醒鼻凝胶滴鼻剂干预儿童变应性鼻炎CD4+CD25+Foxp3+Treg的临床研究

邱彩霞，艾 斯，庄翔莉，颜水平，刘 文，郑 健*

（1.福建中医药大学附属人民医院，福建 福州350004；2.福建中医药大学，福建 福州350122）

变应性鼻炎（allerigic rhinitis，AR）主要以打喷嚏、鼻塞、流涕、鼻充血为主要临床表现，在我国患病率为4%～38%［1］。近年来，AR的发病率陡升，这可能与气候、环境污染有关［2］。AR属于中医学“鼻鼽”“鼽嚏”范畴，口服中药、传统鼻内喷药、针灸等中医药治疗在临床广泛应用，并获得较好的临床疗效［3］。AR最佳治疗方式是将药物直接用于鼻黏膜上，既可以最大限度减少全身作用，又可将药物集中在鼻部发挥最大作用，且儿童容易接受。醒鼻凝胶滴鼻剂已在我院用于鼻炎治疗十余年，疗效显著。已有研究证实，CD4+CD25+Foxp3+Treg数量减少、功能减弱或者呈低反应性可能是导致哮喘发病的重要原因之一［4］。哮喘与鼻炎为同一气道，同一疾病。由此，本研究通过检测AR患儿CD4+CD25+Foxp3+Treg水平来观察其与变应性鼻炎的关系，进一步揭示醒鼻凝胶滴鼻剂治疗AR的可能作用机制，为其临床推广应用提供依据。

1 临床资料

1.1 诊断标准 参照《儿童变应性鼻炎诊断和治疗指南（2010年，重庆）》［5］中AR的诊断标准。

1.2 纳入标准 ①符合以上诊断标准；②年龄5～12岁；③经家长或监护人同意纳入研究并签署知情同意书。

1.3 排除标准 ①合并有其他心血管、肝脏及造血系统等严重疾病或精神患儿；②已接受其他相关药物治疗。

1.4 一般资料 选取2018年10月—2020年10月于福建中医药大学附属人民医院儿科门诊就诊的变应性鼻炎患儿67例，采用随机数字表法分为对照组35例和观察组32例。另选取同一时间段于健康体检中心体检的正常儿童10例。3组性别、年龄和病程比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性，见表1。

表1 3组一般资料比较（±s）

表1 3组一般资料比较（±s）

组别健康组对照组观察组例数103532男5女520181514年龄／岁8.56±0.238.29±0.158.75±0.21病程／年—1.28±0.341.33±0.21

2 方法

2.1 治疗方法

2.1.1 对照组 予布地奈德喷雾剂（上海强生公司）喷雾治疗，64μg／喷，每日1喷，每日2次，2周为1个疗程，连续治疗2个疗程。

2.1.2 观察组 予醒鼻凝胶滴鼻剂（福建中医药大学附属人民医院院内制剂，闽药制字Z2011S0006）滴鼻，1滴／次，每日2次，2周为1个疗程，连续治疗2个疗程。

2.1.3 健康组 未予任何干预。

2.2 检测指标及方法

2.2.1 CD4+CD25+Foxp3+Treg检测 采集3组治疗前后肝素锂抗凝外周血2mL，提取血单核细胞（PBMC），用200μL PBS重悬并调节PBMC浓度为1×107个／mL，取100μL细胞悬液，加入20μL CD4-FITC和20μL CD25-APC单克隆抗体，避光反应20 min；PBS洗涤后加入2mL固定液，避光反应10 min；洗涤弃上清，加入2mL PBS，避光反应30 min。重复洗涤1次，加20μL Foxp3-PE，避光反应30 min，加入适量PBS后进行流式细胞仪检测。试剂盒购自美国BD Pharmingen公司，所有步骤严格按照说明书执行。

2.2.2 血清IgE检测 采集3组治疗前后分离胶促凝外周血2mL，室温静置30 min后，1800 r／min离心5 min，取上清液进行ELISA法检测。试剂盒均购自美国R&D公司，所有步骤严格按照说明书执行。

2.2.3 视觉模拟量表评定 视觉模拟量表是卡尺状的直观模拟器，卡尺有10格的横向刻度，从左端以0开始，到右端10结束。卡尺最左端0度表示无症状，很舒服；最右端以10表示，表示症状极为痛苦。

