丁雪珍
(潍坊职业学院农林科技学院,山东 潍坊 262737)
长寿花(Narcissus jonquilla L.)又名寿星花、伽蓝花,为景天科伽蓝菜属多肉植物。多年生肉质草本。株高10-30厘米。圆锥状聚伞花序,花序长7-10厘米。每株有花序5-7个,花瓣4片,花朵色彩丰富。近年来长寿花凭借植株小巧、株型紧凑、花色艳丽、花量大、花期长、易养植、耐干旱等特点脱颖而出,成为人见人爱的室内观花小盆栽。
长寿花通常采用播种、扦插和分株等繁殖,但由于市场销量大的重瓣系列多为进口品种,扦插繁殖退化严重,播种繁殖变异较大,远远满足不了市场的需要。为保持重瓣长寿花品种的优良特性,同时提高其繁殖速率,为生产提供大量优质种苗,本试验对重瓣长寿花进行组织培养,以找到一种适合重瓣长寿花的快速繁殖方法。
试验用长寿花品种为紫缤,取自潍坊职业学院农林科技学院智能温室。2017年11月从盆栽植株上选取幼嫩叶片和茎段作为外植体。
以MS为基本培养基,添加2%-3%的白砂糖和0.65%的琼脂粉。根据各阶段试验设计添加不同浓度的6-BA和NAA,pH值均为6.2-6.4。按照固体培养基常规制作方法进行配制、分装、高压灭菌,灭菌完成后取出冷却备用。
从盆栽植株上,选取健壮无病虫害的最上端第一片展开叶片和幼嫩茎段(2~3cm)作为外植体。
将茎段剪去叶片,留下大约5mm长的叶柄;叶片不用修剪。把处理好的茎段和叶片冲洗干净,再放到5%的洗洁精溶液中浸洗约5min,最后用流水冲洗干净,放到带盖的广口瓶中备用。
超净工作台按照常规进行消毒后,将洗净的外植体放到超净工作台上,先用75%酒精消毒30-60s,再用有效氯浓度1%的次氯酸钠溶液灭菌 10~20 min。最后,用无菌水冲洗3遍后,分别接种于不同的诱导培养基上。
将外植体接种于诱导培养基上,诱导分化试验所用激素浓度和配比如下:6-BA选择0.2mg/L,0.5mg/L两个浓度梯度,NAA选择0.1mg/L,0.2mg/L两个浓度梯度,以不添加任何激素的空白MS培养基为对照,共5个处理,每个处理接种20瓶。接种后放到温度25℃左右、光照时间12 h/d、光照强度1000~2000 lx的培养条件下,每天观察记录分化情况,30天统计分化率。
以初代培养分化出的新生小苗(或愈伤组织)为转接材料,把它们接种到不同配方的MS培养基上,6-BA(mg/L)设0.1,0.5,1.0三个浓度梯度,NAA(mg/L)设0.1,0.2两个浓度梯度。30天统计增殖情况。
将幼苗剪切成1.5~2.0cm长的嫩茎,转接至1/2MS培养基上,添加IBA浓度(mg/L)为0.1,0. 25,0.5 三个梯度。每天观察记录生根情况,15天统计生根率,从而筛选出最适生根培养基配方。
外植体在不同配方的初代培养基的分化情况见表1、表2。
表1 不同培养基配方对长寿花叶片诱导分化的影响
表2 不同培养基配方对长寿花茎段诱导分化的影响
1 0.2 0.1 55 18.2 2 0.2 0.2 65 38.5 3 0.5 0.1 80 62.5 4 0.5 0.2 95 84.2 5 0 0 0 0
由表1可知,不同浓度的激素配比,既影响到叶片的愈伤组织发生率,也影响到芽的分化率。6-BA0.5mg/L与NAA0.2mg/L组合下,长寿花叶片分化率高,为最佳组合。
由表2可以看出,6-BA0.5mg/L与NAA0.1mg/L的激素组合,长寿花茎段不仅分化率高,而且分化芽数量多,芽体大小适中,为茎段培养最佳初代培养基。
将初代培养得到的小芽转入不同激素浓度的增殖培养基中,观察继代增殖情况,30天的统计结果见表3。
表3 不同浓度激素对长寿花增殖培养的影响
由表3可知, 6-BA与NAA组合对长寿花的增殖有明显的促进作用,但长寿花对激素比较敏感,高浓度的6-BA虽能促进增殖,但苗体细弱不利于后期的生根与移栽。所以,增殖培养适宜的激素组合为6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L或6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L。
长寿花组培苗在生根培养基上,大约5天左右就开始生根,同时苗体也开始长高,不同浓度IBA处理对生根的影响见表4。
表4 不同浓度IBA对长寿花生根培养的影响
IBA(mg/L) 0.1 0.25 0.5根原基形成时间(天) 7 5 8生根率(%) 92 100 100根系生长情况 较细 健壮基部有愈伤组织,生长较慢
由表4可以看出,处理2(1/2MS +NAA0.25mg/L)不仅生根速度快,而且生根率高、根系生长健壮,是最佳生根培养基。
试验结果表明,以重瓣长寿花的叶片和茎段作为外植体进行组培快繁,操作容易、速度快,便于推广。
叶片诱导(图1)、茎段诱导(图2)、增殖培养(图3)情况如下图所示。
图1
图2
图3