新疆石河子市犬蛔虫感染调查及虫卵体外发育形态观察

曾子康，张国武，宁程程，季春辉，孟庆玲

（石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003）

犬蛔虫病通常是由犬弓首蛔虫、狮弓蛔虫感染引起的肠道寄生虫病。犬弓首蛔虫（Toxocara canis）在分类上属于弓首科（Toxocaridae）弓首属（Toxocara），而狮弓蛔虫（Toxascaris leonine）属于蛔科（Ascarididae）弓蛔属（Toxascaris）。犬弓首蛔虫，雄虫长50～110 mm，雌虫长90～180 mm，虫卵呈亚球形或卵圆形，卵壳厚，表面有点状凹陷，大小为（68～85）μm×（64～72）μm；狮弓蛔虫，雄虫长30～70 mm，雌虫长30～100 mm，虫卵呈偏卵圆形，卵壳厚，表面光滑无凹陷，大小为（49～61）μm×（74～86）μm[1]。

犬弓首蛔虫主要侵害幼犬，可导致1 岁内幼犬发育迟缓以及呼吸系统和肠道疾病。幼犬感染犬弓首蛔虫的主要途径有产前感染和产后感染（乳源性感染等），母犬通过清理幼犬粪便可经口感染[2]。狮弓蛔虫主要寄生于成年犬，感染后不会导致明显临床症状[3]。犬摄入狮弓蛔虫卵后，幼虫孵出并进入肠壁发育，然后返回肠腔，不经气管迁移即发育成熟[4]。

犬蛔虫可经口感染人，其幼虫在各脏器中移行，常导致多器官损伤，是一种可对人类健康造成严重危害的人兽共患寄生虫。1 条成熟犬弓首蛔虫平均每天能够产20 万枚卵，一生排卵总数可达几千万枚。由于蛔虫卵对低温和一般消毒剂有较强的抵抗力，在适宜的温度、湿度条件下可存活数年，因此环境中的蛔虫卵是人类和动物的主要感染来源。本研究利用饱和盐水漂浮法和麦克马斯特氏法，分别对石河子市犬蛔虫感染率和感染强度进行调查，并对狮弓蛔虫卵体外发育情况进行观察，以期为石河子市人兽共患寄生虫病防控提供流行病学资料。

1 材料与方法

1.1 仪器及试剂

AE2000 倒置显微镜，厦门麦克奥迪实业集团有限公司；霉菌培养箱，宁波莱福科技有限公司；TP-213 电子天平，美国赛多利斯公司。其他常用仪器和试剂包括，普通光学显微镜、医用冷藏柜、移液器、LED 虫卵计数玻片装置、饱和盐水等。

1.2 调查地点及样品采集

2021年2—3 月，在石河子流浪动物救助站和石河子市部分宠物医院采集粪样总计136 份。石河子流浪动物救助站共有来自石河子市各社区爱心人士和小动物保护协会收集的流浪犬约1 000 只，每周采集1 次，共采集到96 份粪样；在石河子大学动物医院等5 家宠物医院采集家养犬粪样40 份。由于宠物医院样本量较小，故每周采集1 次，每次采集全部粪样[5]。

1.3 感染率调查

采用饱和盐水漂浮法检查犬粪便中的虫卵。取新鲜粪便2 g 放在平皿中，用镊子或玻璃棒压碎，加入10 倍量饱和盐水，搅拌混合，用粪筛过滤到试管中，使管内粪汁稍隆起至刚好不溢出管口；静置30 min，用载玻片蘸取液面迅速翻转，最后加盖玻片镜检，检出虫卵即为阳性。

1.4 感染强度调查

采用麦克马斯特氏法（McMaster's method）检测每克粪便中的虫卵数（eggs per gram，EPG），以确定犬蛔虫感染强度。取2 g 粪便放入烧杯内压碎，加入饱和盐水58 mL 充分振荡混合，通过粪筛过滤，后边摇晃边用吸管吸出少量滤液，滴入LED 虫卵计数玻片装置的两个计数室内，置于载物台上，静置几分钟后，低倍镜下将两个计数室内所见蛔虫卵全部数完，取平均值后乘以200，即为EPG。

