反向高效液相色谱法测定复方木香小檗碱片中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量

李洪刚，陈健，向鹏宇

（重庆市涪陵食品药品检验所，重庆 408000）

0 引言

复方木香小檗碱片是由盐酸小檗碱、木香和吴茱萸3味中药制成的，用于治疗肠道感染、腹泻。作为方中主药的木香未作定量要求，不能有效的控制该制剂的质量。通过实验，建立该制剂的含量测定方法[1-2]。 该方法精密度好，结果准确，可用于于复方木香小檗碱片的质量控制。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（安捷伦1260），Sartorius-ME235S电子天平；木香烃内酯（对照品由中检院提供，批号111524-201911，含量99.9%），去氢木香内酯（对照品由中检院提供，批号111525-201912，含量99.8%）；复方木香小檗碱片（样品由远大医药公司提供，批号分别为2020801，2020901，2020904）。甲醇为进口HPLC级别，水为屈臣氏蒸馏水，其余试剂为优级纯级别。

2 方法与结果

2.1 色谱条件。Thermo-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）作为色谱柱；以水-甲醇（25:75）作为流动相；流动相为1.0 mL/min；选取225 nm作为检测波长；柱温设置为35℃，进样量：10μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 精密称取对照品适量，加甲醇制成每1 mL含木香烃内酯对照品和去氢木香内酯对照品20 ng的溶液，即得对照品溶液。

2.2.2 取本品20片，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，超声处理（功率300 W，频率45 kHz）30 min，放冷，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液[3]。

2.2.3 按复方木香小檗碱片剂制备工艺，取除木香外的其余药味，按照工艺要求制成不含木香的复方木香小檗碱片，按照2.2.2项下的操作方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察。专属性考察，取2.2项下3种溶液，依照2.1色谱条件进行测定。结果供试品溶液与对照品溶液在相同时间内有色谱峰出现，而阴性对照品溶液在此处未出现色谱峰，表明该方法专属性良好，见图1。

图1 高效液相色谱图

2.3.1 线性关系考察：取2.2项下的母液对照品溶液，分别精密量取1，5，10，15，20 mL，分别定容于100量瓶中，按2.1项下色谱条件测定，进行线性回归，得回归方程为：木香烃内酯对照品Y=14561X+1.4558，r=0.9992；质量浓度在10.13~200.26μg•mL-1范围内线性关系良好。去氢木香内酯对照品Y=18911X+43.213，r=0.9991，进样量在10.36~200.72μg•mL-1范围内线性关系良好。

2.3.2 精密度考察：取混合对照品溶液，连续测定6次，结果木香烃内酯的峰面积的RSD为0.24%（n=6），去氢木香内酯的峰面积的RSD为0.36%（n=6）。

2.3.3 重复性考察：取同一批号样品（批号为20200904）6份，按2.2.2项下要求进行制样，分别测定，结果木香烃内酯的峰面积的RSD为0.32%（n=6），去氢木香内酯的峰面积的RSD为0.26%（n=6）[4]。

2.3.4 稳定性考察：取同一批号样品（批号为20200904）溶液，分别在0、2、4、8、12、24 h进样10μL，考察其稳定性，结果木香烃内酯的峰面积的RSD为0.36%（n=6），去氢木香内酯的峰面积的RSD为0.37%（n=6）。

2.3.5 加样回收试验：精密称取样品（批号20200904）6份，精密加入2.2.1的对照品适量，按2.2.2项下要求制样并依法测定，回收率结果见表1。

表1 加样回收实验结果（n=6）

2.4 样品测定。取3批复方木香小檗碱片样品，按2.1项下色谱条件测定，进样量10μL，记录峰面积，计算各供试品中木香烃内酯、去氢木香内酯的含量，结果分别为：1.0088和0.4285 mg/g；1.1214和0.4322 mg/g；1.0127和0.4312 mg/g。

3 讨论

木香烃内酯对照品和去氢木香内酯对照品易溶于甲醇、乙醇等有机溶剂，因此在提取分离条件的摸索过程中，比较了不同超声时间对成分提取率的影响，分别选取了了超声 15、30、45、60 min后进行含量考察，通过考察，在超声30 min后，指标成分就能充分提取[5-6]。