重组人干扰素联合LEEP对宫颈上皮内瘤变患者P16、P63、Ki-67表达及炎性因子的影响

赵晶蕾，韦广月，刘艳洁

宫颈上皮内瘤变是宫颈癌的癌前病变，若未及时规范治疗，可进展为宫颈癌[1]。随着临床研究的深入，发现宫颈上皮内瘤变患者不仅存在炎症反应，而且P16、P63、Ki-67在宫颈病变过程中可作用于细胞周期，参与细胞的增殖、分裂及肿瘤生成过程[2-3]。有研究表明，P16、P63、Ki-67在反映宫颈上皮内瘤变诊断分级中具有重要意义[4-5]。宫颈环形电切术(LEEP)具有创伤小、切缘清晰、操作简单等优点，在宫颈上皮内瘤变的治疗中应用较广[6]。干扰素由病毒刺激宿主细胞分泌产生，具有抑制细胞增殖、抗病毒谱广等作用[7]。目前国内学者已证实，重组人干扰素联合LEEP对宫颈上皮内瘤变患者免疫功能、阴道微生态、炎症反应等方面具有较好的改善作用[8-10]。但是，联合治疗对宫颈上皮内瘤变患者P16、P67、Ki-67表达的影响报道较少。本研究采用重组人干扰素联合LEEP治疗宫颈上皮内瘤变，并对治疗后P16、P67、Ki-67表达情况进行分析，有关结果报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年7月—2020年6月我院收治的宫颈上皮内瘤变108例为研究对象。根据治疗方法不同将患者分为观察组和对照组，每组54例。观察组年龄32～64(42.28±9.51)岁；分级：Ⅰ级23例，Ⅱ级31例；病程3～36(16.70±2.39)个月。对照组年龄32～65(41.93±9.26)岁；分级：Ⅰ级24例，Ⅱ级30例；病程3～36(16.57±2.48)个月。两组年龄、分级、病程等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医学伦理委员会批准同意。

1.2纳入与排除标准

1.2.1纳入标准： ①经活组织病理检查、液基薄层细胞检查确诊为宫颈上皮内瘤变；②分级为Ⅰ、Ⅱ级；③具有LEEP的手术指征；④入组前14 d未使用过抗生素、糖皮质激素等可能影响研究结果的药物；⑤患者对本研究知情，且签署知情同意书。

1.2.2排除标准：①合并淋病、滴虫、支原体感染等疾病者；②确诊为恶性瘤变或子宫上皮内瘤变者；③过敏体质或对本研究药物过敏者；④合并急性生殖道炎症者；⑤妊娠或哺乳期患者；⑥合并其他重要脏器严重疾病者。

1.3治疗方法 两组均采用美国Wallach公司生产的QUANTUMA 2000型LEEP刀进行治疗，功率50 W。患者取膀胱截石位，局部麻醉后标记宫颈表面移行区范围，暴露病变位置；选择合适的环形刀电极型号，通过宫颈环切入电圈，并环绕1周；根据电圈和碘示区范围，控制切入深度，切除组织送病理检查。观察组在LEEP治疗基础上，给予重组人干扰素α-2b凝胶[兆科药业(合肥)有限公司，国药准字S20010054]治疗，将重组人干扰素α-2b凝胶100万U置于患者阴道后穹隆部，用纱布填塞6 h左右取出纱布。每天1次，连续10 d。

1.4观察指标

1.4.1P16、P63和Ki-67表达情况：治疗前取手术切除组织标本，治疗30 d后在原病灶点取微量组织标本。标本常规固定、脱水、包埋。3 μm连续切片，HE染色。LEICA BOND MAX全自动免疫组织化学染色机测定，相关抗体由福州迈新生物技术开发有限公司提供。阴性对照染色使用PBS。阳性判断标准：采用光学显微镜观察显色反应，细胞核内(P16还需观察细胞质)见棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞占比≥10%为阳性[11]。

1.4.2炎性因子检测：治疗前、治疗30 d后于清晨空腹状态抽取患者静脉血5 ml，离心取血清冷冻待测。采用酶联免疫吸附试验测定白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和C反应蛋白(CRP)水平，试剂盒由武汉艾迪抗生物科技有限公司提供，操作严格按照说明书进行。

1.4.3免疫功能检测：治疗前、治疗30 d后于清晨空腹状态抽取患者静脉血5 ml，采用流式细胞术测定CD3+、CD4+、CD8+，试剂盒购自军事医学科学院，操作严格按照说明书进行。

1.4.4疗效观察：治疗30 d后，评定患者疗效,①显效：阴道镜及宫颈液基薄层细胞检查未见宫颈上皮内瘤变，宫颈光滑；②有效：阴道镜及宫颈液基薄层细胞检查示病变级别降低，病变范围缩小>50%；③无效：阴道镜及宫颈液基薄层细胞检查示病变级别未降低，或病变范围缩小<50%，甚至扩大[12]。总有效率=(显效+有效)例数/总例数×100%。

1.4.5不良反应观察：记录两组治疗期间感染、出血、宫颈粘连等不良反应发生情况。

2 结果

2.1治疗前后P16、P63、Ki-67阳性率比较 治疗前，两组P16、P63和Ki-67阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后，两组P16、P63和Ki-67阳性率均较治疗前降低，且观察组低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。见表1。

