甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸的抗炎作用

赵 磊，张会敏，徐美利，鲍 玺，艾 欣，陈艳麟，王成涛*，连运河*

（1 北京工商大学 食品营养与人类健康北京高精尖创新中心 北京市食品添加剂工程技术研究中心 北京100048 2 晨光生物科技集团股份有限公司 河北邯郸057250）

甜叶菊是原产于南美洲的一种菊科草本植物，自20世纪70年代引进以来，中国成为全球最大的甜叶菊种植产地之一[1]。甜叶菊富含甜菊苷、莱鲍迪甙A 等甜菊糖苷，目前作为一种经济作物，主要制成甜味剂，在食品行业中得到广泛应用[2]。甜叶菊除含有甜菊糖苷外，还含有丰富的酚酸、黄酮等多种具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、降血糖和降血脂等作用的活性物质[3-4]。在甜菊糖苷生产过程中会产生大量甜叶菊废渣，这些废渣主要处理方式是焚烧和堆肥，其中的酚酸、黄酮等生物活性成分没有得到高效、合理地利用，反而对环境产生污染[5]。

Zhao 等[6]通过研究甜叶菊废渣提取物发现，甜叶菊废渣提取物含有绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸A（3，5-二咖啡酰奎宁酸）、异绿原酸B（3，4-二咖啡酰奎宁酸）、异绿原酸C（4，5-二咖啡酰奎宁酸）、槲皮苷、槲皮素等生物活性成分，具有较强的自由基清除能力，并有明显的抗炎作用。其中，异绿原酸A 和异绿原酸C 是甜叶菊废渣提取物的主要成分。付晓等[7]使用HPLC 法分析甜叶菊绿原酸类成分，其中主要为异绿原酸A、异绿原酸C 以及相对低含量的绿原酸。异绿原酸是绿原酸的二咖啡酰基取代异构体，在植物中广泛存在，主要存在忍冬科忍冬属、菊科蒿属植物中，其中包括金银花、杜仲等[8]。绿原酸类化合物具有抗氧化、抑菌、抗病毒、抗炎等生物活性[9]。本课题组在近年的研究中证实甜叶菊废渣提取物具有较强的抗氧化、抗炎作用[10]，然而尚未确定其中发挥主要功能活性的物质。异绿原酸作为甜叶菊废渣提取物的主要成分，是否是其主要的抗炎活性物质有待进一步研究。异绿原酸A 与异绿原酸C 分子式相同，化学结构不同，两者在功能活性上可能存在差异。目前对于甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸A 和异绿原酸C 的抗炎作用还鲜见报道。随着研究方法和科学技术的不断进步，对甜叶菊的研究开发和综合利用将不断深入。

为研究甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸的抗炎作用，本文通过建立RAW264.7 细胞炎症模型，初步评价甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸的体外抗炎作用。通过建立角叉菜胶致小鼠足肿胀急性炎症模型，通过测定小鼠足趾的肿胀程度，以及小鼠血清和肝脏中NO、SOD、MDA 和PGE2 水平，验证甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸的体内抗炎效果，为开发甜叶菊废渣的经济价值提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 材料与试剂 甜叶菊废渣提取物（主要成分：绿原酸4.65%，隐绿原酸2.78%，咖啡酸9.72%，异绿原酸A 4.14%，异绿原酸B 3.28%，异绿原酸C 12.67%，槲皮苷1.88%，槲皮素0.71%）、甜叶菊异绿原酸A 和异绿原酸C（>90%），河北晨光生物科技集团股份有限公司；地塞米松，MYM生物技术有限公司；NO、SOD、MDA 试剂盒，南京建成生物工程有限公司；BCA 蛋白浓度试剂盒、角叉菜胶、脂多糖（LPS）、DMEM 高糖无酚红培养基，北京索莱宝科技有限公司；PGE2 试剂盒，北京方程生物科技有限公司；阿司匹林，沈阳奥吉那药业有限公司；RAW264.7 细胞（ATCC No.TIB-71），国家实验细胞资源共享平台；噻唑蓝（MTT），美国Sigma 试剂公司；其它试剂均为国产分析纯级。

