中药配方颗粒制备四黄散敷贴工艺研究

蔡 良 欧阳冬青 凌庄坤 易新淋 刘筱霞

江西百神药业股份有限公司/江西省中药配方颗粒重点实验室，江西 宜春 336000

中药贴敷剂是一种以治病防病为目标的特色技术方法，其原理是利用中药的特殊药性，在相应穴位上进行药物贴敷，从而达到内病外治，祛邪散寒，调节脏腑阴阳平衡作用。中药贴敷剂也叫“冬病夏治穴位贴”或“三伏贴”，在临床上由于病证不同，时令季节不同，应用时会存在多种组方和经络腧穴上的变化，反映了中医药因时治宜的治疗特点。目前已广泛应用于支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、变应性鼻炎、慢性支气管炎、冠心病、骨关节炎、颈椎病，小儿呼吸道感染、肺炎等疾病的治疗[1]。

中药敷贴剂主要采用中药饮片为原料，经粉碎或捣烂(提取)，再加赋形剂成型而成。随着中药现代化的发展，目前已有采用中药配方颗粒做为原料制成中药敷贴剂的报道[2]。中药配方颗粒是一种采用水提，以物理方法固液分离、浓缩、干燥、制粒制备而成的颗粒剂。其在临床上用于替代中药饮片，具有随证加减、质量稳定、不用煎煮、服用携带方便等优势[3]。

在临床应用过程中，中药贴敷剂会出现一些不良反应，轻微不良反应有局部皮肤潮红、瘙痒、轻度刺痛，严重时会出现局部皮肤红肿、过敏、大小水疱、溃烂等情况。产生这些不良反应的原因与患者的过敏体质、 贴敷时间过长、药物浓度偏高等原因有关,也可能是由于辅料引起[2，4-5]。

本实验四黄散来源王肯堂《证治准绳》中以大黄、黄连、黄柏、黄芩组方[6]，选用处方为大黄：黄柏：黄连：黄芩=10∶10∶10∶10(饮片比)，按照配方颗粒当量换算成配方颗粒为大黄：黄柏：黄连：黄芩=330∶83∶178∶160(重量比)，主治小儿身上一切热毒疮疾、燥痒抓破、有汁不干。

本实验以配方颗粒为原料，针对临床反馈中药粉末制备敷贴过程出现局部皮肤红肿，水泡等情况，筛选出姜汁，凡士林及二氧化硅三个药用级辅料，降低辅料导致的不良反应概率，同时以赋形性、耐热性等感官指标为评分标准，优化配方比例，并进行三批工艺验证。

1 材料与方法

1.1 仪器 HZY-B5000电子天平(褔州华志科学仪器有限公司)；水浴锅(上海振捷实验室设备有限公司)；Aglient 1260高效液相色谱仪配DAD检测器(美国安捷伦科技公司)；梅特勒XSE205DU电子天平(Max 81g/220g d=0.01 mg/0.1 mg 梅特勒-托利多(常州)测量有限公司)；KQ-400KDE高功率数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；CSH-500SD-C药品稳定性试验箱(重庆创测科技有限公司)。

1.2 实验药品及试剂 大黄(批号20181201)、黄柏(批号20180601)、黄连(批号20200301)、黄芩(批号20180601)配方颗粒均为江西百神药业股份有限公司生产；生姜(市购)、二氧化硅(安徽山河药用辅料股份有限公司；批号200317)、凡士林(湖南九典宏阳制药有限公司；批号TF702000101)、预胶化淀粉(南昌建峰实业有限公司；批号：200304B)、高岭土(上海阿拉丁科技股份有限公司；批号：D2003039)、液体石蜡(上海麦克林生化科技有限公司；批号：C10397198)除液体石蜡为分析纯，高岭土为医药级外其它均为药用级；pu膜空贴(海氏海诺；规格7 cm×7 cm防油圈内径3 cm)；盐酸小檗碱对照品(中国食品药品检定研究院；批号：110713-201814)。

1.3 赋形剂筛选 对四黄散敷贴赋形剂进行筛选，选用姜汁(料理机打碎后过200目筛即得)，凡士林，预胶化淀粉，二氧化硅，高岭土，液体石蜡做为赋形剂[5，7-9]。通过调整颗粒与赋形剂的比例制成膏状物，经制锭，pu膜空贴包装得到样品。以1.4.1感官评价指标项下外观评价为评价指标，初步筛选出合适的赋形剂种类，每个配方重复制备3组。

1.4 正交实验设计 通过赋形剂筛选，确定四黄散敷贴赋形剂种类及比例后，进行正交实验优化各物料配比(见表1)，按照感官评价指标进行评分(满分50分)，筛选出最佳的基质配方。

1.4.1 感官评价指标[10-12]

外观(共10分)：取四黄散敷贴，揭开保护膜，膏面光洁 、色泽一致，无脱膏、失黏现象，背衬面平整、洁净、无漏膏现象俱佳得6～10分，膏面不光洁、色泽不一致或一项不佳得1～5分，两项以上不佳得0分。

