驴人工授精技术在规模化驴场的应用效果研究

阿依努尔·亚森，帕热哈提江·吾普尔，张国庭，范洪先，董 红，王岳强，高雪峰，郑新宝

（新疆畜牧科学院，乌鲁木齐 830011）

驴全身都是宝，驴皮可熬制阿胶，驴肉是绿色健康食品，驴奶具有清肺功能，对多种疾病有辅助治疗作用，驴肝、驴鞭、驴肺等也具有较高的营养价值[1]。驴产业在我国发展迅速，已由役用向药、肉、乳、保健美容及生物制品等多产业方向发展，呈现良好势头[2]。

驴人工授精技术推广缓慢，绝大多数地区仍以牵引交配或自然交配为主。据报道，国外驴精液的低温保存时间最长可达48 h，输精后的情期受胎率为50%～60%；冷冻精液解冻后的直线前进运动率为30%～40%，受胎率为20%～40%[3]。从已发表的研究成果来看，驴精子和母驴对抗冻剂毒性和稀释液中某些成分的敏感性可能较马高[4]。另外，有关母驴发情和排卵规律的研究较少，这也是造成输精后情期受胎率低的原因之一[5]。近几年，随着国内驴产业的快速发展，驴精液保存和人工授精技术也取得了显著进展。驴精液在4 ℃保存4 d后精子直线前进运动率维持在60%以上，情期受胎率在50%左右；冷冻精液解冻后的精子直线前进运动率为50%～60%，情期受胎率为30%～40%，完全可以在驴产业中推广应用[2]。

2019—2020 年，在南疆地区500 头以上的规模化驴场开展了驴人工授精技术应用推广，将诱导发情、B超卵泡监测、定时排卵、细管精液人工授精技术进行了集成应用，充分利用了优质母驴的遗传潜力和优秀种公驴资源，缩短了世代间隔，实现了提高规模化驴场经济效益的目的。

1 材料与方法

1.1 试验动物

在和田地区、喀什地区分别选择2个规模化驴场，存栏量分别为6 000头、700头。

选择3岁以上的健康成年繁殖母驴，品种以德州驴、关中驴、新疆驴及其杂交驴为主。母驴日粮配方：玉米1.0～1.5 kg，麸皮0.5～1.0 kg，干苜蓿草1.0 kg，小麦秸3.0～4.0 kg。自由饮水。

根据体型外貌特征，挑选德州驴种公驴8 头、和田青驴3 头、新疆驴2 头作为采精种公驴，年龄均为5～6 岁。配种期间种公驴日粮配方：玉米2.4 kg，燕麦2.4 kg，麸皮1.0 kg，预混料0.15 kg，干苜蓿草2.0 kg，小麦秸8.0 kg。采精期种公驴每天补饲豆粕1.0 kg，胡萝卜2.0 kg，鸡蛋2个（早、晚各1个）。自由饮水。

采精频率为每头种公驴每星期采精2～3 次，间隔1～2 d采精一次。

1.2 药品和试剂

用于诱导发情和定时排卵的药品有注射用前列腺素（PG）、人绒毛膜促性腺激素（hCG）等，均购自宁波三生药业有限公司；一次性输精外套、输精器，均购自广西蒋氏公司；驴鲜精保存稀释液，自配，配方见表1。

表1 驴鲜精保存稀释液推荐配方

1.3 试验步骤

1.3.1 种公驴采精 将种公驴牵入保定栏，刷拭体表，用温水清洗阴茎、包皮。选择健壮、性情温顺、营养较好、体格大小与公驴相近的发情母驴做台驴。保定母驴四肢，清洗后躯和外阴部。技术人员提前将集精杯、离心管、滤纸（布）、烧杯放置于37 ℃恒温箱内预热。安装好假阴道后，灌入40～43 ℃热水，视采精公驴阴茎直径调整内胎压力，在假阴道口端涂抹适量润滑剂。

将种公驴牵至采精棚，用发情台驴诱情，当公驴勃起爬跨时，技术人员手持假阴道把柄处，站立于台驴侧后方，将假阴道平放于发情母驴尻侧，并迅速将阴茎导入假阴道。公驴射精后，顺势使阴茎从假阴道中退出，将假阴道集精杯端缓慢下倾，精液采集完毕送入验精室。

1.3.2 精液处理 挑除精液中的副性腺胶状物，读取精液体积，取样并迅速置于37 ℃载玻片上，用显微镜对精子活力、密度等指标进行检测。检查后的精液过滤后，按1∶1 比例添加经37 ℃预热过的鲜精稀释液，混匀后倒入离心管，置于离心机中，2 500g离心5 min。去除离心后的上清液，将剩余的浓缩精液再次稀释，稀释后浓度为有效精子数为（1～2）×109个/mL。将精液混匀，吸入0.5 mm细管，备用。

