全血过滤白细胞时间长短对血液质量的影响研究

卢少芬 杜明仪 谭晓颖 龙海燕 陈雪英 张琦 陈馥如 盘琳

[摘要]目的探討全血过滤白细胞时间长短对血液质量的影响。方法选取2020年4月至2021年3月广东省肇庆市中心血站使用上海输血技术有限公司生产的一次性使用去白细胞滤器血袋 T-200采集的200袋全血，按照其血袋说明书要求进行当天过滤操作，并对其过滤时间实施监控，分别按滤除时间为5 min、10 min、15 min、20 min 划分成四组，收集400份滤前及滤后血液样本作为研究对象，通过比较过滤前后的全血容量、白细胞计数、血红蛋白含量及储存期末溶血率等指标差异，分析全血过滤白细胞时间长短对血液质量的影响。结果①随着全血过滤白细胞时间的增加，过滤后血液容量无显著变化，差异无统计学意义（ P >0.05），但血液当中白细胞数量明显减少，差异有统计学意义（ P <0.05）;②随着全血过滤白细胞时间的增加，过滤后血液当中的血红蛋白含量无明显变化，差异无统计学意义（ P >0.05），但储存期末溶血率逐渐升高，差异有统计学意义（ P <0.05），过滤时间20 min 有出现储存期末溶血率>0.8%、质量检测不达标的情况。结论全血过滤时间长短对血液质量有明显的影响，为了保证去白细胞血液的制备质量，

200 ml 全血过滤白细胞时间最佳在10min，最长不宜超过20 min。[关键词]全血过滤;白细胞;容量;白细胞计数;血红蛋白;溶血率

[中图分类号] R457  [文献标识码] A   [文章编号]2095-0616（2021）23-0186-04

Study on the effect of filtration time of leukocyte in whole blood on blood quality

LU  Shaofen    DU  Mingyi    TAN  Xiaoying    LONG  Haiyan    CHEN  Xueying    ZHANG  QiCHEN  Furu    PAN  Lin

Central Blood Station of Zhaoqing City in Guangdong Province， Guangdong， Zhaoqing 526040， China

[Abstract] Objective To investigate the effect of filtration time of leukocyte in whole blood on blood quality. Methods A total of 200 bags of whole blood collected at the Central Blood Station of Zhaoqing City in Guangdong Province from April 2020 to March 2021， using the disposable leukocyte depletion filter blood bag T-200 produced by Shanghai Blood Transfusion Technology Co.， Ltd.， were filtered in the same day according to the instructions of the blood bag， and the filtration time was monitored. These collected bags were divided into 4 groups according to the filtration time of 5 min， 10 min， 15 min and 20 min. Collectively， 400 pre-filtration and post-filtration blood samples were collected as the objects. The differences of whole blood volume， leukocyte count， hemoglobin content and hemolysis rate at the end of storage were compared before and after filtration， and the effect of the filtration time of leukocyte in whole blood on blood quality was analyzed. Results ① With the increase of filtration time of leukocyte in whole blood， the blood volume did not change significantly after filtration， with no statistically significant difference （P >0.05）， but the leukocyte count in blood decreased significantly， with statistically significant difference （P <0.05）.② With the increase of filtration time of leukocyte in whole blood， the hemoglobin content in the whole blood had no significant change， with no statistically significant difference （P >0.05）， but the hemolysis rate at the end of the storage period gradually increased， with statistically significant difference （P <0.05）. After filtering for 20 min， the hemolysis rate at the end of storage period was more than 0.8%， and the quality did not meet the standard. Conclusion The length of whole blood filtration time has a significant effect on blood quality. In order to ensure the preparation quality of leukocyte-free blood， the best time to filter leukocytes from 200 ml of whole blood is 10 min and should not exceed 20 min.

