铃铛刺花提取物急性毒性及抗运动疲劳作用分析

谢丽媛

（宁波职业技术学院公共教学部 浙江·宁波 315800）

0 前言

在早前研究学者的研究文献中已经发现，对于铃铛刺的种系发育与细胞学的研究相对较少，对于其营养成分和生物活性的研究更是几乎没有，对此对铃铛刺的成分进行相关研究，分析其具体的抗疲劳作用具有一定意义。本文为了更好的分析研究铃铛刺的化学营养成分以及相关生物活性的具体情况，选择了小鼠作为研究对象，进行了急性毒性研究，测定出小鼠的最大铃铛刺的给药量，并且进行了一系列其他的实验研究，对于铃铛刺的用药的安全性以及抗体力疲劳功能进行细致评估与分析。从而为进一步发现新资源食品奠定基础，并且为后续生产铃铛刺及其下游产品做出了有效且科学的基础以及相应科学依据，具体内容如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

本实验研究所选用的小鼠均为昆明种小鼠SPF级别。

1.2 方法

1.2.1 铃铛刺花的提取液的制备方法

选用铃铛刺花提取物作为样品，提取物为浸膏，样品的气味清香，颜色呈棕褐色，液体为粘稠状。将选用的样品进行一定浓度的稀释，稀释液选择蒸馏水即可，稀释浓度为2g/ml，确保样品不会对灌胃针造成堵塞，将其放置到4℃冰箱内保存备用。

1.2.2 铃铛刺花提取液毒性实验研究

（1）急性毒性实验。

选用周龄在6-8周的小鼠30只做研究对象，30只鼠内雌雄各15只，体重要控制在18g到22g范围内。将所有研究小鼠平均分成A、B、C3组，每一组各10只，其中A组一天给药2次，两次给药之间时间间隔为8h。B组每天给药3次，同样两次给药之间时间间隔为8h。C组每天给药4次，时间间隔缩短到间 6h。三组小鼠的每次灌胃铃铛刺提取液的浓度为0.02mL·g。另外，要特别注意，在采取小鼠进行实验的整个过程中，对小鼠禁食、禁水大约12h-16h之间。对于小鼠的饲喂过程是正常进行，最后再注射提取液后密切观察小鼠外观、行为活动、呼吸、分泌物、排便、死亡等多种情况的变化情况，根据小鼠的死亡率判断提取液剂量更改，死亡数大于百分之三十时，需要换半数致死量（LD50）再次测定，当发展提取液不会引起小鼠死亡，需要测定小鼠对于提取液的最大耐受量，连续观察小鼠各项情况变化7周。

（2）小鼠的最大耐受剂量（MTD）测量。

最大耐受剂量测量方法试用与提取液的毒性极微弱，同时未毒性的受试样品。在给小鼠注射最大浓度以及最大灌胃容量的提取液后，小鼠动物仍然没有出现死亡。随后给予健康小鼠20只进行研究，规定小鼠重量需达到18-22kg范围内，雌雄各一半。同样实验前小鼠需要禁食大约12h，不需要禁水。要求受试样品采用灌胃方式注射，灌胃容量设置为0.02mL/g BW，一天内要进行3次灌胃操作。灌胃结束，密切观察小鼠的中毒表现以及死亡情况，连续观察半个月。同时需要对于两组小鼠的其他情况进行密切观察，记录小鼠体重变化、外观、行为、分泌物、排泄物、死亡情况等，待小鼠出现中毒症状后需要立即记录小鼠的反应症状、中毒严重程度、中毒开始与结束时间、维持时间以及恢复时间等。最后通过观察小鼠各项指标计算出小鼠一天之内的最大给药剂量，通过此数据可以推算出小鼠在临床上的用药倍数。

1.2.3 铃铛刺花提取液抗疲劳作用

第一，进行小鼠爬杆实验：选择40只小鼠作为研究对象，小鼠雌雄各占一半，适应性喂养三天，随后将所有小鼠随机分成4组，分别是空白组，铃铛刺花提取液高剂量、中剂量、低剂量组，三组提取液的量分别设定为4 g/kg、2g/kg和3 g/kg，规定四组小鼠数量一致，各自10只。同样采取灌胃的方式对不同剂量组小鼠灌入铃铛刺花提取液，每天灌胃一次即可，剂量为0.2mg/10g小鼠，对于空白组小鼠灌胃同样剂量的生理盐水作对照，连续灌胃10天。要求在进行试验前，需要对小鼠进行训练，要求让小鼠学会爬杆。在十天灌胃结末半小时后，将小鼠放置在放25 cm长、直径为1 cm的有机玻璃竿上，要求玻璃竿表面光滑上，让小鼠的肌肉处于静力紧张状态，随后记录小鼠因为肌肉疲劳从玻璃棒竿上掉落的具体时间，连续进行三次实验，最后一次跌落时终止实验，累计三次的时间作为爬杆时间。延长率＝（给药组跌落时间－空白对照组跌落时间／空白对照组跌落时间×100%。

