威灵仙与东北铁线莲酒炙前后抗炎镇痛比较研究

唐婷婷，胡佳惠，刘佳欣，孙翔宇，王巍，王静

(辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600)

毛茛科植物威灵仙(ClematischinensisOsbeck)、棉团铁线莲(ClematishexapetalaPall.)及东北铁线莲(ClematismanshuricaRupr.)的干燥根和根茎均为中药威灵仙的正规来源[1]。中药威灵仙入药始载于《新修本草》，性味辛、咸、温，性猛善走，通行十二经脉，具有很好的祛风湿、通经止痹痛的功效[2]。《仙授理伤续断秘方》中提出威灵仙“治痛(腰痛不可忍)”[3]。有文献报道，原植物威灵仙和东北铁线莲主要化学成分均为皂苷类，而棉团铁线莲主要化学成分为黄酮类，药理研究表明，威灵仙和东北铁线莲主要具有抗炎、镇痛作用[4]。但其中威灵仙特有的三萜皂苷有32种，东北铁线莲特有的三萜皂苷有11种[5]，由于化学成分决定生物效应，所以威灵仙和东北铁线莲可能存在药效的差异。因此，本研究比较了威灵仙和东北铁线莲酒炙前后在抗炎镇痛方面的药理效应，以期为新药的进一步开发研究提供理论依据。

1 材料

1.1 试验药物 威灵仙、东北铁线莲均采自辽宁省营口市盖州，经辽宁中医药大学中药鉴定教研室翟延君教授鉴定均为正品；阿司匹林肠溶片(北京曙光药业有限责任公司，批号：20140607)；黄酒(山东即墨黄酒厂有限公司，批号：20160203)。

1.2 动物 SPF级昆明小鼠，300只，雌雄各半[购自辽宁长生生物技术有限公司，许可证号为：SCXK(辽)2015-0001]，体质量(20±2)g。

1.3 试剂 二甲苯、冰醋酸(成都市科龙化工试剂厂，化学级，批号分别为2010111110、2014020801)。

1.4 仪器 FA1004B分析天平(上海精密科学仪器有限公司)。

2 方法与结果

2.1 酒炙威灵仙和酒炙东北铁线莲的制备 称取威灵仙或东北铁线莲适量，加入黄酒拌匀，焖润，待酒被吸尽后，置炒制容器内，文火加热，炒干至颜色加深，取出晾凉，待用[6]。

2.2 供试品溶液的制备 分别称取威灵仙和东北铁线莲生品及酒炙品适量，加8倍量、6倍量水，水煎提取两次，每次1 h，合并滤液，浓缩至浓度为0.065、0.13及0.26 g·mL-1的低、中、高浓度给药溶液(以生药量计)，备用[6]；取阿司匹林肠溶片，用研钵研磨成细粉状，称取粉末适量，加水制成0.01 g·mL-1的阿司匹林混悬液[7]。

2.3 耳肿胀抗炎实验 小鼠随机分成15组，每组10只。分别是空白组、模型组、阿司匹林组、生品威灵仙高、中、低组，酒炙威灵仙高、中、低组，生品东北铁线莲高、中、低组，酒炙东北铁线莲高、中、低组。阿司匹林组灌胃阿司匹林悬浊液0.4 mL/20 g，生品威灵仙高、中、低组，酒炙威灵仙高、中、低组，生品东北铁线莲高、中、低组，酒炙东北铁线莲高、中、低组分别灌胃相应给药溶液0.4 mL/20 g，空白组和模型组灌胃等量的水，各组均连续灌胃给药7 d。除空白组外，其余各组小鼠末次给药1 h后，于右耳前后两面涂抹20 μL二甲苯致炎。1 h后脱颈椎处死小鼠，用直径8 mm的打孔器沿耳缘冲下耳郭，左右两耳取同一部位，分别置于分析天平上称其质量，计算鼠耳肿胀度及抑制率[8]。

小鼠耳肿胀度(%)=(小鼠致炎耳片质量-小鼠未致炎耳片质量)/小鼠未致炎耳片质量×100%

肿胀抑制率(%)=(模型组小鼠致炎后耳片平均肿胀度-给药组小鼠致炎后耳片平均肿胀度)/模型组小鼠致炎后耳片平均肿胀度×100%

2.4 冰醋酸扭体镇痛实验 小鼠随机分成15组，每组10只。分组及给药方法同上。末次给药1 h后，除空白组外各组小鼠腹腔注射新配制的0.6%冰醋酸溶液0.2 mL。观察并记录注射冰醋酸溶液后首次出现扭体反应的时间(潜伏期)与15 min内各小鼠扭体反应(腹部凹陷、伸展后肢、臀部抬高)次数，计算镇痛抑制率[9]。

扭体抑制率(%)=(模型组小鼠15 min内平均扭体次数-给药组小鼠15 min内平均扭体次数)/模型组小鼠15 min内平均扭体次数×100%

2.6 结果

2.6.1 耳肿胀抗炎实验结果 与模型组比较，阿司匹林组、威灵仙及东北铁线莲各中、高剂量组均明显降低小鼠耳肿胀度(P<0.05)，提高抑制率(P<0.05)，与生品比较，相对应的酒炙组均有提高，但无显著性差异，结果见表1。

表1 各组小鼠耳肿胀度及肿胀抑制率

2.6.2 冰醋酸扭体镇痛实验结果 与模型组比较，阿司匹林组、威灵仙及东北铁线莲各中、高剂量组均可明显增加小鼠扭体潜伏期率(P<0.05)，减少扭体次数率(P<0.05)，增强扭体抑制率(P<0.05)。与生品比较，相对应的酒炙组效果均有提高，但无显著性差异，结果见表2 。

表2 各组小鼠扭体镇痛实验结果

3 讨论

威灵仙在《中国药典》2015年版中并未记载炮制方法，但各省标准均有各自的炮制工艺[10]，其中酒炙为较常见的炮制方法。威灵仙经酒炙后走窜之性增强，善治骨关节痛，且疼痛病位偏上，呈游走性者[11]。酒威灵仙通十二经脉，可作为引经药，辅助诸药直达病灶[12]。本研究实验结果显示各剂量组酒炙后药效均有提高，在小鼠醋酸扭体镇痛实验中，酒炙东北铁线莲作用最为明显，优于生品东北铁线莲和酒炙威灵仙，其中高剂量组效果最佳；小鼠耳肿胀抗炎实验中，酒炙东北铁线莲仍然具有最佳的抗炎作用，其次为酒炙威灵仙组。

研究表明威灵仙和东北铁线莲的主要化学成分均为三萜皂苷类[4]，但威灵仙主要含clematochinenosides类三萜皂苷[13-14]，而东北铁线莲主要含clematomandshurica saponins类[15]及mandshunosides类[16]三萜皂苷。威灵仙和东北铁线莲有效成分种类及含量均不同，直接影响抗炎镇痛的药理效果。其中东北铁线莲在辽宁省资源丰富，为推动东北铁线莲的进一步开发，并带动辽宁省的农业经济发展，可对威灵仙饮片的基源进一步划分。

4 结论

综上所述，两种来源的威灵仙中，东北铁线莲的抗炎镇痛效果更好，且酒炙后药效增强，可进一步对东北铁线莲和威灵仙进行区分，扩大其应用范围，带动辽宁省种植业的发展，但对于药物产生疗效的物质基础，还有待进一步研究。