野蚕豆根总环烯醚萜苷对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏功能的影响

李 莉 单 蕊 陈 燕 朱 瑛 杜 冰 李海宁 姚 政*

1. 云南中医药大学，云南 昆明 650500;2. 重庆市开州区中医院，重庆 405400;3. 安徽省宣城市中心医院，安徽 宣城 242000

野蚕豆根，又名化血丹、小红药、金猫头(广西)、灵芝草(云南)，原植物来源于玄参科(Scrophulariaceae) 胡麻草属(Centranthera) 植物大花胡麻草CentrantheragrandifloraBenth，主要分布于云南、贵州、广西等地，越南、缅甸、印度也有分布[1]。野蚕豆根主要含有环烯醚萜苷类、苯乙醇苷类、类胡萝卜素类、紫罗兰酮苷类、单萜苷类等化合物[2]，桃叶珊瑚苷是野蚕豆根中含量最高的环烯醚萜苷类成分[3]。

环烯醚萜苷广泛存在于自然界许多植物种属中，在车前科、玄参科、杜仲科、忍冬科等植物中均有发现，具有降糖、保肝、抗炎、抗凝血等作用，还可发挥DNA合成酶抑制剂的作用[1]。

野蚕豆根在其产地云南省红河州常被用于防治心脑血管疾病，收效甚好。其主要的化学成分为环烯醚萜苷，但有关野蚕豆根的药理作用研究却十分有限，关于其药理药效方面的研究甚少。因此，对野蚕豆根药物作用效果及其起效机制进行深入研究是很有必要的。课题组前期对野蚕豆根有效药物成分进行了提取，发现其总环烯醚萜苷具有抗炎和抗氧化活性[5-6]。本研究取野蚕豆根2年生根，提取其中的总环烯醚萜苷进行动物实验，观察其降脂及保肝作用。

1 材料、仪器与试剂

1.1 实验动物 雄性SD大鼠共21只，体重160～200 g，由长沙市天勤生物科技有限公司提供，许可证号：SCXK(湘)2014-0011。分组情况：正常组7只，模型组7只，总环烯醚萜苷组7只。饲养于云南中医药大学动物实验中心，自由饮食，实验动物房12 h光照12 h黑暗，温度控制为22～27 ℃，湿度控制为40%～60%。

1.2 实验药物及饲料 野蚕豆根采自云南省红河州屏边县国云种植有限公司(1号、2号种植基地)，经云南中医药大学李海宁老师鉴定为玄参科胡麻草属植物大花胡麻草CentrantheragrandifloraBenth.的根及根茎。

总环烯醚萜苷的制备：取2年生的野蚕豆根药材(粗粉)，用60%的乙醇超声得到浸膏，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到正丁醇部分浸膏(总环烯醚萜苷)。

普通饲料配方：玉米粉33%、小麦粉10%、麸皮18%、大米10%、豆粕16%、鱼粉3%、鸡肉粉2%、骨粉3%、脂肪5.8%。

高脂饲料配方：10%猪油+2%胆固醇+88%普通饲料。

饲料及垫料均购自江苏美迪生物医药有限公司。

1.3 实验仪器 电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器有限公司，DZKW-D-4)、YD1508B轮式切片机(浙江金华益迪医疗设备厂)、HI1220烘片机(德国LEICA公司)、HI1210摊片机(德国LEICA 公司)、Nikon ECLIPSE E200显微镜(日本Nikon公司)、全自动生化分析仪cobas c311(瑞士罗氏公司)。

2 实验方法

2.1 非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立 正常组给予普通饲料喂养，模型组、总环烯醚萜苷组给予高脂饲料喂养，饲养于云南中医药大学动物房，饲养时间共8周。于第8周末取材。

2.2 动物给药剂量方法 模型组、总环烯醚萜苷组于第4周开始灌胃给药，持续4周，剂量参考李仪奎主编的《中药药理实验方法学》，大鼠50 mg/kg·d。正常组灌胃给同等剂量生理盐水。