1.1.2 仪器与设备SpectraMax13 连续波长多功能酶标仪，美国Molecular Devices 公司；601-06游标卡尺，哈尔滨量具刃具集团有限公司；TG178型微量离心机，德国HERMLE 公司；Axiovert 200型倒置显微镜，德国Zeiss 公司；TGL-10C 型高速台式离心机，上海智城分析仪器制造有限公司；HH-4 型数显恒温水浴锅，金坛市科兴仪器厂；Galaxy S 型CO2 培养箱，英国RS Biotech 公司。

1.1.3 实验动物SPF 级ICR 雄性小鼠（6～8 周龄），许可证号为SCXK（京）2012-0001，北京维通利华实验动物技术有限公司。试验期间，动物饲养在温度为（21 ±2）℃，相对湿度（40 ±5）%，昼夜明暗交替时间12 h/12 h 环境，动物自由采食和饮水。

1.2 试验方法

1.2.1 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对RAW264.7 细胞存活率和NO 生成量的影响接种细胞密度为5×104 个/mL 的细胞悬浮液于96孔平板中，将平板放入37℃，5% CO2饱和湿度培养箱中培养24 h，吸弃上清，加入混合有样品的DMEM 完全培养液，使样品的终质量浓度为0.1，0.2，0.5，l，2 mg/mL。阳性对照组每孔加入LPS（20 μg/mL）。试验孔被分为LPS 与异绿原酸A、异绿原酸C、甜叶菊废渣提取物共同作用组和异绿原酸A、异绿原酸C、甜叶菊废渣提取物单独添加组2种，于37℃、5%CO2饱和湿度培养箱内培养24 h后收集上清液，选用NO 试剂盒测定NO 生成量。选用MTT 试剂盒测定各组细胞存活率。

1.2.2 动物分组给药ICR 雄性小鼠（6～8 周龄）110 只，适应环境饲养1 周，正常喂食喂水，适应期后随机分为对照组、地塞米松组（10 mg/kg bw）、阿斯匹林组（10 mg/kg bw）、甜叶菊废渣提取物、异绿原酸A 和异绿原酸C 组，其中样品组分为低剂量（0.5 g/kg bw）、中剂量组（1.0 g/kg bw）、高剂量组（2.0 g/kg bw）。连续给药7 d，每日灌喂药品1 次，每3 d 称量小鼠体重，并根据小鼠体重变化情况调节给药剂量。

1.2.3 角叉菜胶致小鼠足趾肿胀的测定 按照1.2.2 节对小鼠分组给药，末次给药30 min 后，给每只小鼠左侧足趾皮下注射25 μL 1%角叉菜胶，右侧足趾不作处理。4 h 后分别用游标卡尺准确测量每只小鼠2 只足趾的厚度，以左、右后肢足趾厚度之差表示炎症肿胀度，计算各组肿胀度值及肿胀抑制率[11]。

1.2.4 小鼠血清中NO、SOD、MDA 和PGE2 的测定 完成足趾肿胀度测量后，摘取所有小鼠的眼球，取其血液于2 mL 离心管中。置37℃水浴中促其凝固，然后4℃，3 000 r/min 离心10 min，得到上清液即血清。依照试剂盒说明书测定小鼠血清中SOD、MDA、NO 和PGE2 含量，于24 h 内完成全部测定，保证数据的可靠性。

