食品中金黄色葡萄球菌肠毒素检测方法分析

贺学俊

摘要：在所有食物中毒型病毒中，金黄色葡萄球菌肠毒素在其中最为常见。由于其在社会环境中无处不在，因此也深深影响着人们的饮食安全。基于此，本文简要分析金黄色葡萄球菌肠毒素的检测方法，以期为相应工作者有所启发。

关键词：金黄色葡萄球菌;肠毒素;检测方法

【中图分类号】R512.5 【文献标识码】A 【文章编号】2107-2306（2020）01-149-02

食品中金黄色葡萄球菌肠毒素主要是食物被某些物质污染后，经过腐败变质而产生的。从一些资料文献可以看出，引起金黄色葡萄球菌食物中毒，仅需18ug的肠毒素（SE），并且当前已被确认的SE已经有10类，其分别为a、b、c、d、e、g、h、i、j、k。而在这之中c类因电点差异，有又可以分为三类（c，、c：，c），容易引发食物中毒的主要为a、d两个类型[1]。基于此，若在食物检测时，没有合理运用相应的检测手法，会严重危害人们的饮食安全，甚至还有可能带来严重的影响。因此，深入研究食品中金黄色葡萄球菌肠毒素检测方法具有一定的现实意义。

一、金黄色葡萄球菌菌肠毒素检测方法

从检测原理的角度出发，可以将金葡菌肠毒素检测方式细分成五个角度：超抗原技术、生物传感器技术、聚合酶链反应技术、免疫血清学方法、生物学检测方法。其具体检测方式如下：

（一）超抗原技术

当前一些研究机构经实验分析认为，可以利用SE中的超抗原（SAg），来进行该类病原体的检测。其主要是因为SAg的刺激能力较强，其能与MHc1分子结合，并且不需对其进行加工，就能与T细胞抗原体上的TCRVβ，较好的结合在一起。因为在TCRVβ中，含有的基因有限，且拥有保守的核苷酸序列。所以，仅需在较低（甚至更低）的浓度下，大量的T细胞既可被SAg激活[2]。基于此，一些研究机构依据SE中的SAg分子，运用流式细胞分析技术，观测T细胞的实际情况，进而将其中的SE筛选出来。固然此类方式能较好的检查出食物中的SE，然而却没有相应的特异性，无法对SAg类型作出精准的判断。所以，只能将其作为一个预选处理的手段。

（二）生物传感技术

自进入90年代以后，毒素检测技术在生物技术持续发展的支撑下，得到了较好的发展——生物传感技术。当前，运用生物传感技术主要有三类用于食品毒素检测：压电晶体免疫传感器、光学生物传感器、电化学免疫传感器。压电晶体免疫传感器，其主要将特异免疫反应和压电质量传感器（高灵敏度）两者有机结合在一起，其在石英晶体阻尼的理论基础上，能将要检测的SEB在检测液直接检测出来，并且不用进行任何的步骤分离和标记，操作方便、简单，但是其灵敏度较低;光学生活传感器，其主要在换能器中运用光敏元件，并依据光的相位、频率、强度等在相应界面中的变化原理，进而检测毒素在介质中的含有量。该方式的有点为：较高的灵敏度;电化学免疫传感器，其主要是将电化学技术和生活技术有机的结合在一起，其既能进行化学放大（酶电极），又具备良好的识别功能（识别抗原体间分子）。

（三）聚合酶链反应技术

聚合酶链反应技（PCR）术主要是指利用其的特异性和高敏性，检测食物中的毒素基因，并且运用该种方式能够进行直接检测。一些研究学者运用PCR检测方式，在四小时内完成对TST、SECL以及SEB等基因的检测，甚至有些研究人员发现，运用该种方式甚至能对细菌的克隆进行测量。同事，一些科学家在依据PCR的特性，延伸出多重PCR检测方式，其能将金葡菌肠毒肠毒素中的SEA，SEB，SEC，SED，SEE六对引物基因较好的检测出来[3]。此类方式较单一引物而言，更加有效、可靠、更具特具性。通过PCR检测方式，进行相应的检测，不仅拥有较好的重复性、较强的特异性、较高的敏感性，还能及时的诊断出相应的病原，但就目前而言，其无法进行定量分析。此处应注意的是，有些尽管有些菌株拥有产毒基因，但是其却不会生产毒素，其有可能是该基因没有被激活，无法进行基因表达。所以，在运用PCR检测方式时，应充分考虑各类因素，还未检测到毒素的情况下，还应运用其它的检测方式，进而防止遗漏检测的情况发生。

