血清miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a水平与AMI患者PCI术后MACE发生的关系

孙大敬 王小虎 曹凌飞 秦明明 龙慧珍

作者单位：1.河南省人民医院省直第一医院（河南省直属机关第一门诊部）心内科，河南，郑州450000

2.河南省省立医院心内科，河南，郑州450000

3.河南省胸科医院心内科，河南，郑州450000

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）为冠状动脉堵塞所引起的严重冠心病，可引发多种并发症，对患者生命安全威胁极大。经皮冠状动脉介入治疗（percutaneous transluminal coro⁃nary intervention，PCI）是当前临床治疗AMI 的重要手段之一，其可疏通堵塞血管，改善心肌缺血，缓解患者临床症状［1⁃2］。研究发现，AMI 患者术后易发生主要不良心血管事件（major adverse cardiovascular events，MACE），包括心绞痛、急性心力衰竭、心源性死亡等［3］。及早预测MACE 发生，有利于向患者实施针对性干预措施，以降低MACE 发生风险，改善其预后。微小RNA（microRNA，miRNA）能够与靶基因mRNA 互补结合，继而调控靶基因表达［4］。报道指出，miRNA能够调控多类蛋白编码基因，在多数细胞生命活动中扮演了重要角色，在多种疾病尤其是肿瘤和心血管疾病中参与了相关病理改变［5⁃6］。本次研究探讨血清miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a 水平与患者术后MACE 发生的关系，以期为指导临床防治MACE 提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月至2019年12月本院89 例AMI 患者，纳入标准：①符合《急性ST 段抬高型心肌梗死诊断与治疗指南》［7］中的诊断标准；②年龄≥18 岁；③满足PCI 治疗指征，且在发病24 h 内完成PCI 治疗；④临床资料完整。排除标准：①脑血管病急性期；②严重肝肾功能不全；③妊娠及哺乳女性；④恶性肿瘤；⑤存在先天性、肺源性或风湿性等其他类型心脏病、心肌炎、主动脉夹层等；⑥自身免疫性疾病；⑦结缔组织疾病；⑧急性感染。根据住院期间患者是否并发MACE，将其分为MACE 组（n=26）和无MACE 组（n=63），其中MACE 组中梗死后心绞痛14 例、急性心力衰竭8 例、心源性死亡4 例。患者或家属对本研究知情且签署同意书，本次研究获得本院伦理委员会审批通过。

1.2 方法

1.2.1 血清miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a水平检测

采集患者外周静脉血3 mL 至无菌干燥试管中，3 000 r/min 离心15 min 后分离血清，于-80℃环境中保存待检。向含样本的离心管中加入1 mL Trizol 溶液，匀浆，根据Trizol 说明书提取总RNA，计算其浓度和纯度。提取2 μL 总RNA 进行反转录操作，反转录试剂盒由北京艾德莱生物科技公司提供，采用20 μL 反转录体系，反转录体系过程：16℃60 min，42℃60 min，85℃5 min，4℃直至收取。将收取的cDNA 于-20℃环境中保存。依照GeneBank 提供的基因序列，进行miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a 引物序列合成（上海生工生物工程技术服务有限公司合成）。见表1。

表1 miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a 引物序列Table 1 Primer sequences of miR⁃155，miR⁃302b and miR⁃208a

进行扩增反应，PCR 扩增仪美国ABI step one实时反应PCR 扩增仪，PCR 总反应体系为20 μL，qRT⁃PCR 反应条件：94℃预变性3 min；94℃20 s，60℃20 s，40 个循环；72℃40 s。记录Ct 值，将U6作为内参照基因，检测miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a基因，通过qRT⁃PCR Soft 3.0 计算各基因表达量。

1.2.2 临床资料收集

收集MACE 组和无MACE 组临床资料，包括性别、年龄、吸烟史、冠心病家族史、高血压史、糖尿病史、高血脂史、心肌梗死部位、心功能分级、心率（heart rate，HR）、收缩压（systolic blood pres⁃sure，SBP）、舒张压（diastolic blood pressure，DBP）、心肌肌钙蛋白Ⅰ（cardiac troponin I，cTnⅠ）及肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzyme，CK⁃MB）。

1.3 统计学分析

采用SPSS 20.0 软件进行数据分析，计数资料以n（%）表示，采用χ2检验；计量资料以（）表示，若各组满足正态性且两组间方差齐性，采用t检验行组间比较，采用多因素Logistic 回归分析AMI 患者PCI 术后发生MACE 的影响因素，以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MACE 组与无MACE 组临床资料比较

MACE 组与MACE 组心功能分级、CK⁃MB和cTnI 水平比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 MACE 组与无MACE 组临床资料比较［n（%），（±s）］Table 2 Comparison of clinical data between MACE group and non⁃MACE group［n（%），（±s）］

表2 MACE 组与无MACE 组临床资料比较［n（%），（±s）］Table 2 Comparison of clinical data between MACE group and non⁃MACE group［n（%），（±s）］

