自制复方中草药膏对小鼠烫伤皮肤的修复作用

康静静，王昭悦，张子雁，焦 哲，张金花，阴正兴，姬广宙，霍 军

(1.河南牧业经济学院 动物医药学院， 河南 郑州 450046；2.郑州市金水区农业农村工作委员会， 河南 郑州 450000；3.河南贝里奥生物科技有限公司，河南 郑州 450000)

烫伤是指由于光、电、热等作用于机体引起的皮肤、黏膜、皮下组织等的损伤，属于常见的外伤疾病[1]。根据组织病理学观察皮肤烫伤程度可将其分为三类：Ⅰ°、Ⅱ°(浅Ⅱ°和深Ⅱ°)、Ⅲ°，不同程度的烫伤会引起不同程度的皮肤缺损、炎性反应及机体机能障碍等[2]。近年来，由于中药毒副作用小、不易产生药物依赖性等优点，使用中药制剂治疗烫伤越来越受到人们的重视。药膏(又称软膏、油膏)，是采用动、植物油、蜂蜜、凡士林等基质加入药物细粉(或提取的有效成分)混合而成，具有一定的黏稠性，对皮肤具有保护、湿润、润泽作用，涂于皮肤或黏膜能渐渐软化或溶化，有效成分可被缓慢吸收，持久发挥疗效[3]。本实验通过建立小鼠皮肤烫伤模型，使用自制复方中草药膏涂抹烫伤皮肤，同时以无药物使用小鼠作为空白对照，从病理组织学角度探讨自制中草药膏在皮肤烫伤修复中的作用，为复方中草药膏的开发应用提供临床依据。

1 材枓与方法

1.1 试剂与器材

10%福尔马林固定液，乙醚，75%乙醇溶液，复方中草药(金银花、乳香、没药等)，5 mL注射器，恒温水浴箱，Leica手动轮转切片机，光学显微镜成像系统等。

1.2 实验动物

6～8周龄Balb/c小鼠，购自郑州大学实验动物中心[SCXK(豫)2010-0002]，体重18～20 g，饲养1周适应环境后，取30只小鼠随机分为2组(空白对照组和复方中草药膏组)，分笼饲养。其中每组各取3只作为正常对照，其余12只用于烫伤模型建立。

1.3 复方中草药膏的制备

分别称取适量的中草药(金银花、没药、乳香、血余炭、冰片等)，煎液后，加入95%乙醇沉淀，取上清液，再加入一定量的羟苯乙酯、羊毛脂和凡士林，经浓缩、静置，灭菌处理，冷却后制成药膏使用。

1.4 小鼠背部皮肤烫伤模型的建立

根据参考文献[4]中所示建模方法，建立小鼠背部皮肤烫伤模型。烫伤后小鼠按原有分组单笼饲养并给予饲料及水分。实验过程中保证垫料干燥清洁，通风良好。

1.4.1 给药方法

空白对照组小鼠背部烫伤处不做特殊处理，自然愈合；复方中草药膏组小鼠背部烫伤处皮肤给予涂膏处理，自建模后早晚各给药1次，连续给药21d，单笼饲养。

1.4.2 组织取材及样品处理

从建模后首次给药计算，分别在建模后第7 d、第14 d和第21 d末次用药1 h后，每组随机选取3只小鼠，颈椎脱臼处死，将烫伤处皮肤组织取出，置于新鲜配制的福尔马林固定液中固定备用。

1.4.3 病理组织学观察

将固定完全的皮肤组织制备石蜡组织切片，切片厚度不超过4 μm，HE染色后，显微镜下观察烫伤处皮肤的愈合情况并采图。

2 小鼠烫伤皮肤组织病理学观察结果

2.1 空白对照组小鼠烫伤皮肤的组织病理学结果

如图1所示，烫伤7 d后，空白对照组小鼠皮肤烫伤创面表皮细胞受损，损伤处可见较薄的肉芽组织层，其中有少量新生毛细血管，烫伤处皮下结缔组织明显水肿，组织间有大量粉红染色的水肿液浸润，可见炎性细胞(图1-A)；烫伤14d后，对照组小鼠烫伤处可见新生毛细血管和大量的成纤维细胞(图1-B)，炎性细胞浸润明显(图1-C)；烫伤21d后，可见烫伤边缘处皮肤大部分已修复完全，皮下组织内可见新生的皮肤附属结构，但仍可见少量炎性细胞浸润(图1-D)。

图1 空白对照组小鼠烫伤皮肤的组织学观察结果

2.2 复方中草药膏组小鼠烫伤皮肤的组织病理学结果

如图2所示，烫伤7 d后，用药组小鼠烫伤皮肤创面可见明显的新生肉芽组织层，表皮细胞已有增殖，皮下结缔组织有水肿，以及炎性细胞浸润(图2-A)；烫伤14 d后，用药组小鼠烫伤处可见丰富的新生毛细血管和大量的成纤维细胞，肉芽组织间可见炎性细胞浸润(图2-B)，部分区域可见纤维细胞和胶原纤维分布(图2-C)；烫伤21 d后，可见烫伤处边缘皮肤已修复完全，形成了完整的表皮结构，可见表皮角质层，皮下组织内可见新生的皮肤附属结构(图2-D)。

图2 复方中草药组小鼠烫伤皮肤的组织学观察结果

3 讨论

根据组织病理学观察结果，与空白对照组相比，小鼠烫伤处皮肤经过复方中草药膏外涂治疗后，表皮及真皮结构组织处的炎性反应均有明显的改善，主要表现在炎性渗出液减少；烫伤处肉芽组织生成和成熟速度加快，新生毛细血管和成纤维细胞数量增加；烫伤后14 d即可见成熟的纤维细胞和胶原纤维；烫伤处表皮细胞再生良好，主要表现在表皮已完全再生，并出现角质化。上述实验结果提示，所用复方中草药膏可通过减少烫伤局部渗出和炎症反应，加快肉芽组织生长等方式促进烫伤皮肤的修复。

目前临床上常使用抗菌、消炎药等治疗烫伤，但抗菌消炎药存在易过敏、易产生耐药性、降低机体防御功能等缺点[5]。而传统中药尤其是外用中药在伤口治疗中具有独特疗效，故目前复方中药制剂药物在治疗皮肤外伤中应用较广泛[6-9]。根据皮肤创伤愈合的病理学修复过程，通常在创伤发生后数小时内便出现炎症反应，且表皮开始再生；2-3 d伤口开始收缩，14 d左右停止；大约3 d时肉芽组织开始增生，伤后近1个月皮肤基本愈合完全。本实验通过制备石蜡组织切片，从病理组织学角度观察不同时间、不同组别的Balb/c小鼠皮肤创面愈合情况，结果显示符合皮肤愈合过程。与空白对照组相比，实验组愈合修复效果较好，可以作为自制复方中草药膏促进烫伤创面愈合作用的判定标准。本实验连续外涂复方中草药膏21 d后，发现复方中草药膏能显著提高烫伤皮肤的愈合率，缩短创面愈合的时间。有关该药膏治疗烫伤的作用机制有待进一步研究。