细胞DNA倍体分析系统结合HR-HPV在宫颈癌筛查中的应用

王建 黄种心

宫颈癌已成为发展中国家，仅次于乳腺癌的女性常见恶性肿瘤之一[1]，其发生率为10.4%～18.2%，死亡率为4.1%～12%[2]。近几年，随着工作压力的增加，环境污染日益加重等综合性因素，宫颈癌及癌前病变的患者与日俱增，且日趋年轻化[3]。人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）是常见生殖道感染病毒，16和18型则属于高危型。高危型HPV持续性感染与多重感染是促使宫颈癌发生的最主要病因。随着社会性观念的转变，性生活过早、性伴侣多的现象普遍，年轻女性感染HPV概率高达80%左右[4]。本研究通过细胞DNA倍体分析系统结合HR-HPV检测，讨论两者结合的筛查方案在宫颈癌及癌前病变筛查及诊断的临床意义与应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年1—12月医院1 000例宫颈细胞学标本，年龄20～60岁，均有性生活史，所有患者均做HR-HPV检测和DNA倍体分析系统检测，将DNA倍体分析系统的结果结合HR-HPV检测进行对比分析。

1.2 方法

1.2.1 宫颈标本采集 检查前3～5 d不做阴道冲洗与用药，经妇科医师采样、送检。采用常规液基细胞学制片方法：制成细胞涂片，行Feulgen染色，用全自动细胞DNA倍体分析系统做DNA TBS细胞定量测定[5]。

1.2.2 细胞DNA倍体分析系统 染色片用MoticEasyScan数字切片扫描与应用系统和MotiCytometer全自动细胞DNA倍体分析系统扫描处理。该系统由全自动数码显微镜对玻片中细胞核（约12 000个）进行扫描测定，以标本中正常细胞作为内参照，并根据132个参数特征值对被测细胞核进行自动分类和计数。细胞DNA倍体分析结果如下：（1）阴性：以正常二倍体细胞为主，未见非整倍体细胞或增生细胞占检测细胞总数＜5%。（2）可疑：DNA倍体异常细胞1～2个或可见少量增生（占检测细胞总数的5%～10%）。（3）阳性：出现DNA倍体异常细胞≥3个或可见细胞异常增生（占检测细胞总数＞10%）或非整倍体细胞峰者即异倍体峰[6]。对于部分系统图像难以确定的细胞核，需人工复核辨别，确保准确性。

1.2.3 采用罗氏Cobas 4 800高危型HPV分型 提取样本DNA，在Cobas 4 800分析仪中，进行PCR扩增和荧光检测。在阴、阳性对照有效的前提下，可检测14种分型，分为16、18及12种其他型别（31、33、35等）3类，其中1类或以上阳性结果即为HR-HPV阳性，不报告病毒载量[7]。

1.3 统计学分析

采用SPSS 20.0统计软件对数据进行统计学分析，计数资料如各个组别阳性率结果表示为（n，%），比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈组织病理结果、HR-HPV感染情况及DNA倍体分析结果

宫颈组织病理结果炎症及轻度糜烂476例，CIN I 225例，CIN II 152例，CIN III 92例，SCC 55例。其中HR-HPV阳性547例，阴性453例。DNA定量分析结果：阴性668例、可疑193例、阳性139例。

2.2 宫颈组织病理结果与HR-HPV感染情况

组织学诊断分别：炎症及轻度糜烂、CIN Ⅰ、CINⅡ、CIN Ⅲ、SCC各组中，HR-HPV阳性数131例、152例、121例、80例、50例，阳性率27.5%、67.6%、79.6%、87.0%、90.9%，各组间阳性率的差异具有统计学意义（P＜0.01，χ2=2 597）。HR-HPV阳性率随着组织恶性度增加而增加。

2.3 不同级别的细胞DNA倍体分析结果与阳性率感染的关系

细胞DNA倍体分析结果：阴性668例，可疑193例，阳性139例，相对应HR-HPV阳性数为247例、146例、124例，HR-HPV阳性率37.0%、75.6%、89.2%。各组间阳性率的差异具有统计学意义，DNA倍体分析结果阳性的HR-HPV阳性率高于结果阴性的HRHPV阳性率（P＜0.01，χ2=180.7）。

2.4 宫颈组织病理与细胞DNA倍体分析结果的关系

细胞DNA倍体分析结果：阴性668例、可疑193例、阳性139例。宫颈组织病理正常或糜烂、CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ、SCC对应阳性数及阳性率为8/1.68%、12/5.33%、19/12.50%、58/63.04%、42/76.36%。各组间阳性率的差异具有统计学意义，恶性度高的阳性率高于恶性度低的阳性率（P＜0.05，χ2=3 198）。

2.5 细胞DNA倍体分析结果、HR-HPV检测结果与组织病理结果的相关性

组织病理结果异常（恶性度由低到高）225例、152例、92例、55例，单独进行二者检测，其阳性率5.3%～90.9%不等。如果二者结合，阳性率70.7%～100%（二者联合检测的阳性评价标准：两种检测方法的结果，其中一种方法结果为阳性则为二者结合阳性例数）。如表1。

表1 DNA倍体分析结果、HPV检测结果与宫颈活检病理结果的相关性

3 讨论

宫颈细胞学检查是宫颈癌及癌前病变筛查常规且有效的方法，特别是液基薄层制片技术和宫颈细胞学TBS报告系统的引进，很大程度的提升了细胞学的诊断水平与检出率。在筛查中有特殊且重要的作用，无创，便捷，准确率高，但筛检敏感度偏低，受人为主观因素、技术人员操作等综合因素影响，假阴性偏高、存在一定假阳性率。目前，全自动细胞DNA倍体分析技术是通过高精密的显微镜自动扫描宫颈液基薄层玻片，利用正常人体体细胞DNA倍体含量恒定（二倍体），在细胞发生癌变或癌前病变的过程中，DNA含量不规律增多，DNA倍体发生一定的改变。通过分析细胞核内DNA含量与结构变化，判断细胞是否产生病变，DNA倍体特殊变化是判断细胞良、恶性的重要参考指标[8-9]，其敏感度与特异度都很高。大量研究实验与数据证实，HPV感染与宫颈癌及癌前病变有着千丝万缕的关系，随着组织病理癌变级别越高，感染HPV或多重感染机率越高，阳性率27.5%～90.9%。细胞DNA倍体分析技术的运用，取材便捷，对患者身体损伤较小，患者的配合度高，由计算机自动识别、筛检出可疑的异型细胞，极大的解放人工的成本与工作量，且对比常规细胞学的准确率及吻合度很高，细胞DNA倍体分析系统检出宫颈病理组织阳性率为5.3%～76.4%不等。如果采用细胞学DNA倍体分析系统与HR-HPV检测相结合，则同等条件下，较大的提高了阳性检出率70.7%～100%与准确率。二者检测结合准确率与阳性率明显优于单种方法学检查。宫颈癌及癌前病变的初筛检查，一次取样两种检测，极大提高筛查率，降低假阴性和假阳性机率，减少漏诊。该技术在基层一线工作中就早癌筛查得到一定的肯定与常规运用，对基层的防癌抗癌工作落实有很大促进与帮助[10-11]。

综上所述，宫颈癌及癌前病变的预防措施要做到早诊断、早发现、早治疗，可以极大的降低宫颈癌的发生率与死亡率[12-14]。细胞DNA倍体分析系统与HR-HPV检测结合，明显优于单独检测，有效弥补双方方法学局限性与不足，很大程度提高宫颈癌敏感性与特异性，做到早发现、早诊断，可以大力推广到基层防癌抗癌普查工作中。