亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与不明原因复发性流产的相关性分析

姜一飞

（常州市中医医院妇产科，江苏 常州 213003）

不明原因复发性流产是指在妊娠28周之前连续发生3次或3次以上的自然流产，在排除母体生殖道解剖异常、母体内分泌异常及自身免疫功能紊乱后，仍无法找到明确原因的病症，发病率约占妊娠总数的1%[1]。相关研究显示，高同型半胱氨酸（Hcy）血症对胚胎有影响，是胎盘早剥、先兆子痫等疾病的高危因素，通过多种途径参与复发性流产，且妊娠期高 Hcy 可增加母体血栓的发生风险[2]。亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是Hcy代谢途径中的关键酶，相关报道显示，MTHFR基因C677T位点的多态性可能是导致不明原因复发性流产发生的高危因素[3]。基于此，本研究就叶酸代谢相关酶MTHFR基因多态性与不明原因复发性流产的相关性进行分析，现作如下报道。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析常州市中医医院2018年1月至2020年6月收治的263例不明原因复发性流产患者的临床资料，将其作为试验组，年龄23 ～ 38岁，平均（30.51±2.76）岁；流产次数3 ～ 5次，平均（3.97±0.36）次。诊断标准：参照《复发性流产免疫学诊断和治疗共识》[4]中的相关诊断标准。纳入标准：符合上述诊断标准者；夫妇双方不存在染色体异常者；抗核抗体、抗心磷脂抗体检测结果呈阴性者；未合并高血压、糖尿病等疾病者等。排除标准：内分泌相关检测指标异常者；合并肝肾等器官性疾病者；近期服用维生素补充治疗者等。另回顾性分析同期进行体检的260例健康女性的体检资料，将其作为对照组，年龄22 ～ 35岁，平均（29.48±2.63）岁，无自然流产史、不良产史及血栓疾病史。将两组研究对象一般资料对比，差异无统计学意义（P > 0.05），组间可进行对比分析。本研究经常州市中医医院医学伦理委员会审核并批准。

1.2 方法 采用PCR法检测叶酸代谢相关酶基因多态性：利用无菌棉签反复刮取两组研究对象口腔黏膜的上皮细胞，提取细胞DNA，采用SLAN-96荧光定量 PCR仪（深圳泰乐德医疗有限公司，型号：ABI7500）检测MTHFR 基因 C677T 位点的多态性，PCR反应条件：89℃预变性 15 min， 95℃ 变性 10 s， 62℃ 退火延伸 2 min， 21个循环； 90℃变性12 s，61℃退火延伸92 s，29个循环。PCR反应结束后，根据SLAN-96 荧光定量 PCR 仪上读取的终点荧光，利用分析软件确定各个样本的基因分型结果。

1.3 观察指标 ①将两组研究对象血清叶酸水平、红细胞叶酸水平及维生素B12水平进行对比。分别采集清晨空腹外周静脉血5 mL，一部分血样以3 000 r/min的转速离心10 min，取血清，采用化学发光法测定血清叶酸水平；另一部分血样用0.5%的抗坏血酸溶血处理，采用时间分辨荧光法检测红细胞叶酸水平；血清维生素B12水平采用时间分辨荧光免疫分析法测定。②比较两组研究对象MTHFR基因C677T位点基因分布频率。③分析不明原因复发性流产与MTHFR基因多态性及红细胞叶酸、血清叶酸、维生素B12水平的相关性。

1.4 统计学方法 应用SPSS 23.0统计软件分析处理文中数据，计数资料与计量资料分别以[ 例(%)]与(±s )表示，采用χ2与t检验，相关性分析采用Pearson软件进行分析。以P < 0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清叶酸、红细胞叶酸及维生素B12水平 与对照组比，试验组患者血清叶酸水平明显升高，而血清红细胞叶酸、维生素B12水平均明显降低，差异均有统计学意义（均P < 0.05），见表1。

表1 两组研究对象血清叶酸、红细胞叶酸及维生素B12水平比较( ±s )

组别 例数 叶酸(nmol/L) 红细胞叶酸(nmol/L) 维生素B12(pmol/L)对照组 260 123.44±14.15 184.57±35.72 164.32±26.38试验组 263 130.16±13.28 156.24±31.16 142.45±24.76 t值 5.601 9.668 9.777 P值 < 0.05 < 0.05 < 0.05

2.2 叶酸代谢相关酶MTHFR基因多态性 与对照组比，试验组患者MTHFR基因C677T位点CC型基因频率升高，而CT、TT型基因频率降低，差异均有统计学意义（均P < 0.05），见表2。

2.3 相关性分析 不明原因复发性流产与血清叶酸水平和MTHFR基因C677T位点CC型基因频率呈正相关（r = 0.657、0.670，均P < 0.05），与血清红细胞叶酸、维生素B12水平及MTHFR基因C677T位点CT、TT型基因频率呈负相关（r = -0.564、-0.691、-0.642、-0.599，均P < 0.05），见表 3。

表3 不明原因复发性流产与MTHFR基因多态性及红细胞叶酸、血清叶酸、维生素B12的相关性

3 讨论

不明原因复发性流产大部分是早期流产，少数部分是晚期流产，早期流产原因为胚胎染色体异常、黄体功能不全等；而晚期流产原因为子宫解剖结构异常、自身免疫异常等，但据统计可识别其病因的仅占52%，因此明确检测复发性流产发生的原因对降低发病率、改善患者预后至关表3 不明原因复发性流产与MTHFR基因多态性及红细胞叶酸、血清叶酸、维生素B12的相关性重要[5]。

郑文霞等[6]研究发现，正常妊娠孕妇膳食叶酸摄入量与血浆5- 甲基四氢叶酸水平呈正相关，而不明原因复发性流产组患者要达到指定的血浆5- 甲基四氢叶酸水平，需摄入更多的叶酸。本研究结果中，与对照组比，试验组患者血清叶酸水平明显升高，而血清红细胞叶酸、维生素B12水平明显降低，且原因不明复发性流产与血清叶酸水平呈正相关，与红细胞叶酸水平及血清维生素B12水平呈负相关，提示叶酸与不明原因复发性流产有着密切联系，血清中叶酸水平是复发性流产的危险因素，于围孕期给予患者补充叶酸，可降低其流产的发生率。

人体中MTHFR可参与叶酸的转运和代谢过程，在不明原因复发性流产中具有多态性，MTHFR基因C677T位点CC型基因增加可降低其酶活性，因此可导致叶酸代谢异常，从而增加流产的发生风险[7]。吴喆[8]研究发现，受检者妊娠前进行MTHFR C677T位点多态性的检测，并根据基因型有针对性地增加叶酸的补充，可有效避免治疗的盲目性，对于预防不明原因复发性流产再次发生具有重要意义。本研究中，与对照组比，试验组患者MTHFR基因C677T位点CC型基因频率升高，而CT、TT型基因频率降低，且不明原因复发性流产与MTHFR基因C677T位点CT、TT型基因频率呈负相关，表明MTHFR基因C677T位点基因突变是不明原因复发性流产发病的危险因素。

综上，血清叶酸水平及MTHFR基因C677T位点基因突变是不明原因的复发性流产发病的主要因素，可作为预测不明原因复发性流产的生物学指标，为降低复发性流产的发生率，可指导携带相关基因受检者补充叶酸等。