第二，进行小鼠游泳实验：同样选择在小鼠最后一次灌胃结束后的半个小时这一时间点进行实验，在小鼠的尾根部负荷小鼠体重5%的铅块，随后将小鼠放入已经自制好的水槽中进行游泳试验，要求水深度大约30cm，水温度30℃，尾部负重沙袋，对小鼠放手后开始计时，记录小鼠游泳从开始至头部完全没入水面并且小鼠头部不再上浮的整个过程的时间，该时间被认为是小鼠负重游泳的时间。

1.2.4 小鼠游泳结束后，早晚对小鼠体内的血清尿素氮(BUN)、血乳酸(BLA)含量进行有效测定

同样需要在小鼠连续灌胃铃铛刺花提取液的十天后，最后一次给药结束的半个小时，需要对小鼠禁食不禁水，小鼠在自制水槽中不负重游泳90分钟后，让小鼠休息一小时，随后采用眼球取血的方式取血0.5mL，即可向血液中加入肝素，保证血液不凝固，在以3000r/min的速度下离心，离心时间为一刻钟，随后取出上层血清，根据试剂盒所提供的方法对血清中的乳酸和尿素氮含量进行测定。

1.2.5 小鼠游泳结束后，对小鼠体内的肝糖原(LG)含量进行有效测定

前期处理与1.2.4中步骤一致，游泳结束后立即处死，取小鼠肝脏，使用生理盐水进行漂洗，随后用滤纸吸干肝脏表面的液体，进行称重，并且加入碱液对肝脏组织进行破坏，同时达到保留糖原的目的，按样本重量(mg)与碱液体积在1：3的条件下，将其一起加入试管中，使用保鲜膜将管口扎起，避免液体蒸发，同样需要在保鲜膜上用针头扎一小孔，防止试管中气体发生热胀冷缩的情况，放入沸水中浴煮20min，流水冷却。按试剂盒要求将糖原水解液进一步制备成糖原检测液，测定肝糖原含量。

1.3 统计学处理法

将患者临床疗效输入spss22.0统计学软件分析处理。独立样本t值检验定量资料，由（±s）表示，卡方检验定数资料，用（%）表示，组间差异经P值表示，P＜0.05表示统计学意义成立。

2 结果

经急性毒性实验分析后，得出小鼠对于铃铛刺花的最大耐受量大约120g/kg流浸膏，该数据相当于人口服用量的300倍。

与空白对照组相比较，铃铛刺花提取液可以明显提与升小鼠的爬杆时间和小鼠游泳时间，同时中、高剂量两组的效果最为明显，组间存在显著差异（P＜0.01）。具体见表1：

表1：提取液对小鼠爬竿与游泳的影响情况

铃铛刺花提取液对于降低小鼠运动后血乳酸和尿素氮含量有明显作用，并且还可以显著提高运动后小鼠肝糖原的含量，组间差异具有统计学意义（P＜0.01），具体见表2：

表2：提取液对小鼠体内各项指标影响

3 讨论

铃铛刺又被称作盐豆木，其主要生长地区是我国的西北部滴入，尤其在我国新疆地区的大部分盐碱荒漠地中铃铛刺数量较多，铃铛刺属于灌木类植物的一种，铃铛刺喜光照充足的环境，同时其具有抗盐碱、抗干旱的特性，对于荒漠地区具有良好的固沙作用，并且可以有效的改善荒漠滴入的盐碱土质情况。在我国的西北部大部分地区都会将铃铛刺用作高产牧草，在民间人们将其又称为“刺梅花”，它的嫩叶与花朵均可以进行食用，并且叶与花中含有多用营养物质，味道十分鲜美，具有很高的食用价值。本文研究发现铃铛花具有良好的抗疲劳作用，研究数据结果显示，铃铛刺花提取液可以明显提与升小鼠的爬杆时间和小鼠游泳时间，同时中、高剂量两组的效果最为明显，组间存在显著差异（P＜0.01）。铃铛刺花提取液对于降低小鼠运动后血乳酸和尿素氮含量有明显作用，并且还可以显著提高运动后小鼠肝糖原的含量，组间差异具有统计学意义（P＜0.01）。由此说明，铃铛花刺可以有效的降低运动后乳酸的堆积，具有良好的抗疲劳功能，可增加有氧运动的糖分供给，具有良好的效果。