不同剂型艾速平对乙醇致小鼠急性胃溃疡出血模型的保护作用#

巫瑶 刘丹阳 于洋 陈雪棽 刘琳玲 万莉红 朱玲△ 易智慧

（1四川大学华西基础医学与法医学院药理学教研室，四川 成都 610041；2 四川大学华西医院神经外科，四川 成都 610041；3 四川大学华西基础医学与法医学院2015级基础医学，四川 成都 610041；4 四川大学华西医院消化内科，四川 成都 610041）

消化系统溃疡是临床常见疾病，尤其以胃、十二指肠溃疡最为常见，主要由各种应激、药物因素诱发，具有病程长、易复发等特点[1]。目前关于消化系统溃疡形成机制的公认理论是胃黏膜的攻击因子与保护因子水平失衡，其中胃酸、胃蛋白酶增多以及幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，HP）感染是导致胃粘膜损伤的主要因素[2]。因此临床对于消化系统溃疡的常规治疗是抑制胃酸分泌与抗幽门螺杆菌感染联合。

国产艾司奥美拉唑钠（艾速平）属于质子泵抑制剂（Proton pump inhibitor，PPI），是消化系统溃疡的一线治疗药物，可持续抑制胃酸分泌，减少消化性溃疡活动性出血[3]。最近临床研究表明，艾速平注射液与进口奥美拉唑钠制剂——耐信在相同剂量（40 mg）治疗下的抑酸效果相当[4]。近期艾速平肠溶胶囊获批上市，该口服制剂质量稳定、疗效确切且价格低廉，为消化系统溃疡治疗提供了更多的用药选择。为探究艾速平注射液与肠溶胶囊对消化系统溃疡的疗效差异，本文以无水乙醇灌胃建立小鼠急性胃溃疡出血模型，评价不同剂型艾速平对胃酸、胃蛋白酶以及溃疡形成的影响，以期为临床选择适当的治疗药物剂型提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物与试剂

艾速平注射液购自正大天晴药业集团，40 mg，201230148；艾速平肠溶胶囊购自正大天晴药业集团，20 mg，19062501；无水乙醇（分析纯）购自成都金山化学试剂有限公司，2500 mL，20200602；氯化钠注射液购自四川科伦药业股份有限公司，250 mL：2.25 g，N20122707A；胃蛋白酶活性检测试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司，100T/48S，20210125；BCA蛋白浓度测定试剂盒（增强型）购自上海碧云天生物技术有限公司，500次，112720210126；pH精密试纸购自上海三爱思试剂有限公司，2.7-4.7，20200907。

1.1.2 动物

清洁级雌性昆明小鼠，6-8周龄，购自成都达硕动物有限公司，饲养于室温22-24℃、相对湿度50-60%、12 h昼夜循环交替照明环境中，所有小鼠自由摄食饮水并保持笼舍清洁。适应性饲养5 d后进行试验。

1.2 方法

1.2.1 急性胃溃疡小鼠模型建立及分组

将30只雌性昆明小鼠随机分为对照组、胃溃疡模型组、高、低剂量艾速平注射液组（6.06 mg•kg-1、3.03 mg•kg-1，腹腔注射）、高、低剂量艾速平肠溶胶囊组（6.06 mg•kg-1、3.03 mg•kg-1，灌胃）（n=5）。除对照组外，所有小鼠按相应给药途径及剂量预防性给药5 d；末次给药后2 h，无水乙醇0.2 mL灌胃建立急性胃溃疡模型。对照组小鼠灌胃等量生理盐水，所有小鼠均于1 h后处死。

1.2.2 胃液pH值测定

用1 mL注射器沿着胃大弯侧部抽取胃液，用pH试纸测定胃液pH值。

1.2.3 胃溃疡形成情况观察及胃溃疡指数测定

沿胃大弯侧部剖开小鼠胃腔，去除胃内残杂后用5 mL蒸馏水冲洗胃腔。将各组小鼠洗净后的全胃自然展开，胃内面朝上平铺于白色洁净滤纸上，肉眼观察胃黏膜面溃疡形成情况，并采用解剖显微镜（10倍）拍照并计算胃溃疡指数。溃疡指数计算方法：解剖显微镜下观察胃黏膜出血、溃疡面的多少、大小及其分布部位，测量各个溃疡面的长径，长径≤1 mm者计为1分；>1～2 mm者计为2分；>2～3 mm者计为3分；>3～4 mm者计为4分；>4 mm者计为5分，各溃疡面计分之和即为溃疡指数。

1.2.4 胃蛋白酶活力测定

称取约0.1 g 胃组织加入1 mL胃蛋白酶活性测定试剂盒中的提取液冰浴匀浆后，4 °C条件下、10000 rpm离心10 min取上清，采用BCA试剂盒在562 nm处测定其蛋白浓度Cpr。采用紫外分光光度法使用胃蛋白酶活性检测试剂盒，测定所有样本在275 nm处测定吸光度，并计算胃蛋白酶酶活性（U·mg prot-1）=1.31×（A测定-A对照）/Cpr