2.3 大鼠肝脏病理形态学观察 大鼠剖杀后，取肝脏样本在10%福尔马林溶液中浸泡24 h，使肝脏组织充分固定，切割至2mm×4mm×2 mm大小，流水冲洗2～3 h。脱水后，进行石蜡包埋，切片，HE染色，病理图片拍摄。

2.4 大鼠血清生化指标检测 提取血清，采用全自动生化仪测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)含量。

3 数据统计方法

4 实验结果

4.1 各组大鼠体重变化 正常组大鼠体重增长趋势较为平稳，模型组大鼠体重整体增长最快，总环烯醚萜苷组体重整体增长较模型组慢。

4.2 肝体指数 肝体指数(%)=(肝脏湿重/体重)×100%。模型组与正常组肝体指数相比较，差异有统计学意义(P<0.05)。总环烯醚萜苷组与模型组相比，差异有统计学意义(P<0.05)。

4.3 大鼠肝脏病理形态学观察 从HE染色结果可以看出：正常组肝细胞大小正常，肝索分布清晰，肝细胞细胞核大小正常，无细胞脂肪变性；模型组出现较多脂肪空泡，肝索、肝细胞排列开始紊乱，表明NAFLD大鼠模型复制成功。总环烯醚萜苷组存在小脂肪空泡，与模型组相比空泡变小变少。

4.4 各组大鼠血清生化指标检测 生化分析仪检测各组大鼠8周末血清生化指标：模型组与正常组比较，血清LDL-C、ALT升高，HDL-C降低，差异有显著性(P<0.05)；总环烯醚萜苷组与模型组比较，血清TG、LDL-C、ALT均降低，HDL-C升高，差异有显著性(P<0.05)。总环烯醚萜苷组ALT和TBIL接近正常组水平。

表1 各组大鼠血清生化指标检测结果

5 讨论

野蚕豆根在云南省红河州一带资源丰富，是当地苗族民间常用植物药，常用于心血管系统疾病的防治。野蚕豆根具有抗氧化、抗炎、保肝、抗菌、抗糖尿病、神经保护、抗肿瘤、保护心血管、促进伤口愈合等作用[7]。《中华本草》记载：味酸、微辛，性温；具有消肿止痛、散瘀止血的功效。主要治疗咳血、咯血、吐血、风湿痹痛、跌打骨折、内伤瘀血[8]。现代药理研究[9-10]表明：野蚕豆根用药安全，无明显毒性反应；对大鼠急性缺血模型所致心肌损伤有保护作用，此外，还有抗凝血及抗炎活性。

野蚕豆根主要化学活性物质为以桃叶珊瑚苷为主的环烯醚萜苷类化合物。桃叶珊瑚苷味甘、淡，性温，具有消肿止痛、散瘀止血的功效，是一类特殊的具有缩醛或半缩醛结构的单萜化合物[11]。有研究[12-16]显示，桃叶珊瑚苷可抗凝血、抗炎、抗氧化、抗凋亡，同时可调节内质网应激和自噬水平，具有抗肿瘤、保肝、降糖、保护神经系统等作用。桃叶珊瑚苷还具有抑制肝细胞中Ⅰ型胶原纤维、Ⅲ型胶原纤维和基质金属蛋白酶-2( MMP-2)的表达，减轻肝纤维化的作用[20]。本实验所用药物为2年生野蚕豆根中制备的总环烯醚萜苷，其中有较高含量的桃叶珊瑚苷。在成功制备了非酒精性脂肪肝大鼠的基础上进行给药观察，病理结果显示，总环烯醚萜苷可使脂肪肝大鼠肝细胞中的脂滴减少；血清生化结果显示，总环烯醚萜苷可以降低非酒精性脂肪肝大鼠血清TG、ALT、HDL-C、LDL-C、TBIL水平。可看出，总环烯醚萜苷可有效改善非酒精性脂肪肝大鼠肝功能，减轻肝细胞中的脂质沉积，降低血脂水平，起到一定的降脂、保肝作用。

本研究结果显示野蚕豆根在降脂、保肝方面具有较好的药用价值，可作为防治脂肪肝及心脑血管类疾病的候选新药。本研究可对野蚕豆根的药物开发利用提供一定指导，并为民族民间药物的临床应用提供实验依据。