猕猴桃溃疡病药用植物筛选及其复配增效研究

李晓莲， 虞 江，李 渺， 李亚楠，宋新丽，杨林凯，谭福宗， 雷钱杨， 万林松， 魏 娴， 卢永仲， 柏 松， 吕梦岚

(1.贵州理工学院化学工程学院，贵州 贵阳 550003；2.贵阳虞氏蜂业有限公司，贵州 贵阳 550200)

0 引言

植物细菌性病害常年造成我国农业经济损失，与植物真菌类病害相比，细菌的门类较小，但它带来的危害却不可小觑，当前，全球性细菌性病害有500多种，我国的细菌性病害就有200多种，主要的类型有青枯病，细菌病，溃疡病、软腐病等，几乎主要的栽培作物都会被一种或多种细菌感染，猕猴桃溃疡病是作用在猕猴桃作物上的典型的细菌性病害，该细菌病害是由丁香假单细胞杆菌猕猴桃致病变种引起的一种毁灭性猕猴桃病害，一旦感染猕猴桃溃疡病菌的植株，发病率高，症状严重，传播快速、且难以发现，当植物感染猕猴桃溃疡病菌后，会在植物有菌脓流出时才被发现，此时，植株已被严重感染，病菌已经扩展蔓延，严重时甚至毁园绝收，给猕猴桃种植户造成巨大损失[1-7]，因此，寻找防治猕猴桃溃疡病的方法对猕猴桃产业的健康发展具有重要意义。化学农药的使用，有效地抑制了猕猴桃溃疡病的发展，一定的提高了农业经济，但随着化学农药的大量使用，不仅对环境造成污染，也使细菌的抗药性增加，随着人们环保意识的增强，寻找对环境友好的新型防治剂，已经成为人们的共同愿望，植物是生物活性化合物的重要来源之一，在其次生代谢产物中，大多数次生代谢产物都含有能有效抑菌的成分，将天然提取物作为新型的防治剂，符合当前绿色农药的发展方向，受到植物保护研究人员的广泛关注[8-11]。

1 材料与方法

1.1 材料

表1 供试植物名录

试供植物样品：所有试供植物均购买自贵阳中药材批发市场。

试供培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)。

病原菌种：猕猴桃溃疡病菌，由贵州理工学院化学与工程学院实验室提供。

1.2 方法

1.2.1 试供植物的预处理

首先将得到的植物材料放置于60℃的恒温箱内，干燥植物材料中的水分，等到植物材料完全被干燥后，再用研钵将植物材料粉碎成粉末状物体，用40目筛筛刚刚粉碎好的粉末固体，然后将过完筛的粉末放入密封袋内备用，取样品粉末20.0 g，分三次加入100、70、30 mL的无水甲醇分三次用超声波提取，超声频率为1200 Hz，工作间歇0.2 s，温度40 ℃，每次的提取时间为30 min，每次提取后，抽滤收集滤液，滤渣继续重复上述提取步骤一遍，然后丢掉，最后合并全部的提取液，用旋转蒸发仪将溶剂浓缩，用冷冻干燥器低温干燥得到的固体样品，然后将样品保存在4 ℃下备用。

1.2.2 待测物的抑菌活性测试方法

按照植物提取物：叶枯唑为1∶1的比例配制待测药液，采用试管倍比稀释法测定5种混合液对猕猴桃溃疡病菌的MBC(最小杀菌浓度)[12-13]。准备9支试管，编号1-9，用移液枪在9支试管中分别加入1 mL的灭菌营养肉汤，然后用移液枪在编号1的试管中加入1 mL的待测药液，重复打压几次移液枪使液体均匀混合，混匀后吸走1 mL的混合液打到编号2的试管中，重复打压几次移液枪使液体均匀混合，混匀后吸走1 mL的混合液打到编号3的试管中，重复以上步骤，直到第编号7的试管中的液体均匀混合后，吸走1 mL的混合液弃去，在7支试管中用移液枪分别加入1 mL106cfu/mL的猕猴桃溃疡病菌菌液，在编号8的试管中用移液枪加入1 mL的灭菌营养肉汤和1 mL相同浓度的猕猴桃溃疡病菌菌液作为阳性对照，在编号9的试管中用移液枪加入2 mL的灭菌营养肉汤作为阴性对照。然后将9个试管分别接种到培养基上，编号1a-9a，用肉眼观察1a-9a的培养皿上是否有细菌生长，以没有细菌生长的平板对应的编号试管内药物浓度为药液对猕猴桃溃疡病菌的最低杀菌浓度(MBC)。

2 结果分析

5种混合药液对猕猴桃溃疡病菌的抑制效果如表2所示。

表2 5种混合药液对猕猴桃溃疡病菌的抑制效果

注：“-”和“+”表示培养皿中是否长有菌落；“-”表示无菌落生成，“+”表示有少量菌落生成；“++”表示菌落数较多。

研究结果表明，五种植物提取物与叶枯唑复配的混合药液对猕猴桃溃疡病菌具有一定的抑制作用，其中砂蓝刺头提取物与叶枯唑复配对猕猴桃溃疡病菌的MBC为31.25 mg/mL，鹅绒藤提取物与叶枯唑复配对猕猴桃溃疡病菌的MBC为62.50 mg/mL，沙打旺提取物与叶枯唑复配对猕猴桃溃疡病菌的MBC为31.25 mg/mL，日本菟丝子提取物与叶枯唑复配对猕猴桃溃疡病菌的MBC为62.50 mg/mL，苦马豆提取物与叶枯唑复配对猕猴桃溃疡病菌的MBC为31.25 mg/mL，其中，砂蓝刺头提取物、沙打旺提取物、苦马豆提取物与叶枯唑复配后的抑菌活性优于对照药剂叶枯唑(MBC值为62.50 mg/mL)，鹅绒藤提取物、日本菟丝子提取物与叶枯唑复配后，活性与之相当。

3 结语

由活性测试结果表明，五种天然植物提取物与叶枯唑的复配后对猕猴桃溃疡病菌具有一定的抑制作用，大多数植物提取物与叶枯唑进行1∶1复配后，其对于猕猴桃溃疡病菌的抑制活性都优于叶枯唑(MBC值为62.50 mg/mL)的活性，例如砂蓝刺头提取物、沙打旺提取物、苦马豆提取物与叶枯唑复配后的抑菌活性(MBC值分为：31.25 mg/mL、31.25 mg/mL、31.25 mg/mL)，研究表明：具有抗猕猴桃溃疡病菌的药物，与另一活性的物质复配后的药物的抗猕猴桃溃疡病菌的活性增强，本研究为开发植物源农药和研究复配型农药的增效提供了一定的理论基础。