HPLC法测定烟酸片的溶出度

本文目的为建立烟酸片溶出度的高效液相测定方法。方法: 色谱柱为Hypersil Gold C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为0.1%三乙胺（用醋酸调节pH值至3.5）-甲醇（90:10），流速为1.0 mL·min-1，检测波长263 nm，柱温30 ℃。结果: 烟酸在2.20～39.93 mg·L-1浓度范围内显良好的线性关系（r=1）,平均回收率为99.51%（n=9），RSD为0.79%。结论: 该方法准确、可靠，可用于烟酸片的溶出度测定。

烟酸片属于维生素类药，烟酸也称维生素B3，分子式:C6H5NO2，化学名称3-吡啶甲酸，耐热、能升华。烟酸在体内转化为烟酰胺，再与核糖腺嘌呤等组成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，为脂质氨基酸、蛋白、嘌呤代谢，是组织呼吸的氧化作用和糖原分解所必需。多用于预防和治疗烟酸缺乏症、糙皮病，也用作血管扩张药，治疗高脂血症等[1]，亦可作为食品饮料的添加剂[2]，在食品领域应用较广。《中华人民共和国药典》2020年版二部，烟酸片溶出度采用紫外分光光度法检测[3]，近年来未见HPLC法测定烟酸片溶出度的相关报道[4-6]。本文研究建立了HPLC法测定烟酸片溶出度的方法，获得了满意的结果。

材 料

仪器Thermo UItiMate3000高效液相色谱仪，DAD3000检测器；UV2600紫外分光光度计；2015CCE070溶出仪；梅特勒XPE205DR电子天平（0.01 mg）。

试剂与药品烟酸对照品（批号：100434-201603，含量：99.8%，中国食品药品检定研究院）；甲醇为色谱纯，三乙胺、醋酸为分析纯，水为去离子水，其它试剂为分析纯；烟酸片（均为上海上药信谊药厂有限公司，批号：42190701；093170601；093171101规格：50 mg）。

方法与结果

色谱条件色谱柱：赛默飞Hypersil Gold C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：0.1%三乙胺（用醋酸调节pH值至3.5）-甲醇（90:10），流速为1.0 mL·min-1，检测波长263 nm，柱温30℃，进样量20 μl，理论塔板数按烟酸计算不低于2000。

对照品溶液的制备精密称取烟酸对照品约10 mg，置50 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度；精取10 mL置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。

溶出度供试品溶液的制备取本品按照溶出度测定法（《中华人民共和国药典》2020年版二部，通则0931第一法），以水900 mL为溶出介质，转速100 r·min-1，依法操作，经20 min时取样滤过（0.45 μm微孔滤膜），精取续滤液10 mL置25 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，作为溶出度供试品溶液。

阴性对照溶液的制备按烟酸片处方比例配成不含烟酸的片剂，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

干扰试验按1色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液20 μl注入色谱仪。结果表明，样品与对照品色谱图保留时间相同，阴性对照溶液在烟酸对照品溶液保留时间处均无干扰。

方法学考察

线性关系考察 精密称取烟酸对照品适量，加水溶解配成相应的质量浓度：2.20,5.18,10.12,14.98,20.06,25.03,3 0.00,39.93 mg·L-1，按1色谱条件，分别注入液相色谱仪，记录色谱图, 峰面积分别为：0.9549，2.3734，4.7284，7.0481，9.4693，11.8369，14.2047，18.9383。以质量浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标进行线性回归，回归方程：A=0.4767C-0.0946，r=1，结果表明，烟酸在2.20～39.93 mg·L-1范围内质量浓度与峰面积的线性关系良好。

精密度试验 取上述对照品溶液，按2.1色谱条件，精密连续进样6次，测得峰面积为11.0400、11.0331、11.0356、11.0438、11.0445、11.0550，平均峰面积为11.0420，RSD=0.07%（n=6），结果表明该方法精密度良好。

稳定性试验 按对照品溶液配制方法制备对照品溶液，按2.1色谱条件，分别在0，1，2，4，8，12 h进样，测得平均峰面积9.4533，RSD=0.57%（n=6），结果表明供试品溶液在12h内稳定。

重现性试验 取样品（批号：42190701），加水900 mL，超声20 min，滤过（0.45 μm微孔滤膜），取6份续滤液，分别加水稀释制成每1 mL中约含20 μg的溶液，按2.1色谱条件进样测定，测得溶出度为99.1、99.5、99.7、99.2、99.4、99.6，平均溶出度99.4%，RSD为0.23%（n=6）。结果表明该方法样品重现性良好。

加样回收率试验 精密称取已知含量的烟酸片（约相当于烟酸50 mg），置1000 mL容量瓶中，加水超声20 min，冷却，加水稀释至刻度。精取5 mL，置25 mL容量瓶中，共取9份分三组，每组再分别精密加入浓度为0.0539 mg·mL-1的对照品溶液4，5，6 mL，制成低、中、高三组浓度的供试品溶液,加水稀释至刻度。按2.1色谱条件测定，计算回收率，平均回收率为99.51%，RSD=0.79%。结果见表1。

?

样品溶出度测定取3批样品（批号：42190701；093170601；093171101），按上述溶出度供试品溶液的制备方法制备样品溶出液。用紫外分光光度法测定3批样品的溶出度；同时用HPLC法，按2.1色谱条件测定3批样品的溶出度。结果表明紫外分光光度法与HPLC法一致。

讨 论

检测波长的选择高效液相DAD光谱扫描烟酸对照品溶液最大吸收波长为263 nm；采用UV2600在200～400 nm扫描烟酸对照品溶液，最大吸收波长262 nm。经考察高效液相选择波长263 nm的色谱图面积大于选择波长262 nm的色谱图面积，故高效液相检测波长选择263 nm。

流动相的选择参阅相关资料[7-9],对多套流动相系统进行了考察，采用本文流动相系统，峰型好，重现性高，保留时间适度，系统稳定无干扰。

耐用性考察本文对流动相系统的耐用性进行了考察，对流动相中甲醇的比例在7%-13%范围进行了考察；pH值在3.0-4.0范围进行了考察；流速在0.8、1.0、1.2 mL·min-1范围进行了考察；柱温在25℃、30℃、35℃范围进行了考察；色谱柱使用了超高效色谱柱、Waters高效色谱仪配套专用柱及相应的高效液相色谱仪上进行了考察，差异均不大，峰型均保持良好，本文流动相系统耐用性较好。

拓展测定比较按处方比例自制三批样品，采用高效液相法和紫外分光光度法对更多批次烟酸片溶出度进行拓展测定比较，并采用统计学分析方法对测定结果差异进行了分析评价，结果，高效液相法与紫外分光光度法测定结果基本一致。