1.3 统计学方法

所有数据采用统计学软件Prism 5.0进行统计处理，计量资料以均数±标准差（±SD）表示，采用t检验；P<0.05被认为有统计学差异。

2 结果

2.1 不同剂型艾速平对胃溃疡小鼠胃液pH值、胃蛋白酶活力的影响

与对照组相比，胃溃疡模型小鼠胃蛋白酶活性明显升高（P<0.05），而胃液pH值未见明显改变（P>0.05）；与胃溃疡模型组相比，低剂量艾速平肠溶胶囊以及高、低剂量艾速平注射液治疗均可明显降低胃蛋白酶活性（P<0.05），而胃液pH 值仍未见明显改变（P>0.05），见表1。

表1 胃溃疡小鼠胃液pH值、胃蛋白酶活力（±SD，n=5）

表1 胃溃疡小鼠胃液pH值、胃蛋白酶活力（±SD，n=5）

注：与对照组相比，*P<0.05；与模型组相比，#P<0.05。

组别 剂量（mg·kg-1） 胃液pH值 胃蛋白酶活力（U·mg prot-1） 对照组 - 1.9 ± 0.95 0.02737±0.00462 胃溃疡模型组 - 3.1 ± 0.10 0.05762±0.00306* 高剂量艾速平注射液组 6.06 3.1 ± 1.09 0.02545±0.00574# 低剂量艾速平注射液组 3.03 3.0 ± 0.18 0.01745±0.01296# 高剂量艾速平肠溶胶囊组 6.06 3.4 ± 0.50 0.04264±0.01166 低剂量艾速平肠溶胶囊组 3.03 3.0 ± 0.25 0.02397±0.01404#

2.2 不同剂型艾速平对胃溃疡小鼠胃溃疡形成情况及溃疡指数的影响

与对照组相比，胃溃疡模型小鼠明显出现胃粘膜溃疡、出血，溃疡指数与对照组相比明显升高（P<0.05）；与胃溃疡模型组相比，低剂量艾速平肠溶注射液治疗明显减轻小鼠胃粘膜溃疡、出血，明显降低溃疡指数（P<0.05），见图1，表2。

图1 小鼠胃溃疡形成情况

表2 胃溃疡小鼠溃疡指数（±SD，n=5）

表2 胃溃疡小鼠溃疡指数（±SD，n=5）

注：与对照组相比，*P<0.05；与模型组相比，#P<0.05。

组别 剂量（mg·kg-1） 溃疡指数 对照组 - 0.0±0.00 胃溃疡模型组 - 4.0±0.00* 高剂量艾速平注射液组 6.06 2.7±1.16 低剂量艾速平注射液组 3.03 1.5±1.58# 高剂量艾速平肠溶胶囊组 6.06 2.2±1.48 低剂量艾速平肠溶胶囊组 3.03 2.3±1.25

3 讨论

乙醇是常见的致胃黏膜损伤的攻击因子，对胃粘膜有极强的腐蚀性。乙醇通过代谢物乙醛与胃蛋白结合, 促进中性粒细胞浸润、释放氧自由基、髓过氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）等导致胃粘膜损伤[5]，因而是常用的复制急性胃溃疡模型的手段。

质子泵即H+- K+-ATP酶，具有催化和转运H+、K＋的功能，是胃酸分泌的最终环节。质子泵抑制剂（Proton pump inhibitor，PPI）能特异性抑制胃壁细胞中的H+- K+-ATP酶，发挥抑制胃酸分泌的作用[6]，是目前治疗消化系统溃疡的首选药物。艾司奥美拉唑是奥美拉唑的S-异构体，与奥美拉唑相比首过消除更低、生物利用度高，且具有根除幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，HP）的作用，目前广泛用于临床治疗胃、十二指肠溃疡[7]，其作用机制主要包括抗酸以及抗氧化作用，对p38 MAPK和NF-κB信号通路具有明显的抑制作用[7]。而临床研究表明，艾司奥美拉唑晚餐前一次服用40 mg对夜间胃酸分泌的抑制作用明显优于早餐前服用[8]。艾速平作为国产艾司奥美拉唑钠，目前临床使用的剂型包括针剂和肠溶胶囊。其中艾速平肠溶胶囊是最近上市的新剂型，以肠溶微丸充填胶囊、易于吞咽，尤其适合儿童、老年人、精神病患者和吞咽困难患者，可大幅提高患者的顺应性，具有明显的临床优势。

本研究通过以相同剂量的艾速平针剂和肠溶胶囊分别应用于小鼠急性胃溃疡模型，通过胃酸、胃蛋白酶以及胃溃疡形成评价不同剂型艾速平的疗效差异，结果发现：低剂量艾速平肠溶胶囊（对应临床等效剂量20 mg）、高剂量艾速平注射液（对应临床等效剂量40 mg）、低剂量艾速平注射液（对应临床等效剂量20 mg）对小鼠急性胃溃疡模型具有较好的预防作用，主要体现为明显抑制胃蛋白酶活性，减少胃溃疡、出血形成。然而在该动物模型中，pH值未见明显影响，这可能是由于本次小鼠模型采用的无水乙醇建立急性胃粘膜损伤，对pH值影响较小有关；也与pH值测定方法有关，本次实验采取pH试纸进行测定，灵敏度不足。

综上所述，低剂量艾速平肠溶胶囊（对应临床等效剂量20 mg）、高剂量艾速平注射液（对应临床等效剂量40 mg）、低剂量艾速平注射液（对应临床等效剂量20 mg）对乙醇致小鼠急性胃溃疡出血模型具有一定的保护作用，可减轻溃疡形成、抑制胃蛋白酶活性。