不同等级亳白芍药材及饮片的质量评价研究

李 芳 黄卫锋 汪海斌 周建理 黄艳梅 王德胜

1.国家中药材产品质量监督检验中心（安徽）仪器分析室，安徽亳州 236800；2.安徽省亳州市产品质量监督检验所质量技术部，安徽亳州 236800；3.安徽德昌药业股份有限公司质量部，安徽亳州 236800

白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactifloraPall.的干燥根[1]。白芍历来以安徽亳州、浙江杭州、四川中江为三大道地主产区，习称亳白芍、杭白芍、川白芍[2-5]。其中亳白芍种植产量大，且在栽培、采收、加工等有多方面研究，所以在临床上广泛使用[6-10]。将中药材及饮片分规格等级是中药材市场长期存在的现象[11-15]，根据药材与饮片的外观性状、规格，可将亳白芍按4 个等级（1～4 级）进行分类。本研究采用高效液相色谱法对4 个等级的亳白芍药材与饮片进行含量测定，结合理化指标与薄层鉴别对其进行质量评价，对合理规范亳白芍药材及饮片的生产与市场流通具有重要意义。

1 仪器与试药

Waters e2695 高效液相色谱仪（美国Waters 公司）；ATS 4 薄层色谱仪（瑞士CAMAG 公司）。所购买的样品经国家中药材产品质量监督检验中心（安徽）周建理教授鉴定均为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的根。芍药苷（批号：110736-201943，中国食品药品检定研究院）；硅胶G 板（青岛海洋化工有限公司）；甲醇和乙腈均为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 亳白芍药材及饮片不同等级的划分

参照文献[2,16-17]要求并结合市场情况，将亳白芍药材按中部直径划分不同等级，一级品＞1.5 cm，二级品1.2～1.5 cm，三级品0.8～＜1.2 cm，四级品＜0.8 cm。将亳白芍饮片按片径划分不同等级，一级品＞1.8 cm，二级品1.4～1.8 cm，三级品1.0～＜1.4 cm，四级品＜1.0 cm。

2.2 亳白芍药材及饮片理化指标分析

水分、总灰分、水溶性浸出物、二氧化硫残留量按照《中华人民共和国药典》（2020 年版）一部和四部[1,18]规定进行测定。《中华人民共和国药典》（2020 年版）一部[1]中规定白芍的水分不得过14.0%、总灰分不得过4.0%、二氧化硫残留量不得过400 mg/kg、浸出物不得少于22.0%、药材中芍药苷含量不少于1.6%、饮片中芍药苷含量不少于1.2%。结果表明，不同等级亳白芍药材及饮片的理化指标均符合规定。见表1～2。

表1 亳白芍药材检测结果

表2 亳白芍饮片检测结果

2.3 不同等级亳白芍药材的薄层色谱鉴别

按照《中华人民共和国药典》（2020 年版）一部[1]要求，取本品粉末0.5 g，加乙醇10 ml，振摇5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 ml 使溶解，为供试品溶液。取芍药苷对照品，加乙醇制成1 mg/ml 的溶液，为对照品溶液。按照《中华人民共和国药典》（2020 年版）薄层色谱法（四部通则0502）[18]，吸取上述两种溶液各10 μl，点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸（40∶5∶10∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。结果显示，样品与对照品相应位置上显相同颜色斑点。见图1。

图1 不同等级的亳白芍药材薄层色谱图

2.4 不同等级的亳白芍饮片的薄层色谱鉴别

处理方法同“2.3”项下。结果显示，样品与对照品相对应位置上显相同颜色斑点。见图2。

图2 不同等级的亳白芍饮片薄层色谱图

2.5 亳白芍中芍药苷的含量测定

2.5.1 色谱条件 色谱柱：Waters XBridge C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（14∶86）；流速：1.0 ml/min；检测波长：230 nm，柱温：30℃；进样量：10 μl。

2.5.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品，加甲醇溶解制成31.19 μg/ml 的对照品溶液，滤过，即得。

2.5.3 供试品溶液的制备 称取白芍中粉约0.1 g，精密称定，置50 ml 量瓶中，加稀乙醇35 ml，超声处理30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，滤过，取续滤液，即得。

2.6 方法学考察

2.6.1 标准曲线与线性范围考察 精密称取芍药苷对照品，置于量瓶中，用甲醇溶解定容，并分别逐级稀释制备成10、20、50、100、200 μg/ml 的对照品溶液，滤过进样，测定峰面积。以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得线性回归方程：Y=9859.7X+52660，r=0.9998，表明其在10～200 μg/ml 浓度范围内线性关系良好。

2.6.2 精密度试验 取“2.5.2”项下的对照品溶液，连续进样6 次，测定峰面积，计算相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）值为0.23%，表明精密度良好。

2.6.3 稳定性试验 取同一供试品溶液，制备方法同“2.5.3”项下，分别于0、2、6、10、12、24 h 进样，测定峰面积，计算RSD 值为0.74%，表明该溶液在24 h 内稳定性良好。

2.6.4 重复性试验 精密称取样品6 份，按照“2.5.3”中方法制备供试品溶液，测定峰面积，计算RSD 值为0.93%，表明该方法重复性良好。

2.6.5 加样回收率试验 称取已知含量的同一批样品6 份，分别按50%、100%、150%的3 个水平精密加入芍药苷。按“2.5.3”中方法制备供试品溶液，测定峰面积，计算平均加样回收率为100.64%，平均RSD 值为1.07%。见表3。表明该方法回收率较好。

表3 加样回收率试验结果（n=6）

2.7 不同等级亳白芍药材的含量测定

按照《中华人民共和国药典》（2020 年版）一部[1]白芍含量测定项下方法，对不同等级亳白芍药材进行含量测定。按照“2.5.1”中色谱条件测定，结果表明亳白芍药材的芍药苷含量有一定差异，其中二级品含量最高，一级品因存在严重硫熏现象，导致含量降低。见表1。

2.8 不同等级亳白芍饮片的含量测定

按照《中华人民共和国药典》（2020 年版）一部[1]白芍含量测定项下方法，对不同等级亳白芍药材进行含量测定。按照“2.5.1”中色谱条件测定，结果表明不同等级亳白芍饮片的芍药苷含量差异不大，说明不同等级亳白芍饮片可能是同一等级亳白芍药材的不同部位加工而来，导致含量变化小。见表2。

3 讨论

本研究对亳白芍的外观性状进行数字量化后划分了分级并进行质量评价。不同等级亳白芍药材浸出物与芍药苷含量存在一定差异，而不同等级亳白芍饮片浸出物有一定差异，与芍药苷含量没有直接相关性，这与相关文献[19-22]的内容是一致。可能与同一等级的亳白芍药材加工后分成不同等级的饮片有关。

本研究中一级品亳白芍药材二氧化硫残留量较高，提示市场上存在硫熏现象。有文献[23-25]提到亳白芍主成分的主要影响因素是栽培品种和采收年限，栽培品种和采收年限的不同导致亳白芍在生长过程中淀粉等的积累不同，导致含量有所差异。目前存在不同栽培品种混种的现象，而且有种植2～3 年就采收药材加工后进入市场。因此，栽培品种、采收年限和硫磺熏制等问题也会造成亳白芍的等级与样品中有效成分含量存在差异。

本研究亳白芍药材及饮片的样本量较少，而亳白芍化学成分复杂，因此不免存在一定的局限性。今后应从多指标成分含量测定、体内药效实验等多方面结合起来进一步研究。