0.1）为流动相；检测波长为265 nm。理论板数按胡芦巴碱峰计算应不低于4000。按外标法以峰面积计算其含量（方法学考察见【含量测定】项下研究）。

2.4 炮制工艺的优化

2.4.1 药材净制

根据《中国药典》2015年版一部中胡芦巴标准要求，该药材净制的方法为除去杂质，洗净，干燥。故药材炒制之前需除去杂质，取净胡芦巴作为酒炒原材料。

2.4.2 单因素考察

根据查阅的文献及现有饮片质量标准记载，胡芦巴的酒炒制方法多为“加黄酒拌匀，闷透，文火加热，炒至有香气逸出”，故先以外观性状及气味为指标，选取黄酒加入量、黄酒闷润时间、炒制时间进行单因素考察。

2.4.2.1 黄酒加入量

选取同一批次胡芦巴药材5份，分别加入黄酒5%、10%、20%、30%、40%闷润4 h，记录胡芦巴的外观和气味。结果，黄酒加入5%时不能完全将样品润透，黄酒加入20%时样品已能完全润透。

2.4.2.2 黄酒闷润时间

选取同一批次胡芦巴药材5份，分别加入黄酒10%，闷润1 h、2 h、4 h、6 h、8 h记录胡芦巴的外观和气味。结果，闷润1 h样品不能完全润透，闷润4 h样品已能完全润透。

2.4.2.3 炒制时间

选取同一批次胡芦巴药材5份，加入黄酒10%，闷润4 h，置于适宜大小的炒锅内，于130 ℃温度下，分别炒30 min、40 min、50 min、60 min、70 min，同一频率翻炒均匀，取出后摊平，晾凉至室温，记录胡芦巴的外观和气味。结果，在同一温度下不同炒制时间饮片的外观性状及气味有所不同，炒制30 min，基本无香味，炒制40 min，稍有香气，炒制70 min以后，有炒糊的迹象，切开后断面颜色加深，尝之味苦，表明该温度下炒制药材明显变糊。

2.4.3 工艺参数正交试验考察

2.4.3.1 试验设计

采用L9（34）正交试验设计，用小型炒药锅开展酒炙胡芦巴炮制工艺优化研究，经单因素考察，针对黄酒加入量、闷润时间（h）、炒制时间（min）因素，以胡芦巴碱的含量和浸出物为评价指标，优选酒炙胡芦巴的最佳炮制工艺，实验结果如表1和表2。

表1 因素水平表

表2 正交试验表

2.4.3.2 试验结果分析

表2中，6号试验含量最高，9号试验浸出物量最高，可取用之，利用正交设计软件进行表计算分析，分辨出主次因素，预测更好的水平组合。

通过正交表可知，各因素对试验指标的影响主次顺序：闷润时间（h）>黄酒浓度（%）=炒制时间（min），根据方差分析数据显示各因素对胡芦巴碱含量无显著影响，综合极差和方差分析结果，以胡芦巴碱含量为评价指标，所以优水平组合A2B3C2即黄酒加入10%，闷润6 h，炒制50 min。

通过正交表可知，各因素对试验指标的影响主次顺序：炒制时间（min）>黄酒浓度（%）>顺闷润时间（h），根据方差分析数据显示各因素对胡芦巴碱含量无显著影响，综合极差和方差分析结果，以浸出物为评价指标，所以优水平组合A3B3C2即黄酒加入20%，闷润6 h，炒制50 min。

2.4.4 最佳工艺的确定

2.4.4.1 初选最优工艺条件

对胡芦巴碱含量（%） A2B3C2 （胡芦巴碱含量越高越好）。对浸出物含量（%） A3B3C2 （浸出物含量越高越好）。

2.4.4.2 综合平衡确定最优工艺

由于两个指标单独，分析出来的最优条件不一致，所以必须根据因素对两个指标影响的主次顺序，综合考虑确定出最优条件。对胡芦巴碱含量选A2为好，对浸出物量选A3为好，因为二者不一致，所以根据试验结果确定，当取A2时胡芦巴碱含量比选A3增加3.07%（有利），浸出物量比选A3下降1.19%（不利），当取A3时胡芦巴碱含量比选A2下降3.17%（不利），浸出物量比选A2增加1.17%（有利）。对“有利”部分A2>A3，对“不利”部分A2

2.4.5 最佳工艺的验证

根据确定的最佳炮制工艺，连续验证十批，考察外观、水分、灰分、浸出物、含量测定质控指标。结果表明，炮制工艺稳定，可进行下一步中试验证。

2.5 炮制工艺验证

将最终确定的酒炙胡芦巴生产工艺在吉林市国安药业饮片生产企业进行中试验证，生产企业具备中药饮片炮制工艺验证资质。经验证，本研究所确定的酒炙胡芦巴炮制工艺重现性好、生产工艺稳定，可作为胡芦巴药材酒炒的合理工艺，验证结论以及成品质量检验结果见表3。

表3 企业工艺验证结果（%）

3 结果与讨论

正交试验所用样品为1公斤，小试所用样品为2.5公斤，中试所用样品为30公斤，因为中试为模拟药厂实际生产情况，炮制样品数量增加12倍，炒制时间由正交试验的40 min增加到70 min左右，所以在进行酒炙胡芦巴时应以性状颜色为主要参照指标，以炒制到深黄棕色为最佳。

定性研究不能确定炮制对胡芦巴化学成分的研究，但是通过定量研究发现炮制前后胡芦巴碱含量略有降低。

胡芦巴的应用已经突破了传统的应用范围，但是胡芦巴饮片，尤其是胡芦巴炮制品，缺少必要的质量标准和量化的加工工艺，给胡芦巴的合理应用带来困难。中国药典虽然确定了胡芦巴的质量控制指标，但是胡芦巴碱仅能代表水溶性成分在加工过程中受到的影响，因为胡芦巴应用的另一个主要方向是提取甾体皂苷元，所以在考察胡芦巴的质量时还应该从脂溶性成分方面考虑，以更加合理全面的控制胡芦巴的质量，保证综合利用有稳定可靠的原料来源。