（四）免疫血清学方法

从一些资料文献可以看出，检测肠毒素的有六类：既酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫印迹技术（Immur～obloting）、固相放射兔疫技术（SPRLA）、反向乳胶凝集试验（RPLA）、反向间接血凝法（RPHA）以及免疫双扩法（DD）。当前由于ELISA具有较高的的灵敏度，相对较为简单的操作方式，据实验室大量数据表明，运用ELISA进行SE检测，其灵敏度高达2.5ng/mL，所以这几年该检测方式为主流方式。在2002年，我国相关研究人员（李红云），通过以SEB单抗1D2为包被抗体、生物素标记的另一种SEB单抗2D1为标记抗体，采用生物素一链亲素系统放大的双抗体夹心酶联免疫吸附方法进行测定血浆及组织中金黄色葡萄球菌肠毒素B，在0.078～10.00～g/L的浓度范围内，SEB标准品浓度与吸光度值线性关系良好，相关系数为r=0.9906，经实验室反复验证，发现该方式快速、简单，具备较强的稳定性，能定量测定动物组织和其血浆中微量SEB，具有一定的推广价值。此外，该方式相对现有檢测方式而言，其灵敏度最高，但在肠毒素型与型之间易发生交叉反应，多用于直接从食品中检出肠毒素，在肠毒素分型上应用较少。其它的检测方式，如免疫印迹和SPRIA等，尽管有较高的灵敏性，但是要么是仪器成本过高，具有一定的放射性污染，要么是操作过程过于复杂，特别是体重的DD检测法，尽管其是最早检测肠毒素的手段，但是由于其操作流程繁琐，需要大量的标本，并且灵敏度也不高，所以没有被推广。

（五）生物检测技术

生物检测技术，其主要是将分离的SA菌株培养液、染毒食品或患者的呕吐物，注射到敏感动物的皮肤中或对其进行喂饲实验，最后看实验动物的状态反应，进而判断SE是否存在于检测物中。但是此类检测手段没有不是特别的理想，因为与人在中毒后（肠毒素）反应类似的动物，只有豚鼠和猴两类。并且此类方式的灵敏度不高，要经过非常繁琐的操作流程，较难将实验中午配备齐全，较难推广[4]。此后，在1997年，某个研究机构，发现运用兔血T—细胞可以较好的弥补之前生物检测技术中的缺陷问题。

二、结语

从上述的内容中可以看出，当前在SE的检测方式上，既有利也有弊。从当前对金黄葡萄球菌肠毒素在食物中的检测，主要采用的是血清学检测方式，而上述的其它类型检测方式，在医学检测中运用的较多。但是，就当前的检测方式而言，还存在一定的不足，因此，相应的部门机构还应加深对SE检测方式的研究，进而推出更高灵敏度，更便捷的检测方式，更高效的检测流程等。

参考文献：

[1]郑玉玲，欧阳譞，黄文华，刘鹏，孔德聪，姜永强，韩雪莲，律清宇，江华.金黄色葡萄球菌肠毒素阵列ELISA检测方法的建立及评价[J].细胞与分子免疫学杂志，2019，35（08）：695-701.

[2]陈镜如，梁惠，陈欣林，石明，黎诚耀，张玉明.金黄色葡萄球菌肠毒素C促进异基因骨髓移植小鼠早期T细胞重建[J].实用医学杂志，2019，35（15）：2365-2369.

[3]张彦斌，范鑫，朱叶青，张宏博.食品中金黄色葡萄球菌肠毒素分子检测方法探索[J].临床医药文献电子杂志，2019，6（54）：174.

[4]杨丹茹，赵燕英，唐俊妮.金黄色葡萄球菌肠毒素SEK的纯化及DAS-ELISA检测方法的建立与应用[J].现代食品科技，2019，35（03）：225-233.

（重庆市荣昌区疾病预防控制中心 402460）