1.2.5 小鼠肝脏中NO、SOD、MDA 和PGE2 的测定 将处死的小鼠解剖，取肝脏用4℃预冷的生理盐水洗去血液，滤纸拭干后置于离心管内，放入液氮速冻，待全部解剖完成后转移至-80℃冰箱保藏，备用。取相同部位肝脏0.1 mg 于匀浆管中，加入0.9 mL 预冷的生理盐水。用组织捣碎机10 000 r/min 上、下研磨，每次10 s，间隔30 s，连续5 次，制成10%肝匀浆。将制备好的匀浆液在4℃，3 500 r/min 条件下离心15 min，吸取上清液，于-80℃保存备用。依照试剂盒说明书测定小鼠肝脏匀浆中蛋白、SOD、MDA、NO 和PGE2 含量，于24 h 内完成全部测定，保证数据的可靠性。

1.2.6 数据处理与分析 试验结果以平均值±标准偏差表示，采用SPSS 19.0 进行单因素方差分析（One-way ANOVA），多重比较采用Duncan 法，P＜0.05 为显著差异，P＜0.01 为极显著性差异。

2 试验结果及分析

2.1 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对RAW264.7 细胞存活率的影响

有研究表明若样品浓度超过细胞无毒性浓度范围，则会对细胞造成毒害作用[12]。通过测定不同质量浓度的样品对细胞存活率的影响，确定适合后续研究的样品质量浓度范围。由图1a 可以得出，异绿原酸A 质量浓度在0.1～2 mg/mL 范围对细胞存活率无显著性影响；异绿原酸C 质量浓度在0.1～1 mg/mL 范围对细胞存活率无显著影响，然而当样品质量浓度增到2 mg/mL 时，细胞存活率提高了27.80%；甜叶菊废渣提取物质量浓度在0.1～1 mg/mL 范围对细胞存活率无显著影响，当样品质量浓度达2 mg/mL 时，细胞存活率提高18.73%。这说明较高质量浓度的异绿原酸C 和甜叶菊废渣提取物可促进细胞的增殖。本试验样品无毒质量浓度范围可选择0.1～2 mg/mL。

如图1b所示，加入LPS 诱导的RAW264.7 炎症细胞与正常细胞相比，存活率下降19.46%。当异绿原酸C 质量浓度为1 mg/mL 时，对LPS 诱导的RAW264.7 细胞的存活率有促进作用，RAW264.7细胞存活率提高23.32%；当异绿原酸A 和异绿原酸C 质量浓度2 mg/mL 时，RAW264.7 细胞存活率分别提高25.92%和43.22%。而甜叶菊废渣提取物质量浓度在0.1～2 mg/mL 范围内对RAW264.7细胞的存活率均无显著性作用。综上可以得出，3种样品对RAW264.7 细胞存活率的促进效果为异绿原酸C＞异绿原酸A＞甜叶菊废渣提取物。

图1 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对正常RAW264.7 细胞（a）和LPS 诱导的炎症RAW264.7 细胞（b）存活率的影响Fig.1 Effects of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on the survival rate of normal RAW264.7 cells（a）and LPS-induced inflammation RAW264.7 cells（b）