临床资料性别n χ2值P 值男女0.7570.384年龄<60 岁≥60 岁0.2130.644吸烟史0.2090.648冠心病家族史高血压史0.4650.495 1.1970.274糖尿病史0.2260.635高血脂史有无有无有无有无有无1.1470.284心肌梗死部位2.5770.462心功能分级心肌前壁心肌下壁广前壁其他Ⅰ～Ⅱ级Ⅲ～Ⅳ级72 17 58 31 48 41 23 66 61 28 21 68 27 62 27 34 17 11 56 33 HR（次/min）SBP（mmHg）DBP（mmHg）CK⁃MB（U/L）cTnI（mg/L）MACE 组（n=26）22（84.62）4（15.38）16（61.54）10（38.46）15（57.69）11（42.31）8（30.77）18（69.23）20（76.92）6（23.08）7（26.92）19（73.08）10（38.46）16（61.54）9（34.62）12（46.15）3（11.54）2（7.69）11（42.31）15（57.69）89.41±6.54 136.73±6.18 85.39±5.32 66.25±7.17 1.26±0.18无MACE 组（n=63）50（79.37）13（20.63）42（66.67）21（33.33）33（52.38）30（47.62）15（23.81）48（76.19）41（65.08）22（34.92）14（22.22）49（77.78）17（26.98）46（73.02）18（28.57）22（34.92）14（22.22）9（14.29）45（71.43）18（28.57）87.72±8.03 134.99±5.54 86.04±6.06 55.37±5.21 1.04±0.15 6.690 0.950 1.302 0.476 7.991 5.928 0.010 0.345 0.196 0.635<0.001<0.001

2.2 MACE 组与无MACE 组血清miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a 水平比较

MACE 组血清miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a水平均高于无MACE 组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表3。

表3 两组血清miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a水平比较（±s）Table 3 Comparison of serum miR⁃155，miR⁃302b and miR⁃208a levels between 2 groups（±s）

表3 两组血清miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a水平比较（±s）Table 3 Comparison of serum miR⁃155，miR⁃302b and miR⁃208a levels between 2 groups（±s）

组别MACE 组无MACE 组t 值P 值例数26 63 miR⁃155 1.92±0.20 1.43±0.15 12.670<0.001 miR⁃302b 6.23±0.69 4.16±0.57 14.632<0.001 miR⁃208a 49.71±4.52 38.57±3.61 12.275<0.001

2.3 AMI 患者PCI 术后MACE 发生的多因素Logistic 回归分析

Logistic 回归分析，结果显示心功能分级、CK⁃MB、cTnI、miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a 是AMI 患者PCI 术后MACE 发生的影响因素（P<0.05）。见表4。

表4 AMI 患者PCI 术后MACE 发生的多因素Logistic回归分析Table 4 Multivariate Logistic regression analysis of MACE in AMI patients after PCI

3 讨论

我国AMI 发病率长期处于高水平，病例已有200 万，死亡率也在不断升高［8］。PCI 是指通过心导管技术对阻塞的冠状动脉管腔进行疏通，以恢复心肌血流灌注，改善心肌缺血缺氧［9］。调查显示，AMI 患者进行PCI 治疗后，MACE 发生率为18%～42.4%［10］。MACE 是造成患者预后不良的重要原因，因此准确评估MACE 发生⁃意义重大。

miRNA 为小分子单链RNA，其基因编码长度一般为20～24 个核苷酸，能够精细调节生物生理功能。研究表示，血液循环中可见miRNAs 表达，对于心血管病变患者而言，miRNAs 可能成为其疾病诊断、预后评估的重要生物标志物［11］。汪晶等［12］进行动物实验，结果表明miR⁃221 在AMI 大鼠心肌组织中呈高表达，下调miR⁃221 能够抑制AMI大鼠心肌细胞凋亡。陈劲松等［13］研究分析老年AMI 患者血清miR⁃214 表达情况，显示患者血清miR⁃214水平明显高于正常人，且与CK⁃MB、cTnI 含量均呈正相关，其认为老年AMI 患者血清miR⁃214高表达可能与心肌损伤有关。本次研究选取miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a 为观察指标，其中miR⁃155 广泛表达于免疫细胞中，能够直接作用于细胞因子、转录因子等靶点，调节机体炎症反应和免疫功能。石一夫等［14］研究发现，2 型糖尿病合并冠心病患者血清miR⁃155 水平和甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇呈明显负相关，认为冠心病的发生与miR⁃155 有关。miR⁃302b 是目前研究较多的miRNA 家族成员之一，国内外研究表明，miR⁃302b 能够对细胞周期进行调控，参与了细胞损伤、坏死和凋亡过程［15⁃16］。miR⁃208a 是由Myh6基因的第29 号内含子编码，也是miRNA 家族的重要成员，其特异性表达于心脏，可调节肌球蛋白容量及肌纤维性能，在动脉粥样硬化、心肌梗死等病理过程中均发挥了重要作用［17］。本研究中MACE 组血清miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a 水平水平均高于无MACE 组，提示AMI 患者PCI 术后MACE 发生可能与miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a 有关。

资料显示，在心肌组织缺血性损伤时，miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a水平显著升高，而下调miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a 表达能起到组织保护作用。故而监测AMI患者血清miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a水平，有利于评估患者预后。

综上所述，PCI 术后发生MACE 的AMI 患者血清miR⁃155、miR⁃302b、miR⁃208a 水平均呈高表达，监测AMI 患者上述指标水平对评估患者预后、制定干预措施具有重要意义。