[Key words] Whole blood filtration;Leukocyte; Volume;Leukocyte count;Hemoglobin;Hemolysis rate

过滤白细胞是输血界公认对临床输血有益的一项技术，国内许多血站及血液中心都开展了血液滤白的新技术和研究。目前去除血液中白细胞的方法有很多，其中以过滤法最为理想。过滤法指采用白细胞专用滤器滤除血液制剂中的白细胞，但滤除效果与所使用的滤器类型、血液制备方法、白细胞过滤时间等息息相关[1-2]。如何尽可能减少白细胞滤器对其他血液成分造成影响，同时又能最大限度去除血液中的白细胞，提高红细胞收集率，成为采供血机构共同关注的焦点。为提高去白细胞血液的制备质量，减少全血过滤失败或引起的溶血性报废，本研究通过建立全血过滤白细胞时间长短对血液质量的影响的研究课题，以期为临床安全用血和成分制备工作提供理论指导与参考借鉴，现报道如下。

1材料与方法

1.1仪器与试剂

一次性使用去白细胞滤器血袋 T-200（上海输血技术有限公司）、血液过滤管理仪（佛山沃塘医疗科技有限公司）、SE250热合机（韩国森通）、储血冰箱（日本三洋）、BC-3000Plus 全自动血液细胞分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）、722型光栅分光光度计（上海第三分析仪器厂）、HH-US-B 恒温水浴箱（金坛区金城春兰实验仪器厂）、CX31生物显微镜（OLYMPUS）、大容量Nageotte血细胞计数盘（德国进口）;血浆游离血红蛋白测定试剂盒、白细胞稀释液、血细胞分析用溶血剂、稀释液、冲洗液等，均在有效期内使用。

1.2方法

本研究经肇庆市中心血站学术委员会同意，以400份血液样本作为研究对象，选取2020年4月至2021年3月使用上海输血技术有限公司生产的一次性使用去白细胞滤器血袋 T-200，顺畅采集200 ml 全血，采集后置于2～6℃冰箱内3 h 以上，按照其血袋说明书要求进行当天过滤操作，并对其过滤时间实施监控。分别按滤除时间为5 min、10 min、15 min、20 min 划分成四组，每组含滤前全血及滤后全血样本各50份，称量过滤前和过滤后的全血重量，并做好标识。采用血细胞计数仪检测滤前和滤后的标本，测定滤前白细胞的含量和血红蛋白含量，以及滤后的血红蛋白含量和血细胞比容（hematocrit，Hct）;根据《血站技术操作规程》[3]要求，通过结晶紫染色液使白细胞着色，使用大容量Nageotte血细胞计数板方法，在显微镜下计数，检测滤过血液的白细胞残留量;使用游离血红蛋白测定试剂盒检测血浆游离血红蛋白的浓度，结合Hct计算出溶血率。本研究去白细胞全血质量控制项目和要求如下：外观肉眼观察应无色泽异常、溶血、凝块、气泡及重度乳糜等情况，血袋完好，并保留注满全血经热合的导管至少35 cm，血红蛋白含量≥18 g、白细胞残留量≤2.5×106个，储存期末溶血率<0.8%，无菌试验为无细菌生长。

1.3观察指标及评价标准

依据《全血及成分血质量要求》[4]中去白细胞全血质量控制项目和要求：来源于200 ml 全血;观察全血过滤白细胞过滤前后的血液容量、白细胞数量、血红蛋白含量、储存期末溶血率。

1.4统计学方法

采用 SPSS 24.0统计学软件进行数据分析，计量资料用（x ±s）表示，组间比较采用 t 检验，P <0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1全血过滤白细胞时间长短对血液容量及白细胞计数的影响

随着全血过滤白细胞时间的增加，过滤后血液容量无显著变化，差异无统计学意义（ P >0.05），但血液当中白细胞数量明显减少，差异有统计学意义（ P <0.05）。见表1。

2.2全血过滤白细胞时间长短对血红蛋白及储存期末溶血率的影响

随着全血过滤白细胞时间的增加，过滤后血液当中的血红蛋白含量无明显变化，差异无统计学意义（ P >0.05），但储存期末溶血率逐渐升高，差异有统计学意义（ P <0.05）;过滤时间在5 min、10 min、15 min 的200 ml 去白细胞全血均符合质量要求，过滤时间达20 min 有出现储存期末溶血率>0.8%、质量检测不达标的情况。见表2。

