小叶莲木脂素类成分的研究

赵 晨， 孙彦君*， 陈豪杰， 韩瑞杰， 冯卫生*

(1.河南中医药大学呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心，河南 郑州 450046；2.河南中医药大学药学院, 河南 郑州 450046；3.河南省中药特色炮制技术工程研究中心，河南 郑州 450046)

小叶莲来源于小檗科桃儿七属植物桃儿七Sinopodophyllumhexandrum(Royle) Ying的干燥成熟的果实，收载于2015年版《中国药典》，性味平、甘，有小毒，作为传统藏药，具有活血调经的功效，常用于闭经、痛经、血瘀、难产、胎死腹中、胎盘不下等妇科病症[1]。前期研究表明，小叶莲中主要含有异戊烯基化黄酮类、芳基萘内酯型木脂素类、半日花烷型二萜类，其中以异戊烯基化黄酮类和芳基萘内酯型木脂素类为主[2-6]，而以鬼臼毒素为代表的芳基萘内酯型木脂素类化合物具有显著的抗肿瘤作用，鬼臼毒素结构修饰的产物依托泊苷和替尼泊苷，对乳腺癌、睾丸癌、小细胞肺癌、淋巴癌、儿童白血病等多种癌症均有良好的治疗效果[7]。小叶莲乙醇提取物对裸鼠移植性乳腺癌、小鼠移植性肝癌和艾氏腹水癌均具有较强的抑制作用[8]，但截至目前从中仅分离得到4个芳基萘内酯型木脂素类化合物。为了进一步揭示小叶莲药效物质基础，本实验对其木脂素类成分进行研究，从中分离得到14个化合物，其中化合物1～2、5、11、14为首次从该属植物中发现，3～4、8、12～13为首次从小叶莲中发现，并首次对1的核磁数据进行了归属。

1 材料

microTOF-Q 高分辨质谱仪、ARX-500核磁共振波谱仪 (瑞士Bruker公司)；制备型高效液相色谱仪(北京赛谱锐思科技有限公司)；半制备型C18色谱柱(250 mm×10 mm, 5 μm, 日本YMC公司)；薄层色谱硅胶GF254、柱色谱硅胶 (青岛海洋化工有限公司)；Sephadex LH-20凝胶色谱填料(美国Amersham Blosclences公司)；ODS色谱填料 (100 μm，日本YMC公司)；AB-8大孔吸附树脂(郑州勤实科技有限公司)。所用试剂均为分析纯(天津市四友精细化学品有限公司)。小叶莲采集于云南省德钦县升平镇，经河南中医药大学药学院生药学教研室董诚明教授鉴定为桃儿七属植物桃儿七Sinopodophyllumhexandrum(Royle)Ying干燥成熟果实，凭证标本(SE 20130929)保存于河南中医药大学药学院标本馆。

2 提取与分离

9 kg小叶莲粉末加20 L 95%乙醇回流提取3次，每次1 h，合并提取液，减压回收乙醇后加水混悬，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到各个萃取部位的浸膏。二氯甲烷萃取部位经硅胶柱分离，以石油醚-丙酮(100∶0、100∶5、100∶7、100∶30、100∶50、100∶70、 100∶100、0∶100)梯度洗脱，根据薄层色谱检识结果，得到11个组分A1～A11。A6组分利用ODS柱，以20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%及纯甲醇洗脱，每一梯度用500 mL溶剂，每100 mL为1个流分，共收集40个，即A6-1～A6-40，收集A6-18得化合物6(20 mg)，收集A6-22流分经重结晶得化合物2(5 mg)，收集A6-28流分经重结晶得化合物7(30 mg)，收集A6-31流分经重结晶得化合物9(200 mg)。A7组分利用Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脱，得到亚组分A7-1～A7-5，A7-3经制备型HPLC分离，经51%甲醇洗脱，得化合物1(6 mg)、3(15 mg)、10(11 mg)、11(8 mg)、14(5 mg)；亚组分A7-2经制备型HPLC，50%甲醇洗脱，得化合物8(26 mg)。A10组分利用Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脱，每20 mL为1个流分，共收集30个，即A10-1～A10-30，收集A10-7流分经重结晶得化合物12(14 mg)，收集A10-11流分经重结晶得化合物13(18 mg)。A11组分利用AB-8大孔吸附树脂柱，经20%、30%、50%、70%乙醇洗脱，每一梯度用300 mL溶剂，每50 mL为1个流分，共收集24个，即A11-1～A11-24，收集A11-14经重结晶得化合物4(11 mg)，收集A11-17经重结晶得化合物5(17 mg)。

3 结构鉴定

图1 化合物1的主要NOE和HMBC相关Fig.1 Key NOE and HMBC correlations of compound 1

化合物12：无色针晶(丙酮)。mp 285～287 ℃。ESI-MSm/z: 411.1[M+H]+,分子式C22H18O8。在UV 254和365 nm下呈蓝色荧光。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 7.61 (1H, s, H-5), 6.85 (1H, s, H-8), 6.16 (2H, s, -OCH2O-), 5.36 (2H, s, H-11), 6.52 (2H, s, H-2′, 6′), 3.72 (6H, s, 3′, 5′-OCH3), 3.76 (6H, s, 4′-OCH3), 10.40 (1H, s, 4-OH)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 119.3 (C-1), 122.5 (C-2), 130.4 (C-3), 145.9 (C-4), 108.0 (×2) (C-5,C-8), 148.9 (C-6), 148.5 (C-7), 131.0 (C-9), 131.1 (C-10), 66.8 (C-11), 169.6 (C-12), 124.8 (C-1′), 102.7 (×2) (C-2′, 6′), 152.6 (×2) (C-3′, 5′), 136.9 (C-4′), 56.3 (×2) (3′,5′-OCH3), 60.3 (4′-OCH3), 98.3 (-OCH2O-)。以上数据与文献[16]基本一致，故鉴定为去氢鬼臼毒素。

化合物13：无色针晶(丙酮)。mp 286～288 ℃。ESI-MSm/z: 397.1[M+H]+,分子式C21H16O8。在UV 254和365 nm下呈蓝色荧光。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ: 7.62 (1H, s, H-5), 6.91 (1H, s, H-8), 6.17 (2H, s, -OCH2O-), 5.36 (2H, s, H-11), 6.49 (2H, s, H-2′, 6′), 3.73 (6H, s, 3′,5′-OCH3), 10.35 (1H, brs, 4-OH), 8.47 (1H, brs, 4′-OH)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6)δ: 122.6 (C-1), 124.9 (C-2), 119.2 (C-3), 145.5(C-4), 108.2(×2)(C-5，C-8), 148.9 (C-6), 148.3 (C-7), 131.0 (C-9), 131.4 (C-10), 66.7 (C-11), 169.6 (C-12), 130.3 (C-1′), 102.9(×2)(C-2′, C-6′), 147.7 (C-3′, 5′), 135.2 (C-4′), 56.2 (×2) (3′,5′-OCH3), 98.2 (-OCH2O-)。以上数据与文献[16]基本一致，故鉴定为4′-去甲-去氢鬼臼毒素。

4 讨论

小叶莲作为藏族习用药材，用于治疗各种妇科疾病。本实验对小叶莲木脂素类化学成分进行提取分离与结构鉴定，共分离得到14个化合物，13个为芳基萘型木脂素类、1个为四氢呋喃型木脂素类，为进一步研究小叶莲的药效物质基础、制定其药材质量标准、扩大药用价值提供理论依据。