2.2 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对炎症细胞NO 生成量的影响

检测细胞NO 生成量是抗炎活性研究中常用的手段之一[13]。细胞在正常情况下生成少量NO，在炎症状态下大量产生NO，并释放到细胞培养液中，通过检测细胞培养液中NO 含量可以反映细胞炎症状态及样品的抗炎效果[14-16]。由图2可知，RAW264.7 细胞加入LPS 诱导后NO 释放量显著增至18.87 μmol/L，约为正常RAW264.7 细胞NO生成量（5.73 μmol/L）的3.3 倍。当样品质量浓度为0.1 mg/mL 时，异绿原酸A、异绿原酸C 和甜叶菊废渣提取物对炎症细胞NO 生成量无显著影响；质量浓度在0.5～2.0 mg/mL 范围的异绿原酸A、异绿原酸C 和甜叶菊废渣提取物对RAW264.7 细胞NO 生成量有明显的抑制作用，且随样品质量浓度的增加抑制效果增强。当质量浓度达到2.0 mg/mL时，与LPS 组相比，异绿原酸A、异绿原酸C 和甜叶菊废渣提取物组中RAW264.7 细胞NO 的生成量分别减少43.60%，65.62%和57.59%。该结果表明，异绿原酸A、异绿原酸C 和甜叶菊废渣提取物均可抑制炎症环境下NO 的产生，进而减轻炎症，发挥抗炎作用，且在样品质量浓度为2.0 mg/mL 时甜叶菊废渣提取物与异绿原酸C 和异绿原酸A抗炎效果均无显著性差异。由此推测，异绿原酸C的抗炎效果高于异绿原酸A，可能与二者分子结构不同有关，同时甜叶菊废渣提取物的抗炎作用也可能与甜叶菊废渣提取物中其它黄酮类和酚酸类的物质有关。Zhao 等[6]研究显示甜叶菊废渣提取物中除含有异绿原酸外，还含有丰富的绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、槲皮苷和槲皮素。Gao 等[17]研究结果显示绿原酸对脂多糖诱导的乳上皮细胞炎症反应有一定的保护作用。宋亚玲等[18]研究金银花中酚酸类成分及其抗炎活性，发现绿原酸、隐绿原酸和咖啡酸对LPS 刺激的巨噬细胞炎症因子均有不同程度的抑制作用。Hou 等[19]研究表明槲皮素对MC903 诱导的特应性皮炎小鼠模型有很好的抗炎作用。袁雯雯等[20]研究结果显示不同浓度的咖啡酸对经LPS 刺激后的HUVECs 细胞的存活率有一定的促进作用。

图2 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对炎症细胞NO 生成量的影响Fig.2 Effects of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on NO production in inflammatory cells

2.3 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对角叉菜胶致小鼠足趾肿胀的影响

角叉菜胶作为诱导剂的致炎模型，常用于抗炎药物的药效评价等领域，其根据注射后小鼠足部的肿胀度差异来分析样品的抗炎效果[21]。由表1可知，阿司匹林与地塞米松阳性对照组均对小鼠足趾肿胀度有显著的抑制作用，其中地塞米松抑制效果最好，抑制率39.47%。在低剂量与中剂量组中，异绿原酸C 对小鼠足趾肿胀均有明显的抑制作用，异绿原酸A 与甜叶菊废渣提取物对其无显著作用；在高剂量时，异绿原酸A、异绿原酸C和甜叶菊废渣提取物均对小鼠足趾肿胀有明显的抑制作用，抑制率分别为32.71%，34.65%和21.80%，抗炎效果排序依次为异绿原酸C＞异绿原酸A≈甜叶菊废渣提取物。推测甜叶菊废渣提取物中的抗炎成分可能是异绿原酸A 和异绿原酸C。有研究表明，异绿原酸A 和异绿原酸C 可以抑制白细胞迁移和炎症过程超氧阴离子的产生，具有良好的抗炎活性[8]。异绿原酸C 的抗炎效果比异绿原酸A 的抗炎效果好，可能与二者的化学结构差异有关。

表1 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对小鼠足趾肿胀度的影响（±s，n=10）Table 1 Effect of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on paw edemain mice（±s，n=10）

表1 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对小鼠足趾肿胀度的影响（±s，n=10）Table 1 Effect of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on paw edemain mice（±s，n=10）

注：阿司匹林（10 mg/kg bw）、地塞米松（10 mg/kg bw）、样品低剂量组（0.5 g/kg bw）、中剂量组（1.0 g/kg bw）、高剂量组（2.0 g/kg bw）；a～b 表示同列中标有不同字母的数值存在显著性差异（P＜0.05）。

?抑制率/%模型组 0.38 ±0.08a -阿司匹林 0.29 ±0.06b 22.56地塞米松 0.23 ±0.06d 39.47异绿原酸A 低剂量 0.31 ±0.06a 18.42异绿原酸A 中剂量 0.32 ±0.04a 16.67异绿原酸A 高剂量 0.26 ±0.07b 32.71异绿原酸C 低剂量 0.28 ±0.05b 25.88异绿原酸C 中剂量 0.27 ±0.08c 29.70异绿原酸C 高剂量 0.25 ±0.09c 34.65甜叶菊废渣提取物低剂量 0.37 ±0.07a 3.51甜叶菊废渣提取物中剂量 0.33 ±0.09a 7.89甜叶菊废渣提取物高剂量 0.30 ±0.08b 21.80组别 足趾肿胀度/mm