3讨论

近年来，肇庆市各临床医院对去白细胞血液的需求量不断增长，供需矛盾十分突出，据统计2020年去白细胞悬浮红细胞的临床用血总量为17213 U，而2015年仅为7357.5 U，五年的增幅为134%。从增幅情况来看，分析原因可能为：一是肇庆市地中海贫血患者的用血量及地中海贫血患者的数量均增加，二是去白细胞悬浮红细胞的临床应用更为广泛。肇庆市是广东省地中海贫血防控项目重点地区之一，目前我市登记在册的地中海贫血患儿已逾300多人，由于社会对地贫的防控措施和宣传不到位，地中海贫血患儿还在增加，尽管目前有造血干细胞移植等先进的治疗手段，但由于其治疗费用昂贵以及术后的各种并发症等，常使患者无法彻底得到根治，需要长期输血，而输注去白细胞血液在一定程度上减少同种异体输血反应及降低机体免疫功能的破坏等，对于有条件的地中海贫血患者是重要的输血治疗措施。同时人们对血液质量、输血治疗和输血安全有了更高层次的需求，在输血中引起的不良反应逐渐被重视，超过90%的输血不良反应与白细胞相关，如非溶血性发热性输血反应、HLA 同种异体免疫反应等[5-6]，同时白细胞还是一些嗜白细胞病毒如巨细胞病毒的载体，输注含白细胞的血液具有传染这些病毒的危险，严重威胁医疗技术安全及患者的生命健康[7-8]，临床医生也逐渐意识到输注去白细胞血液是提高临床用血安全和医疗质量的关键[9]。

实现安全输血对提高人民群众的健康水平具有巨大的社会效益，是每一位血液工作者追求的崇高目标。据文献报道，全血在储存过程中会发生白细胞死亡崩解，白细胞死亡崩解后能够分泌一些生物活性分子（如白介素、肿瘤坏死因子），这些生物活性分子会导致输血时发生过敏等不良反应，如果在血液保存前过滤白细胞不但可以让红细胞免受白细胞介导所致溶血的影响，提高血液保存过程中红细胞的质量，还可以降低输血过程中相关的不良反应[10-11]，而且不同的保存温度、滤材及放置时间等均会影响血液质量，但鲜有研究报道不同过滤白细胞时间对血液质量的影响[12-13]。本研究通过对全血过滤白细胞的时间实施监控，分析不同流速时间对血液质量的影响，以期找到最佳、最适宜的流速时间，及时采取干预措施，提高去白细胞血液的制备质量，减少全血过滤白细胞失败或引起的溶血性报废，避免血液资源的浪费。与本技术类似的是丁国良等研究表明，全血400 ml 白细胞滤除时间应不低于15 min。白细胞介素检测结果显示，第2天没有太多白细胞死亡，采血当天滤除和第2天滤除效果差异无统计学意义，只是不能得到新鲜冰冻血浆[14]。然而该研究仅针对“400 ml 血液滤除多长时间为最佳及新采集的血液什么时间滤除最好”进行了探讨，但在目前肇庆市大多数献血者的献血量仍为200 ml 为主。本研究主要是根据200 ml 全血去除白细胞的不同过滤时间来检测对血液质量的影响，采用的是上海输血技术有限公司生产的一次性使用去白细胞濾器血袋和当天滤除白细胞的制备方法，选择的研究对象是滤前及滤后的血液样本，尽量减少血液样本受其他因素影响的差异性，并对其制备的血液成分进行质量抽检，得出的数据更完整更具有说服力。虽然丁国良的方法相比本研究技术更节省时间，但对于滤前血液中的白细胞数量并没有监测，滤除时间与效果仍有待进一步验证。本研究通过400份血液样本（含滤前全血及滤后全血样本），按滤除时间为5 min、10 min、15 min、20 min 划分成四组，分别检测其滤前及滤后全血样本，项目包括血液容量、白细胞计数、血红蛋白含量、储存期末溶血率等，并进行数据比较分析，结果显示使用同一材质滤器血袋和滤前温度，四组滤后血液容量、血红蛋白含量比较虽然无明显变化，过滤时间在5 min、10 min、15 min 的200 ml 去白细胞全血均符合质量要求，但过滤时间达20 min 有出现储存期末溶血率>0.8%、质量检测不达标的情况。从表1、表2数据可以看出全血过滤时间长短对血液质量有显著影响，过滤时间过短会影响过滤效果，容易造成白细胞残留量过高、过滤效果差;过滤时间过长会影响储存期末溶血率，容易引起血浆溶血性报废，造成血液资源的浪费。研究认为200 ml 全血过滤时间最佳在10 min，最长不宜超过20 min，此时血液当中白细胞残留量、血红蛋白含量、储存期末溶血率均能维持在较好的质量控制范围，若超出20 min 应及时采取干预措施，因为流速过慢，可能会导致堵塞，亦有可能加大白细胞从滤网中漏出的风险，可能激活凝血系统，导致过滤后血液微小凝聚[15-16]。而在血液成分制备工作中发现，去白细胞全血经离心后肉眼观察血浆呈红色，再经二次离心后，血浆仍为红色报废的，往往全血过滤时间超过20 min。如果能发现过滤时间异常，血流过慢，及时查找原因，采取干预措施，可将损失降到最低。