1.5 虫卵形态学鉴定及体外发育观察

将收集的犬粪加清水浸泡，捣碎过100 目筛，将滤液离心（3 000 r/min，10 min）取沉淀，加饱和盐水漂浮，取上清，离心（1 500 r/min，10 min），弃上清后加5 倍体积清水，离心（3 000 r/min，10 min），沉淀即是目标虫卵。如沉淀中杂质太多可重复上述步骤，直至洗去多量杂质。将收集的虫卵置于六孔板并加入生理盐水（含双抗），在25 ℃温箱中培养15 d。每天摇匀并及时补充水分，倒置显微镜下观察虫卵的发育情况并拍照。

1.6 统计学分析

采用GraphPad Prism 软件对数据进行卡方检验，得到χ2及P值，P＜0.05 为差异显著，P＜0.01 为差异极显著。

2 结果

2.1 虫卵形态学特征

在136 份粪样中，共发现犬弓首蛔虫和狮弓蛔虫两种蛔虫卵（图1）。犬弓首蛔虫卵平均直径为84.78 μm，呈黄褐色，近圆形，卵壳较厚，卵黄膜、壳质层和脂层明显，外壳有许多凹陷，表面不平整，内含单个较大卵细胞，细胞内充满卵黄颗粒，卵细胞与卵壳间空隙较少；狮弓蛔虫卵长、短轴平均长度分别为85.49 μm、71.44 μm，呈黄色，近椭圆形，卵壳较薄，内外界膜界限清晰，外壳光滑，卵内有未分化的单个呈圆形卵细胞，有清晰的细胞膜界限，细胞和卵壳间的间隙较大，有“新月状”空隙。

图1 犬蛔虫卵形态

2.2 感染率

对犬粪样采用饱和盐水漂浮法，从136 份样品中检出阳性12 份，阳性率为8.82%（表1），阳性粪样全部来自流浪犬。其中：犬弓首蛔虫阳性5 份，阳性率为3.68%（5/136）；狮弓蛔虫阳性12 份，阳性率为8.82%（12/136）；犬弓首蛔虫和狮弓蛔虫混合感染粪样5 份，混合感染阳性率为3.68%（5/136）。流浪犬与家养犬蛔虫阳性率比较，χ2=5.484，P=0.019，差异显著。

2.3 感染强度

经麦克马斯特氏法（McMaster's method）检测，有6 份阳性粪样可见大量虫卵，EPG 为300～400，全部为狮弓蛔虫卵（表1），其他6 份阳性粪样未发现虫卵。

表1 石河子市犬蛔虫感染统计结果

2.4 狮弓蛔虫卵体外发育观察

利用显微镜对狮弓蛔虫卵体外发育情况进行观察并拍照，包括新鲜蛔虫卵、单细胞期、二分裂期、四分裂期、桑葚胚前期、桑葚胚期、肠胚期、幼虫前期、幼虫期及孵化期蛔虫卵（图2）。新鲜虫卵：呈卵球形，卵细胞占据整个虫卵；单细胞期：卵细胞边界清晰，有“新月形”间隙；二、四分裂期：各卵细胞界限清晰，可见体积变小的2、4 个细胞；桑葚胚前期：可见10 个左右清晰细胞；桑葚胚期：约由32 个细胞构成，形似桑葚；肠胚期：卵胚周围有一层细胞围绕，一侧形成“肾形”凹陷；幼虫前期：有似幼虫形状短粗结构，环绕于卵内不形成圆环，呈“J”字形；幼虫期：清晰可见幼虫在卵内活动，呈“6、8”字形；幼虫孵化期：卵壳破裂，整个结构塌陷，幼虫从孔隙中钻出。