1.3.3 诱导发情处理 直肠检查或B 超检查驴卵巢，如果发现有黄体存在则肌肉注射PG 4～6 mL。准确观察发情，每日记录并检查卵泡。

1.3.4 定时排卵 每天利用B 超监测发情驴卵泡，当B 超监测到卵泡直径≥30 mm 时，注射hCG 2a000 单位。在注射hCG 后的24 h 后进行第一次人工授精，在36～40 h进行第二次人工授精。

1.3.5 人工授精 母驴发情后，技术人员通过直肠检查或B 超检查确定卵巢上发情卵泡发育情况，如果发情母驴符合输精要求，用一次性输精外套，将0.5 mm 细管精液输入发情母驴卵泡侧子宫角；间隔12 h 再次输精，直至母驴排卵。18 d 后，利用B 超开展早期妊娠检查，检查出的空胎驴继续进行人工授精，怀孕驴在50～60 d 利用直肠检查或B超检查再次确定妊娠情况。

1.4 数据的统计分析

将种公驴采精、诱导发情、定时排卵、人工授精、妊娠检查等相关数据进行汇总，采用SPSS 软件中的卡方检验法进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 不同种公驴精液指标测定结果

见表2。

表2 不同品种种公驴精液指标测定结果

由表2 可以看出，采精后原精活力均达到了0.7 以上，密度均在2 亿个/mL 以上，德州驴的采精量极显著高于和田青驴和新疆驴（P＜0.01）。

2.2 诱导发情、定时排卵结果

注射PG 后,73.91%（85/115）的驴在72 h 内发情，16.52%（19/115）的驴在72 h后发情。

当卵泡直径达到≥30 mm时注射hCG 2 000 IU，77.6%的驴（1 032/1 330）在24～48 h 内排卵；68.0%的驴（904/1 330）通过采用hCG 诱导可以将排卵时间控制在4 h（注射hCG 后36～40 h）内；95%的驴（1 264/1 330）通过hCG 诱导可以将排卵时间控制在8 h（注射hCG后28～44 h）内。

2.3 输精技术对情期受胎率的影响

见表3。

表3 技术人员对细管人工授精受胎率的影响

由表3可以看出，不同熟练程度技术人员人工授精技术水平差异较大，情期受胎率、平均鲜精量等均有较大差异。

3 讨论

本试验在2 个500 头以上规模化驴场开展了驴细管精液人工授精技术应用与推广，细管精液人工授精母驴分别为3 260头、476头，情期受胎率平均达到38.12%、47.67%。

随着冷冻精液和人工授精技术的广泛推广，每头种公驴可承担上千头母驴的配种，因此种公驴是影响畜群遗传品质的最主要因素之一。而种公驴的精液品质与繁殖力是影响其发挥遗传潜能的重要因素[6]。在不同品种种公驴的精液品质中，德州驴的精子活力和采精量等指标均好于和田青驴、新疆驴。张瑞涛等[7]报道，德州驴单次射精量与体高呈正相关关系。本试验结果与其结论基本一致，即体格高大健壮的种公驴采精量较大。

国外有研究表明，单独使用PGF2α 类似物或类固醇类激素与GnRH类似物联合处理，都能实现同期发情，但同期发情率会有差异[8]。而曾申明[2]研究发现，通过PGF2α和GnRH类似物联合处理，在5 d 内约80%左右母驴的优势卵泡直径超过30amm，可以配种。本试验中，用PG 处理后72 h内母驴发情率达到73.91%。该方法相对简单，便于基层技术人员掌握。

卵泡直径是判断发情母驴卵泡是否达到能够对促排卵激素做出应答的依据。近几年，中国农业大学在驴定时排卵技术方面取得较大进展，母驴优势卵泡直径达到30 mm 以上时肌肉注射GnRH 类似物1 mL，85.3%的母驴（295/346）可在注射药物后的36～44 h 内排卵，95.4% (330/346)可在48 h 内排卵[2]。本试验利用B 超监测发情母驴卵泡，卵泡直径达到≥30 mm时注射hCG 2 000 IU也取得了较好的促排卵效果。由于B超监测是促排卵技术的重要技术手段，卵泡直径的判断标准就成为促排卵效果好坏的关键。

输精技术人员水平对驴细管精液人工授精受胎率的影响较为明显。驴细管精液人工授精对输精时间要求严格，准确的发情观察或试情显得尤为重要。而在规模化驴场无法借助发情监测系统的情况下，技术人员在发情观察或试情过程中的责任心将决定是否可以准确判断母驴发情开始时间。由于母驴排卵延迟较为常见，在判断排卵时间上，不同的输精技术人员对B 超监测的卵泡直径大小有不同的判别水平，因此经常会出现多次输精但仍未排卵或输精时间超过排卵时间前后6 h 以上，从而对受胎率有较大影响。此外，营养和饲养管理水平对驴繁殖性能影响也较大，特别是精料水平对驴的排卵过程有较大影响。

4 结论

细管精液人工授精技术对迅速扩大良种驴群体、缩短世代间隔、加速品种改良步伐作用巨大。借助B 超卵泡监测技术、定时排卵输精技术可以有效提高驴细管精液人工授精技术水平。