综上所述，本研究通过全血过滤白细胞时间长短对血液质量的影响研究，找到最佳、最适宜的过滤时间，有利于提高去白细胞血液的制备质量，确保临床用血安全、有效，更能较好地避免血液资源浪费。由于血液去除白细胞技术比较复杂，影响因素较多，本研究仅对过滤时间长短进行了探索，存在一定的局限性，后续将进一步探讨血液温度、储存时间等对血液质量的影响，以期为进一步提升血液制备质量奠定更为全面的理论依据。

[参考文献]

[1]陳红霞，陈栋才.不同滤除白细胞的方法对悬浮红细胞多项指标的影响分析[J].青岛医药卫生，2020，52（4）：271-274.

[2]丁慧慧，施琳颖，陈敏，等.血站型去白细胞过滤器最适应用条件的探究[J].中国输血杂志，2020，33（5）：462-465.

[3]尚玉，邵小宝，周琳，等.白细胞滤器去除血液肿瘤细胞的实验研究[J].中国输血杂志，2021，34（5）：452-455.

[4]中华人民共和国卫生部.全血及成分血质量要求：GB18469-2012[S].北京：中华人民共和国卫生部，2012.

[5]王翠民，芦珊珊，兰烱采.输血不良反应的研究进展[J].中国输血杂志，2019，32（8）：840-844.

[6]张光宏，李玲，张文昭，等.输血患者不良反应的临床特点分析及预防措施研究[J].临床血液学杂志（输血与检验），2017，30（10）：802-804.

[7]洪缨.献血人群中巨细胞病毒感染与输血安全[J].中国输血杂志，2019，32（9）：975-980.

[8]黄楚雯，江华.地中海贫血治疗的研究进展[J].广东医学，2020，41（23）：2478-2482.

[9]周静.全血冷藏储存时间不同对制备去白悬浮红细胞质量的影响[J].中国输血杂志，2021，34（2）：132-134.

[10]欧斐，巩月英，张丽，等.不同全血过滤方法用于去白细胞血液制备的临床对照研究[J].现代生物医学进展，2019，19（9）：1774-1777.

[11]于志强，周静，朱丽莉.过滤去除白细胞血液质量控制和临床效果评价[J].临床研究，2018，26（10）：151-152.

[12]陈栋才，罗玫玲，李雪群.白细胞悬浮红细胞与悬浮红细胞储存期内溶血率的比较[J].哈尔滨医药，2018，38（3）：275-276.

[13]汤群.白细胞过滤对输血反应及凝血指标的影响[J].医疗装备，2018，31（8）：62-63.

[14]丁国良，朱琳，明文娟.不同过滤时间对血液去除白细胞效果的影响[J].中国输血杂志，2006（6）：475-477.

[15]王瑞含，彭娟，刘久波.白细胞过滤器减少输血不良反应的效果观察[J].湖北医药学院学报，2020，39（6）：599-601.

[16]梁树聪，黄燕娟.非传染性输血不良反应的临床研究进展[J].微创医学，2020，15（6）：779-780.

（收稿日期：2021-04-27）