河南省豫北地区副猪嗜血杆菌分子流行病学调查与分析

王 翠，刘 敏，靳 冬，王英华

（河南省动物疫病预防控制中心，河南 郑州 450000）

副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌引起的一种新发细菌性传染病。该病的主要感染对象是断奶前后的仔猪。发病的仔猪常常表现为浆膜炎，关节炎和脑膜炎等症状。近年来，有研究发现副猪嗜血杆菌的血清型已达到15种，有些血清型比较常见，如4和5型，有些血清型比较稀有。该病的传染源是发病的猪和带有病原菌的猪。健康猪群接触了被副猪嗜血杆菌污染的饲料，垫料等，都会引发此病的发生和传播，该病的发生和流行给当地的养猪行业带来巨大的经济损失。本文以我们收集的6个地市无害化处理厂的408份样本检测结果为依据，分析豫北地区副猪嗜血杆菌感染情况，为我省副猪嗜血杆菌的防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 病料的收集 在本次调查中，我们收集的样本是取自6个地市无害化处理厂的病死猪组织，共有样本408份，其中样本组成主要是病死猪的脾脏，肺脏，肾脏，肝脏等，样本收集后冷冻保存。

1.2 主要仪器设备和试剂 在本次检测当中所用到的仪器设备有荧光定量PCR仪（购自ABI）、核酸提取仪（购自西安天隆生物）、生物安全柜（购自美国热电）、组织研磨仪（购自上海净信）、恒温水浴锅（购自美国热电）等。所用到的试剂有核酸提取试剂盒（西安天隆生物），副猪嗜血杆菌核酸检测试剂盒（莱普生）。

1.3 病料的处理和核酸提取 我们将采集的病料剪切成黄豆大小的肉粒，放入组织研磨管中，往研磨管中加入1mLPBS生理盐水和一颗研磨钢球，并将其放入研磨仪中进行充分研磨，之后用离心机将其离心，析出上清液。在生物安全柜中，用移液器抽取组织上清液200μL，加入到西安天隆公司生产的全自动核酸提取试剂盒中，另外再加入20μL蛋白酶K，放入核酸提取仪中提取核酸。等30min后，将抽提到的核酸转移到96孔板上，并将96孔板放入冰箱保存。

1.4 PCR扩增 将副猪嗜血杆菌荧光定量PCR扩增试剂盒放在室温融化后，按照说明书进行配制反应液，然后往反应板中加入核酸和阴性，阳性对照，并按照说明书给定的程序进行设置，反应程序如下：95℃10min，1个循环；95℃5s，60℃30 s，40个循环，并收集荧光信号；20℃2min冷却，待反应结束后，对检测结果进行分析。

2 结果

2.1 PCR检测结果 我们用荧光定量PCR技术对所收集的408份病死猪样本进行检测分析，发现，这408份样本的总体阳性数为220，总体阳性率为54%，其中各个地市的阳性数分别为：52，49，28，57，42，43，阳性率分别为：49%，48%，61%，63%，42%，58%（见表1）。

表1 豫北地区副猪嗜血杆菌感染情况

3 讨论与分析

本次对6个地市无害化处理厂收集的408份样本进行检测发现，这6个地市的样本均呈副猪嗜血杆菌核酸阳性，其中阳性率最高的是D市，高达63%，阳性率最低的是E市，阳性率为42%。不同地区间，副猪嗜血杆菌阳性率之间的差异非常明显。另外，我们将这一数据与近3年同期数据相比发现，我省这6地市的副猪嗜血杆菌的整体阳性率逐年下降。这可能与2018年国内各地相继暴出非洲猪瘟后，养殖场对疫病的防控达到前所未有的重视有关。在进行流行病学调查的时候我们发现，无害化处理厂中的副猪嗜血杆菌阳性猪均有心包炎和关节炎，且这些病死的猪多数是断奶前后的仔猪，与仔猪免疫系统发育不健全，易受细菌病毒感染有关。虽然市场上有副猪嗜血杆菌疫苗，但是临床上的试验证明，这种疫苗的免疫保护效果并不是很理想。因此，对于该病的防控，主要在于预防。预防本病和其他疫病最基本的办法还是加强猪群的饲养管理，提高猪群的免疫力。