2.2.4 症状总分评分标准 参照《附：变应性鼻炎诊断标准及疗效评定标准（1997年修订，海口）》［6］中症状评分标准，根据患儿症状、体征进行评分。无症状为0分，轻度为1分，中度为2分，重度为3分。

2.2.5 疗效判定标准 参照《附：变应性鼻炎诊断标准及疗效评定标准（1997年修订，海口）》［6］拟定。①显效：症状总分减少≥50%；②有效：症状总分减少＞20%，＜50%；③无效：症状总分减少≤20%。

2.3 统计学方法 采用SPSS 21.0统计软件进行数据分析。符合正态分布的计量资料以（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析。

3 结果

3.1 对照组与观察组疗效比较 见表2。

表2 对照组与观察组疗效比较

3.2 对照组与观察组治疗前后症状总分、视觉模拟量表评分比较 见表3。

表3 对照组与观察组治疗前后症状总分、视觉模拟量表评分比较（±s） 分

表3 对照组与观察组治疗前后症状总分、视觉模拟量表评分比较（±s） 分

注：与治疗前比较，1）P＜0.05。

视觉模拟量表评分7.53±0.984.12±0.771）7.29±0.563.85±0.691）组别对照组例数35观察组32时间治疗前治疗后治疗前治疗后症状总分2.18±0.121.68±0.161）2.20±0.141.71±0.181）

3.3 3组治疗前后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率和总IgE水平比较 见表4。

表4 3组治疗前后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率和总IgE水平比较（±s）

表4 3组治疗前后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率和总IgE水平比较（±s）

注：与健康组比较，1）P＜0.05；与治疗前比较，2）P＜0.05。

总IgE／（ng／mL）17.88±1.26—356.24±5.231）115.78±2.382）389.12±6.881）127.34±3.562）组别例数健康组10对照组35观察组32时间治疗前治疗后治疗前治疗后治疗前治疗后CD4+CD25+Foxp3+Treg百分率／%14.32±0.74—5.12±0.681）10.33±0.862）5.44±0.681）12.11±0.452）

4 讨论

醒鼻凝胶滴鼻剂是福建名老中医的临床经验方，由徐长卿、蝉蜕、牛黄、冰片组成。君药徐长卿，祛风化湿、止痒止痛；臣药蝉蜕，疏风清热，辅助君药止痒；佐药牛黄，清热解毒、通窍化痰；使药冰片，通窍醒神，发挥引药上行之功。AR的发病机制复杂，涉及炎症、免疫、神经、遗传、环境等学说，其中大量研究集中在Thl／Th2失衡学说。有研究显示，调节性T细胞（regulatory T cells，Tregs细胞）也参与了AR的发病及Th1／Th2平衡机制［7］。Tregs细胞可下调Thl和Th2细胞的促炎反应，早期就抑制了Th2细胞的分化，从而降低过多的Th2细胞反应气道变应性炎症反应［8］。

传统的Treg以CD4+、CD25+进行标记，但Treg和效应T细胞有部分重叠，难以区分。而Foxp3+是Treg的特异性核转录因子，是Treg谱系发育、表型和功能的决定基因，高表达于Treg，可反映Treg的活性水平，被认为是Treg的特异性标志物［9］。本研究结果显示，与健康组比较，对照组和观察组治疗前鼻炎患儿CD4+CD25+Foxp3+Treg水平明显降低，IgE明显升高，这可能与Treg表达降低引起Th1型细胞因子分泌减少，Th2型细胞因子分泌增多，机体变态反应升高有关。经醒鼻凝胶滴鼻剂及布地奈德喷雾剂干预后，外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg水平升高，总IgE水平降低，提示该治疗可调节Th1／Th2平衡，抑制嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞及肥大细胞的致炎作用，从而直接抑制AR的发生，明显改善患儿临床症状。

本研究进一步证实了CD4+CD25+Foxp3+Treg参与AR的发病过程，且醒鼻凝胶滴鼻剂可能通过上调CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量及降低IgE水平，以调节Th1／Th2免疫平衡机制，从而减轻气道局部炎症，为其临床应用提供一定的实验依据。