图2 狮弓蛔虫卵各阶段体外发育情况

3 讨论

犬蛔虫病是由犬弓首蛔虫、狮弓蛔虫感染引起的疾病，在世界范围内广泛流行。人类尤其是儿童常经口摄入犬弓首蛔虫卵而感染[6-8]。感染人后其幼虫常在组织器官内移行，引起眼幼虫移行症（ocular larva migrans，OLM）、内脏幼虫移行症（visceral larva migrans，VLM）、嗜酸性脑膜炎（eosinophilic meningoencephalitis，EME）、隐性弓蛔虫病（covert toxocariasis，CT）等多种疾病[9-11]，造成不可逆的损伤。据统计，全球犬弓首蛔虫卵在公共场所的检出率高达21%（16%～27%，13 895/42 797）[12]。我国人蛔虫感染率为12.72%，感染人数约8 593 万[13]。在美国该病血清阳性率为5%～15%，每年有超过1 万例临床病例；尼日利亚报告的儿童蛔虫感染血清学阳性率高达80%[14]。该病的流行给人类健康带来了严重危害。

全球犬弓首蛔虫总体感染率为11.1%（10.6%～11.7%），不同地区流行率为6.4%～19.2%[15]。犬弓首蛔虫和狮弓蛔虫存在混合感染。Shalaby等[16]在埃及25 只犬中发现犬弓首蛔虫和狮弓蛔虫感染率分别为56.0%、8.0%，混合感染率为8.0%。犬蛔虫感染率高低与犬年龄有关。杨万莲等[17]发现北京市感染蛔虫的犬全为6 月龄内幼犬，感染率为7.65%（241/3 152）。犬饲养方式会影响蛔虫感染率。魏冬霞等[18]调查发现，泰州市圈养、圈养加散养犬、散养犬蛔虫感染率分别为15.57%、21.43%、41.67%。此外，犬饲养环境也会影响蛔虫感染率。王银等[19]在户县农村发现120 只散养犬寄生虫感染率为100%，其中犬弓首蛔虫感染率为65.83%（79/120）。

本研究利用饱和盐水漂浮法，对石河子市犬蛔虫感染情况进行调查，发现阳性粪样均来自流浪犬，未从家养犬中检出阳性，说明该地区家养犬寄生虫防控效果较好。样品中狮弓蛔虫感染率最高，为8.82%（12/136），犬弓首蛔虫感染率较低，为3.68%（5/136），说明该地犬以狮弓蛔虫感染为主。本次调查的石河子市犬蛔虫感染率略低于郑州 市（11.32%，35/309）[20]、长沙市（12.80%，58/453）及怀化市（15.12%，18/119）[21]，差异不显著（P＞0.05），明显低于泰州市（18.34%，73/398）[22]、扬州市（25.26%，123/487）[23]和全国（17.34%，4 246/24 490）[24]，差异极显著（P＜0.01），说明石河子市犬蛔虫感染不严重。这可能与石河子市降雨量小、土壤干燥，不利于蛔虫卵在外环境中发育[25]以及采取的驱虫措施有关。然而石河子市流浪犬中仍有一定的蛔虫感染，说明环境中存在感染源，家养犬仍有潜在的感染危险。本研究观察到狮弓蛔虫卵各发育阶段的形态，发现狮弓蛔虫卵体外发育各阶段过程与其他蛔虫类似[26]。目前国内仍缺乏对狮弓蛔虫卵体外发育形态变化的系统性描述，本研究补充和完善了狮弓蛔虫卵体外发育形态变化的连续性和完整性，丰富了狮弓蛔虫的流行病学信息，有助于环境中狮弓蛔虫卵发育阶段鉴定，可为粪便、污水处理时感染性虫卵污染情况确定提供参考，对防控由狮弓蛔虫引起的犬蛔虫病具有重要价值[27]。

4 结论

研究发现，相比全国其他地区，石河子市犬蛔虫感染程度整体较轻，尤其是家养犬防治效果较好，但流浪犬仍存在一定的感染，今后需要重点加强流浪犬蛔虫病防控。