表1 采用不同方法治疗宫颈上皮内瘤变两组P16、P63、Ki-67阳性率比较[例(%)]

2.2治疗前后炎性因子比较 治疗前，两组IL-10、TNF-α、CRP比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后，两组IL-10高于治疗前，TNF-α、CRP均低于治疗前，且观察组IL-10高于对照组，TNF-α、CRP均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。见表2。

表2 采用不同方法治疗宫颈上皮内瘤变两组治疗前后炎性因子比较

2.3治疗前后免疫功能比较 治疗前，两组CD3+、CD4+、CD8+比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后，两组CD3+、CD4+高于治疗前，CD8+低于治疗前，且观察组CD3+、CD4+高于对照组，CD8+低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。见表3。

表3 采用不同方法治疗宫颈上皮内瘤变两组治疗前后免疫功能比较

2.4治疗效果比较 观察组总有效率高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 采用不同方法治疗宫颈上皮内瘤变两组治疗效果比较[例(%)]

2.5不良反应发生情况 治疗期间，观察组出现感染、出血、宫颈粘连各1例，不良反应发生率为5.56%。对照组出现感染2例、出血1例、宫颈粘连2例，不良反应发生率9.26%。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨论

宫颈上皮内瘤变对女性健康和生命安全有极大威胁。相关临床研究表明，宫颈上皮内瘤变患者多存在免疫功能恶化、阴道微生态破坏及炎症反应加重等情况[13-15]。在“细胞学-阴道镜-组织病理”三阶段筛查推广下，检测P16、P63和Ki-67阳性表达情况有助于提高宫颈上皮内瘤变的诊断准确率[16]。P16是一种抑癌基因，参与细胞周期调控，可以抑制细胞周期依赖性蛋白激酶4活性，阻止细胞进入S期。P63是P53基因家族成员，参与肿瘤发生、发展及细胞凋亡过程。Ki-67存在于除G0期以外的细胞周期所有阶段，被认为是一种可靠的核增殖标志物。目前多项研究表明，宫颈上皮内瘤变患者P16、P63和Ki-67均存在较高的阳性表达，且病情越严重，阳性表达率越高[17-19]。因此，P16、P63和Ki-67能作为宫颈上皮内瘤变早期诊断的重要参考指标。LEEP通过超高频低电压技术，传导高频低电压电波产生瞬时高压，从而达到切除病变组织的目的,该手术具有微创、切除范围大、止血效果好等优点，逐步取代电凝、激光、冷冻等治疗手段，在宫颈上皮内瘤变的治疗中得到了广泛应用[20-22]。但是患者术后切口愈合时间较长，而且容易引发阴道出血、创面感染等风险。重组人干扰素可与干扰素受体特异性结合，阻止病毒蛋白质合成，抑制感染。此外，重组人干扰素还具有免疫功能和性激素分泌调节作用，促进机体免疫自稳功能恢复和创面愈合[23]。

从本研究结果来看，观察组总有效率高于对照组。该结果验证了重组人干扰素联合LEEP治疗宫颈上皮内瘤变具有更好的临床效果，结论与秦燕萍等[8]、马小磊等[24]学者的报道相一致。炎症反应被认为是宫颈上皮内瘤变的致病机制之一。本研究发现，治疗后，两组IL-10高于治疗前，TNF-α、CRP均低于治疗前，且观察组IL-10高于对照组，TNF-α、CRP低于对照组。该结果也证实重组人干扰素联合LEEP有助于进一步减轻宫颈上皮内瘤变患者体内的炎症反应。赵秀梅等[10]学者认为，联合治疗可以更好地诱导细胞表皮组织相容复合物抗原表达，改善机体免疫功能，并提高患者抗病毒能力，降低病毒感染风险，从而降低了炎症反应。在人体内CD8+起抑制作用，CD4+起促进作用，通过CD4+、CD8+的动态变化，从而实现机体免疫平衡。本研究还发现，治疗后，两组CD3+、CD4+高于治疗前，CD8+低于治疗前，且观察组CD3+、CD4+高于对照组，CD8+低于对照组。该结果表明重组人干扰素联合LEEP治疗有助于改善宫颈上皮内瘤变患者免疫功能。此外，两组治疗后P16、P63和Ki-67阳性率均显著低于治疗前，且观察组低于对照组。该结果提示P16、P63和Ki-67不仅可以作为诊断宫颈上皮内瘤变的参考指标，而且可以作为预后判断的参考指标。另外，上述结果还表明重组人干扰素联合LEEP能够改善宫颈上皮内瘤变患者免疫功能、阴道微生态，减轻炎症反应，同时抑制P16、P63和Ki-67阳性表达，在细胞层面调控病变进程。从不良反应来看，两组不良反应发生率比较差异无统计学意义，肯定了联合治疗方案的安全性。

综上所述，在LEEP基础上，联合重组人干扰素治疗宫颈上皮内瘤变，能够更好地抑制P16、P63和Ki-67阳性表达，减轻炎症反应，改善免疫功能，提高治疗有效率，而且具有较高的安全性。