2.4 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对小鼠血清中NO、SOD、MDA 和PEG2 的影响

利用小鼠足趾肿胀炎症模型，研究小鼠血清中NO、SOD、MDA 和PGE2 含量的变化，根据文献报道[22]，NO 通常用来评价样品的抗炎活性，PGE2是一种二十碳不饱和脂肪酸，一种重要的细胞因子，具有增高血流量，降血压，免疫活性，抗炎等作用。本研究测定NO 和PGE2 水平，评价样品的抗炎活性。SOD 和MDA 共同作为测定样品抗氧化能力的指标[23]。

由表2可知，阿司匹林与模型组相比，血清中NO 和MDA 水平分别降低10.05%和34.72%，SOD活力明显升高6.59%，PGE2 水平无显著变化。地塞米松与模型组相比，小鼠血清中NO、PGE2 和MDA 水平明显降低，分别降低10.07%，22.06%和22.89%，SOD 活力明显升高6%。在低剂量组中，异绿原酸A、异绿原酸C 和甜叶菊废渣提取物与模型组相比，NO、SOD、MDA 和PGE2 均无显著性变化。在中剂量组中，与小鼠模型组相比，异绿原酸A 和异绿原酸C 均可明显提高SOD 活力，分别提高5.12%和5.52%，且异绿原酸C 使PGE2 含量降低30.25%，而甜叶菊废渣提取物对4 个指标均未产生明显影响，中剂量组中抗炎作用效果排序为异绿原酸C＞异绿原酸A＞甜叶菊废渣提取物。在高剂量组中，异绿原酸A 使SOD 活力显著提高5.95%，使MDA 水平下降33.95%，异绿原酸C 和甜叶菊废渣提取物均能明显改变4 个指标的水平，异绿原酸C 组比模型组中的NO、PGE2 和MDA 含量分别下降8.26%，28.4%和27.34%，SOD活力提高6.76%，甜叶菊废渣提取物组比模型组的NO、PGE2 和MDA 含量分别下降6.25%，27.84%和27.34%，SOD 活力提高6.25%，这说明异绿原酸A、异绿原酸C 和甜叶菊废渣提取物高剂量组的抗炎效果均强于低剂量组，高剂量组中抗炎作用排序为异绿原酸C≈甜叶菊废渣提取物＞异绿原酸A，这与体外RAW264.7 细胞的抗炎活性研究结果基本一致。甜叶菊废渣提取物与异绿原酸C 抗炎效果相当，推测甜叶菊废渣提取物中除异绿原酸A 和异绿原酸C 外，其它多酚黄酮类物质也具有抗炎活性。刘明月[24]报道槲皮素能显著抑制RAW264.7 细胞分泌促炎介质TNF-α、PGE2 和NO 的含量达到抗炎作用。Fikry 等[25]研究显示咖啡酸能使关节炎大鼠模型中MDA 含量显著降低30%，NO 含量显著降低33%，对大鼠关节炎有一定抑制作用。

表2 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对小鼠血清中NO、SOD、MDA、PGE2 的影响（±s，n=10）Table 2 Effects of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on NO，SOD，MDAand PGE2 in serum of mice（±s，n=10）

表2 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对小鼠血清中NO、SOD、MDA、PGE2 的影响（±s，n=10）Table 2 Effects of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on NO，SOD，MDAand PGE2 in serum of mice（±s，n=10）

注：阿司匹林（10 mg/kg bw）、地塞米松（10 mg/kg bw）、样品低剂量组（0.5 g/kg bw）、中剂量组（1.0 g/kg bw）、高剂量组（2.0 g/kg bw）；a～b 表示同列中标有不同字母的数值存在显著性差异（P＜0.05）。

