固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定贝类中6种除草剂

◎ 王 尧，刘倩倩，刘修辰，王鹏功

（1.中国检验认证集团山东检测有限公司，山东 青岛 266000；2.中国检验认证集团山东有限公司，山东 青岛 266000）

农药除草剂的大规模使用在提高了农作物产量的同时，也对其他生物产生了一定量的危害。农田中喷洒的农药，仅有10%～30%作用在作物上，其余进入空气中，或者随水循环进入江河湖海，很多国内外研究表明海水中存在除草剂[1-2]。贝类为过滤性生物，而除草剂具有亲脂性，所以贝类对除草剂有富集作用，除草剂在贝类体内的积累对贝类的食用安全性产生一定的风险。因此，贝类中不同种类除草剂分析方法的研究具有现实意义。

本研究将贝类样品用乙酸乙酯-二氯甲烷提取后，经弗罗里硅土固相萃取柱净化，C18色谱柱分离，采用电喷雾正离子源（ESI+）电离，经多反应监测模式（MRM）进行定性和定量分析。对6中除草剂的分析方法、检出限、线性、回收率进行研究，以期为贝类中除草剂的检测和食用风险评价提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Utra 3000型高效色谱仪，TSQ Quantiva型三重四极杆质谱仪，赛默飞世尔科技公司生产；弗罗里硅土固相萃取柱（1 g/6 mL），德国Simon公司生产；高速离心机，赛默飞世尔科技公司生产；旋蒸蒸发仪，德国Heidolph公司生产；氮吹仪，南京海能仪器有限公司生产；超纯水制备仪，赛默飞世尔科技公司生产。

混合标准储备液：氟哒嗪草酯（99.6%）、嘧菌腙（1 000 mg·L-1）、磺草唑胺（1 000 mg·L-1）、丙嗪嘧磺隆（100 mg·L-1）、双唑草腈（1 000 mg·L-1）及吡唑特（98.8%）用乙腈配制成浓度为10 mg·L-1的混合标准储备溶液，4 ℃避光保存，使用时用乙腈稀释至所需要的质量浓度。

乙酸乙酯、二氯甲烷、正己烷、乙腈均为色谱纯，美国Merck公司生产；实验用水为超纯水

1.2 仪器工作条件

1.2.1 色谱条件

C18反相色谱柱：（10 mm×2 mm，3 μm），柱温：40 ℃；进样量：2 μL；流速：0.2 mL·min-1。流动相：A（水+0.1%的甲酸+2 mmol·L-1的乙酸铵），B（99%的乙腈水溶液+0.1%的甲酸+2 mmol·L-1的乙酸铵），从A∶B（9∶1）的混合液到A∶B（1∶9）的混合液，进行10 min浓度均配之后，保持10 min。

1.2.2 质谱条件

电喷雾正离子源（ESI+）；多反应监测（MRM）扫描；喷雾电压3 500 V；毛细管温度350 ℃，鞘气240 kPa，碰撞气0.2 Pa，6种除草剂质谱参数见表1。

表1 质谱参数表

1.3 样品处理

1.3.1 样品制备

取可食用部分，充分搅碎，混匀，-18 ℃保存。

1.3.2 提取

称取混匀的样品5.00 g，置于50 mL离心管中，加入25 mL乙酸乙酯-二氯甲烷（1∶1）溶液。涡旋1 min。超声提取20 min。以4 000 r·min-1的速度离心10 min。取上清液，减压浓缩至尽干。加入2 mL乙酸乙酯-正己烷（1∶1），待净化。

1.3.3 净化

将1.3.2待净化液转入用5 mL乙酸乙酯-正己烷（1∶1）溶液活化过的弗罗里硅土固相萃取柱，用15 mL乙酸乙酯-正己烷（1∶1）溶液分3次洗脱，洗脱液收集到浓缩瓶中，于40 ℃水浴下旋蒸浓缩至干，用1 mL乙腈复溶，供高效液相色谱-串联质谱分析。空白溶液参照上述处理步骤得到空白基质溶液。

2 结果与分析

2.1 色谱图

50 μg·L-1的混合标准溶液的总离子流图和提取离子流图见图1。

2.2 工作曲线及检出限

配置1 μg·L-1、10 μg·L-1、20 μg·L-1、50 μg·L-1、100 μg·L-1、200 μg·L-1和500 μg·L-1的混合标准溶液进行测定，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制6种除草剂的工作曲线。在1～500 μg·L-1的线性范围内，线性方程及相关性系数R2结果详见表2。各除草剂的检出限见表2。

2.3 回收率测定

取某市场采购的牡蛎样品，按照1.3方法进行测定。对牡蛎样品进行10 μg·L-1、20 μg·L-1、50 μg·L-1的3个水平添加。各水平添加回收率详见表3。六种除草剂的添加回收率为75.4%～115.0%，本方法具有一定可靠性。

图1 混合标准溶液的色谱图

表2 线性参数及检测限表

表3 回收率试验结果表

3 结论

本研究建立的固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定贝类样品中氟哒嗪草酯、嘧菌腙、磺草唑胺、丙嗪嘧磺隆、双唑草腈及吡唑特6种除草剂的方法，预处理所需要的有机溶剂用量少，质谱分析基质干扰少，方法检出限低，线性关系良好，对贝类中除草剂含量的测定有重要的意义。