手足口患儿EV71、CoxA16和其他肠道病毒感染情况及基因型分析

宋莓

(平顶山市新华区疾病预防控制中心 检验科，河南 平顶山 467000)

手足口病是以手、足、口出现水疱为特征的病毒感染类疾病，其中以婴幼儿较为高发且传染性较强，严重影响患儿的身体健康[1-2]。目前，多数研究学者普遍认为手足口病主要由肠道71 型(EV71) 病毒及柯萨奇A16型肠道(CoxA16) 病毒感染引起，EV71 病毒与CoxA16病毒虽存在类似的基因结构，但CoxA16 病毒感染后并发症发生较少，而EV71 病毒感染后易对患儿中枢神经系统产生影响，对患儿神经功能造成安全隐患[3-4]。但近几年研究中多以病毒感染后病毒株基因序列进化为热点，对患儿手足口病肠道病毒整体感染情况研究较少[5]。因此，为进一步明确患儿手足口病EV71、CoxA16 和其他肠道病毒感染情况，为临床拟定针对性的治疗方案及患儿中枢神经损伤预防方案，本研究现选择平顶山市新华区疾病预防控制中心收治的104例手足口病患儿进行 研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择本院2018年7月至2020年12月收治的104例手足口病患儿作为研究对象。该研究经本院医学伦理委员会审批。

纳入标准：均出现手足疱疹等症状，且均符合《手足口病诊疗指南(2018年版)》[6]中手足口病的诊断标准。年龄≤6 岁；患儿家属签署知情同意书。

排除标准：存在心脏系统疾病；存在手足口病既往治疗史；症状明显好转；重症休克；临床资料不完整。

1.2 检测试剂及仪器

Hank's 液购自上海抚生实业有限公司；高纯度病毒检测试剂盒(HIGH PURE VIRAL RNA Kit) 购自上海西宝生物科技有限公司；病毒三重荧光检测试剂盒购自北京百奥莱博科技有限公司；全自动流式细胞仪购自美国贝克曼库尔特公司。

1.3 方法

(1) 病毒核酸检测：入院后，采集患儿粪便及肛拭子标本， 加入0.6 mL Hank's 液后重悬，振荡器涡旋1 min， 加入离心机(r=8 000 r/min)离心5 min， 取上清， 采用高纯度病毒检测试剂盒(HIGH PURE VIRAL RNA Kit) 提取病毒核酸后，采用实时荧光RT-PCR 检测对粪便标本进行检测，记录并整理实验结果。(2) 外周血白细胞水平检测：采集患儿清晨空腹静脉血4 mL，离心后取上清，采用CytoFLEX型全自动流式细胞仪测定白细胞水平。

1.4 观察指标

(1) 患儿肠道病毒病原学构成情况；(2) 患儿EV71病毒及CoxA16 病毒VP1 基因中各基因型同源性分析；(3) 患儿手足口病临床症状及外周血白细胞分析。

1.5 统计学方法

使用SPSS 19.0 统计学软件对研究数据进行分析，计数资料采用χ2检验，并以n(%) 表示；符合正态分布的计量资料采用t检验，多组间计量资料比较采用F检验，并以±s表示，P＜0.05 表示差异有 统计学意义。

2 结 果

2.1 患儿肠道病毒病原学构成情况

104例手足口病阳性样本中，EV71 病毒感染54例(51.92%)，CoxA16 病毒感染7例(6.73%)，其他肠道病毒感染43例(41.35%)，EV71 病毒感染比例高于CoxA16 病毒感染比例，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 患儿肠道病毒病原学构成情况[n(%)]

2.2 患儿EV71 病毒及CoxA16 病毒EVP1 基因中各基因型同源性分析

CoxA16 VP1 基因序列与A、B、C 基因型代表株核苷酸同源性为82.6% ～82.9%，与D 基因型代表株核苷酸同源性为92.7% ～99.2%；EV71 VP1 基因序列与C4基因型代表株核酸同源性为92.4% ～96.8%，与C4a 基因型代表株核苷酸同源性为94.3% ～96.8%，与C4b 基因型代表株核苷酸同源性为92.4% ～93.7%。

2.3 患儿手足口病临床症状及外周血白细胞分析

EV71 病毒、CoxA16 病毒及其他肠道病毒感染组之间发热、皮疹等临床症状所占比例及外周血白细胞水平比较，差异均无统计学差异(P＞0.05)。见表2。

表2 患儿手足口病临床症状及外周血白细胞分析

3 讨 论

手足口病作为全球性、急性传染病，在全球多个国家均出现过爆发流行，该病以传播速度快、手足口症状显著为主要特征，严重威胁患儿健康成长[7-8]。既往报道研究指出[9-10]，EV71 病毒及CoxA16 病毒作为诱发患儿手足口病最常见的2 种病毒，病毒活性强且与VP1 全长基因序列同源性较高，可能存在相互作用关系，加重患儿临床症状。

本研究患儿肠道病毒病原学构成情况显示，104例手足口病阳性样本中，EV71 病毒54例(51.92%)，CoxA16病毒7例(6.73%)，其他肠道病毒43例(41.35%)，表明EV71 病毒在手足口病患儿病毒感染中占比较重。相关研究分析[11]，EV71 病毒作为微小病毒科中的肠病毒群，传染性强，可经咽部及肠道入侵患儿机体，诱发患儿手足口病等病症，继而引起无菌性脑膜炎等并发症，对患儿的身体健康影响较为严重。

本研究中，CoxA16 VP1基因序列与A、B、C 基因型代表株核苷酸同源性为82.6% ～82.9%，与D 基因型代表株核苷酸同源性为92.7% ～99.2%；EV71 VP1 基因序列与C4 基因型代表株核酸同源性为92.4% ～96.8%，与C4a 基因型代表株核苷酸同源性为94.3% ～96.8%，与C4b 基因型代表株核苷酸同源性为92.4% ～93.7%，提示手足口病患儿的CoxA16 及EV71 VP1 基因序列均存在高同源性的病毒株。罗玲玲等[12]通过对手足口病患儿的CoxA16 及EV71 病毒进化树分析显示，CoxA16 及EV71 病毒在进化树上分别处于不同分支上，表明手足口病患儿至少存在多个病毒传播链。此外，有研究发现[13]，部分手足口病患儿病毒分离株在进化树上呈聚集现象，表明部分手足口病病毒株可能存在共同进化来源，具有不同区域间的传播性。EV71病毒、CoxA16 病毒及其他肠道病毒感染组之间发热、皮疹等临床症状所占比例及外周血白细胞水平相近，提示手足口病各项肠道病毒诱发患儿的临床症状表现一致，且对白细胞敏感度相当。

综上所述，手足口病患儿中EV71 病毒感染比例相比于CoxA16 病毒感染比例更高；且CoxA16 及EV71 VP1 基因序列均存在高同源性的病毒株；但各病毒株感染后临床症状表现几乎一致。但介于本研究样本量较少，后续临床研究中仍需进一步扩大样本量，对患儿肠道病毒感染情况进行分析，为临床实践提供参考。