?组 别 NO/μmol·L-1 PGE2/pg·mL-1 SOD/U·mL-1 MDA/nmol·mL-1模型组 39.22 ±1.38a 34.05 ±5.52a 158.26 ±7.06a 6.51 ±0.96a阿司匹林 35.28 ±2.56b 34.40 ±5.04a 168.69 ±9.75b 4.25 ±1.27b地塞米松 35.27 ±1.8b 26.54 ±6.73b 167.76 ±7.71b 5.02 ±0.74b异绿原酸A 低剂量 38.77 ±2.62a 36.22 ±2.47a 163.49 ±4.51a 6.22 ±2.27a异绿原酸A 中剂量 37.89 ±1.28a 36.57 ±8.38a 166.37 ±7.20b 5.02 ±1.39a异绿原酸A 高剂量 36.68 ±0.77a 36.61 ±5.76a 167.68 ±6.93b 4.30 ±0.88b异绿原酸C 低剂量 37.51 ±2.79a 27.44 ±2.29a 160.16 ±5.18a 5.91 ±0.60a异绿原酸C 中剂量 37.69 ±3.37a 23.75 ±5.42b 167.00 ±5.70b 5.69 ±1.12a异绿原酸C 高剂量 35.98 ±1.19b 24.38 ±9.85b 168.96 ±5.42b 4.73 ±0.77b甜叶菊废渣提取物低剂量 38.87 ±3.44a 32.35 ±2.82a 162.00 ±6.24a 5.91 ±0.60a甜叶菊废渣提取物中剂量 37.69 ±1.66a 31.87 ±8.27a 163.64 ±6.37a 5.69 ±1.12a甜叶菊废渣提取物高剂量 36.77 ±2.63b 24.57 ±5.54b 166.79 ±6.39b 4.73 ±0.77b

2.5 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对小鼠肝脏中NO、SOD、MDA 和PGE2 的影响

利用小鼠足趾肿胀炎症模型，研究小鼠肝脏中NO、SOD、MDA 和PGE2 的含量。由表3可知，阿司匹林组与模型组相比NO、MDA 和PGE2 含量分别降低54.39%，14.32%和28.57%，SOD 活力比模型组提高24.43%；地塞米松组NO 和MDA水平分别比模型组降低52.63%和47.62%，PGE2含量和SOD 活力分别比模型组提高18.01%和17.67%，有很好的抗炎作用。在低剂量样品组中，异绿原酸A 和异绿原酸C 与模型组相比SOD 活力分别提高12.35%和10.73%，且异绿原酸C 组比模型组的NO 含量降低35.09%，甜叶菊废渣提取物对4 个指标含量均无显著作用。在中剂量样品组中，异绿原酸A 和异绿原酸C 与模型组相比，可显著降低NO 和MDA 的水平，提高SOD 活力，其中异绿原酸A 组比模型组NO 和MDA 含量分别降低40.35%和34.52%，SOD 活力提高24.79%；异绿原酸C 组比模型组NO 和MDA 含量分别降低42.11%和30.95%，SOD 活力提高24.80%，甜叶菊废渣提取物组对4 个指标含量均无显著性影响，中剂量样品组抗炎效果为：异绿原酸A≈异绿原酸C＞甜叶菊废渣提取物。在高剂量样品组中，异绿原酸A 组比模型组NO 和MDA 含量分别降低50.88%和47.62%，SOD 活力提高36.66%，PGE2 含量与模型组无显著性差异。异绿原酸C 组比模型组NO 和MDA 含量分别降低57.89%和42.86%，SOD 活力提高14.27%，PGE2含量与模型组无显著性差异。甜叶菊废渣提取组仅NO 含量比模型组降低40.35%，而SOD、MDA和PGE2 水平与模型组相比均无显著性差异。高剂量样品组抗炎效果为：异绿原酸A≈异绿原酸C＞甜叶菊废渣提取物。综上，异绿原酸A 和异绿原酸C 具有较强的体内抗炎作用，且二者在肝脏中的抗炎效果无显著性差异，而甜叶菊废渣提取物的抗炎效果弱于异绿原酸A 和异绿原酸C，推测异绿原酸A 和异绿原酸C 可能是甜叶菊废渣提取物在肝脏中发挥抗炎作用的主要成分。