皮肤追随性(共10分)：将成型膏剂贴于手腕背部，用力甩10下不脱落，满分为10分，脱落之前已甩的次数为得分。

以下检查参照《中国药典》2015年版四部通则0122通则进行。

耐热性(共10分)：背衬无渗油现象，膏面光泽，用手指触试仍有弹性俱佳者得10分，背衬略有渗油者为8分，背衬渗油明显或一项不佳者1～6分，两项以上不佳得0分。

赋形性(共10分)：膏面无流淌现象者为10分，略有流淌现象者为4～8分，流淌现象明显者为0分。

剥离性(共10分)： 无残留者为10分，较易剥离、略有残留者者4～8分，难以剥离、残留严重者为0分。

1.4.2 多因素考察试验 采用正交试验设计法优选四黄散敷贴配方。以感官得分为评价标准，正交水平试验表格见表1。

表1 四黄散敷贴正交试验因素

1.5 盐酸小檗碱含量考察 四黄散含有大黄、黄连、黄柏、黄芩四味配方颗粒，有效成分为盐酸小檗碱、大黄总蒽醌与游离蒽醌、黄芩苷等。实验选取盐酸小檗碱为含量指标，考察三批工艺验证的四黄散敷贴盐酸小檗碱含量及含量损失情况。

1.5.1 盐酸小檗碱含量测定 按照高效液相色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(50∶50)(每100 mL中加十二烷基硫酸钠0.4 g，再以磷酸调节pH值为4.0)为流动相；检测波长为345 nm。理论板数按盐酸小檗碱峰峰计算应不低于5000。

供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品，混匀，取适量，研细，精密称取0.10 g黄连及黄柏配方颗粒，0.25 g敷贴，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸(100∶1)的混合溶液50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，以盐酸小檗碱对照品为参照，以其相应的峰为参照物峰，计算表小檗碱，黄连碱，巴马汀各峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的加减5%范围之内。相对保留时间及校正因子见表2。

表2 相对保留时间及校正因子

以盐酸小檗碱峰面积为对照，分别乘以校正因子，计算表小檗碱、黄连碱和巴马汀的含量。

计算公式：含量(mg/g)=CR×Ax/AR×50×25/m

式中：CR为盐酸小檗碱对照品溶液的浓度(mg/mL)；AR为盐酸小檗碱对照品的峰面积；Ax为样品中盐酸小檗碱峰面积；m为供试品称样量(g)。

1.5.2 制备过程盐酸小檗碱含量损失考察 四黄散敷贴含有盐酸小檗碱的配方颗粒为黄连配与黄柏。制备敷贴过程中在80°水浴下操作，有效成分会出现部分降解或转化，对制备过程含量损失进行考察，计算公式如下：

配方颗粒中含量=a×(黄柏配方颗粒含量×b+黄连配方颗粒含量×c)

含量损失率=(1-四黄散敷贴含量/配方颗粒含量)×100%

式中a为配方颗粒占敷贴总量的比例；b、c为黄柏、黄连配方颗粒占配方颗粒的比例，b=83/751c=178/751。

2 结果

2.1 赋形剂初筛 按照配方颗粒添加量不少于50%，赋形剂种类尽可能少为原则进行试验，确定以下6个配方可以制备成膏状物，将制备得到的膏状物制锭后，撕开pu膜观察外观形态，结果见表3。

表3 不同赋形剂制备敷贴外观形态

结果表明配方3、6制备样品感官均较好。其中配方3效果最佳，配方3中选用了姜汁、凡士林、高岭土做赋形剂，但国内生产药用级高岭土的厂家少，纯度较高的高岭土主要从德国、澳大利亚等国家进口，且价格较贵达到130元/kg左右，制备成本较高。因此确定配方6为合适配方，初步筛选确定赋形剂种类为姜汁、凡士林、二氧化硅。

2.2 正交实验 为探索最佳的四黄散敷贴配方，对姜汁、凡士林、二氧化硅及中药配方颗粒四因素进行正交试验优化，实验结果见表4，方差分析表见5。

表4 L9(34)正交实验结果

表5 L9(34)方差分析

通过直观分析得出，各因素对综合评分影响大小为D>A>C>B，通过方差分析可知A、D因素为显著影响因子，最佳配方为A3B1C3D2，即四黄散敷贴最佳配方为中药配方颗粒60%、姜汁25%、凡士林10%、二氧化硅5%。

2.3 三批验证 对筛选后的配方进行三批次工艺验证，称取60%配方颗粒与5%二氧化硅混合，加入25%姜汁80度水浴锅内搅拌化开后，加入10%凡士林溶解搅拌均匀后，放冷，压锭，包装。参照1.4.1进行感官评价指标进行综合评分，参照1.5.1与1.5.2进行含量测定与计算含量损失率。具体数据见表6。

表6 三批四黄散质量情况

结果表明按照优选后工艺制备的四黄散贴膏体均匀，耐热性、赋形性、剥离性等指标均较好，三批敷贴盐酸小檗碱含量相近，工艺制备过程含量损失率小于5.0%。

3 讨论

本实验对中药配方颗粒制备四黄散敷贴工艺进行研究，筛选得到的三种赋形剂价格便宜，易得且能符合药用要求，其中生姜、凡士林为常用赋形剂，二氧化硅也鲜有不良反应报道，应用临床可以降低由于辅料原因导致的不良反应概率。

经过正交实验优化后确定四黄散敷贴制备工艺按照颗粒60%、生姜汁25%、凡士林10%、二氧化硅5%，经称量，压锭，包装即得。该制备方法载药量可达60%，外观符合要求，且处理过程含量成分损失较小。本实验为配方颗粒外用敷贴制剂提供数据支撑，为了满足临床调配需要，临床可根据实际需要微调基质比例，或敷贴规格以达到治疗需求。