表3 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对小鼠肝脏中NO、SOD、MDA、PGE2 的影响（±s，n=10）Table 3 Effects of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on NO，SOD，MDA and PGE2 in liver of mice（±s，n=10）

表3 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对小鼠肝脏中NO、SOD、MDA、PGE2 的影响（±s，n=10）Table 3 Effects of stevia residue extract and its main components-isochlorogenic acids on NO，SOD，MDA and PGE2 in liver of mice（±s，n=10）

注：阿司匹林（10 mg/kg bw）、地塞米松（10 mg/kg bw）、样品低剂量组（0.5 g/kg bw）、中剂量组（1.0 g/kg bw）、高剂量组（2.0 g/kg bw）；a～c 表示同列中标有不同字母的数值存在显著性差异（P＜0.05）。

组别 NO/μmol·g-1 蛋白 PGE2/pg·g-1 蛋白 SOD/U·g-1 蛋白 MDA/nmol·g-1 蛋白空白 0.57 ±0.29a 34.63 ±3.37a 192.98 ±17.30a 0.84 ±0.11a阿司匹林松0.26 ±0.11c 43.09 ±1.40b 165.35 ±30.02d 0.60 ±0.03b地塞米0.27 ±0.18c 40.868 ±5.48b 227.07 ±13.64b 0.44 ±0.09c异绿原酸A 低剂量 0.47 ±0.11a 32.06 ±3.35a 216.81 ±16.72bc 0.81 ±0.16a异绿原酸A 中剂量 0.34 ±0.14bc 29.76 ±4.87a 240.82 ±9.74c 0.55 ±0.24c异绿原酸A 高剂量 0.28 ±0.05c 39.66 ±5.59a 263.73 ±19.64c 0.44 ±0.19c异绿原酸C 低剂量 0.37 ±0.08ab 38.68 ±7.54a 213.69 ±26.94ab 0.84 ±0.07a异绿原酸C 中剂量 0.33 ±0.15bc 37.28 ±4.15a 240.84 ±20.20bc 0.58 ±0.23bc异绿原酸C 高剂量 0.24 ±0.05c 38.69 ±1.22a 220.51 ±16.59bc 0.48 ±0.09c甜叶菊废渣提取物低剂量 0.47 ±0.20a 36.10 ±2.14a 206.31 ±33.40a 0.66 ±0.16ab甜叶菊废渣提取物中剂量 0.40 ±0.25ab 41.37 ±5.89ab 197.77 ±11.14a 0.70 ±0.13a甜叶菊废渣提取物高剂量 0.34 ±0.18bc 36.91 ±4.33a 208.77 ±13.85ab 0.66 ±0.26ab

3 结论

本文通过建立LPS 诱导RAW264.7 细胞炎症模型和角叉菜胶致小鼠足部肿胀模型，以NO、PGE2、SOD 和MDA 等为检测指标，研究甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸的体内外抗炎作用。结果表明，甜叶菊废渣提取物及其主要组分异绿原酸的抗炎效果排序为异绿原酸C＞异绿原酸A≈甜叶菊废渣提取物。样品通过降低NO 和MDA 含量，提高SOD 活力，发挥抗炎作用。推测甜叶菊废渣提取物的抗炎成分主要为异绿原酸C，其它多酚和黄酮类化合物也有一定的抗炎效果，异绿原酸C 的抗炎作用大于异绿原酸A，推测与二者的分子结构有关，具体抗炎机制差异有待研究。