猪蓝耳病抗体试剂盒出现假阳性的确诊思路

王孝彬，赵康宁，刘纪玉，陈焕昌，李月田，周远杰，刘媛媛，李 飞

（环山集团养猪事业部，山东 威海 264400）

1 概况

1.1 案例一

山东某核心猪场，存栏能力2 500头基础母猪，一点式布局。该猪场使用正压通风、空气过滤系统。场内猪群猪蓝耳病双阴、伪狂犬病gE抗体阴性、PED阴性。2019年12月按照月度监测方案，对场内猪只采样监测猪蓝耳病抗体。本次监测共计采样92份，分别涉及到保育猪只、育成猪只、妊娠母猪、生产公猪。检测结果显示在育成舍检测到2份血清猪蓝耳病抗体阳性（见图1）。

图1 猪蓝耳病抗体监测结果

1.2 案例二

山东某核心猪场，场内存栏能力1 350头基础母猪，两点式布局，配备负压通风系统。场内猪群猪蓝耳病双阴、伪狂犬病gE抗体阴性、PED阴性。2020年 6月3日配怀舍母猪出现1头妊娠母猪流产，现场人员采集流产胎及母猪血液送检实验室检测猪蓝耳病抗体和伪狂犬病gE抗体，检测结果显示猪蓝耳病抗原阳性，伪狂犬病gE抗体阴性。实验室对该样品复检，检侧结果仍为阳性（见表1）。

表1 流产母猪血样猪蓝耳病抗体检测结果

1.3 案例三

山东某场外公猪站，该公猪站存栏公猪120头，为场外租赁场。该场为传统式猪场，负压通风系统。场内猪群猪蓝耳病双阴、伪狂犬病gE抗体阴性。原计划于2020年2月22日转回母猪场内公猪站做生产公猪使用。采集32份血样送体系内实验室检测猪蓝耳病抗体和伪狂犬病gE抗体，检测结果显示有1份血清为猪蓝耳病抗体阳性，其余为阴性，伪狂犬病gE抗体均为阴性（见图2）。2月26日将该公猪站的所有公猪119头（第1头阳性猪只已处死）全部采集血样检测猪蓝耳病抗体，检测结果显示有1头猪只猪蓝耳病抗体出现阳性（见图3）。

图2 场外公猪站32份血清猪蓝耳病抗体检测结果

图3 场外公猪站119份血清猪蓝耳病抗体检测结果

2 临床评估

以上3个案例，除案例二是由于母猪流产原因采样送检，其他两个案例的猪只在检测到猪蓝耳病抗体前均没有表现出明显的猪蓝耳病症状。

3 诊断方法

3.1 复检

在收到异常结果反馈时，第一时间重新采集异常猪只及周边猪只样品进行复检。

案例一在出现异常结果后，将阳性猪只定位，采集其通栏内的所有猪只样品送检。同时将第一次检测到的阳性样品送至第三方实验室确认。

案例二在出现异常结果后，重新采集异常猪只及其周边猪只血样送检，同时将阳性样品送第三方实验室进行确认。

案例三在收到异常结果后，将阳性样品送至第三方实验室进行确认，同时阳性猪只离场处理，后续将剩余公猪全部采样送检。

3.2 双血清法监测猪只抗体水平变化

猪群感染猪蓝耳病野毒，在感染后2周，体内抗体出现明显上升。针对此案例，采集样品阳性猪只及周边猪只血样检测猪蓝耳病抗体，2周之后再次重复次操作。根据两次的猪只抗体变化显示猪只的抗体没有出现明显的变化，说明猪只没有感染猪蓝耳病野毒。

分别在3个案例中，记录异常猪只及其周边猪只耳号和位置，2周后再次采集血样，对比两次的抗体变化情况。

3.3 免疫荧光检测

对3个案例中累计出现的5份阳性样品，全部送至第三方检测实验室，使用免疫荧光检测法，检测样品中是否存在病毒粒子。

4 结果

4.1 复检

本次3个案例在出现阳性猪只后，实验室第一时间对阳性样品进行复检，同时通知相关人员对结果异常猪只及其周边猪只再次采样送检。

3个案例中的阳性样品在实验室复检后，案例一和案例二仍然出现阳性结果（案例一中复检后的S/P值分别为：0.589,0.714。案例二中复检后的S/P值为0.814）案例三复检后的结果为阴性。

第三方实验室检测结果显示3个案例的阳性样品均为阴性。

案例一和案例二中的异常猪只及其周边猪只重新采样后检测结果均为阴性。在案例三中对生产公猪全群采样检测，检测结果显示有1头公猪猪蓝耳病抗体阳性。

4.2 使用双血清法评估猪只抗体变化

使用双血清法评估猪只抗体变化结果如图4所示。

图4 3个案例的抗体监测结果

4.3 免疫荧光检测

为确认出现阳性的样品是否为猪蓝耳病野毒感染，将该3个案例的5份阳性样品送至第三方检测实验室，使用免疫荧光检测方法确认是否感染野毒，检测结果均为阴性（如图5所示）。

图5 免疫荧光检测

5 总结

猪蓝耳病抗体监测是蓝双阴性猪群最常用的监测方法。对于一个猪蓝耳病双阴性群体而言，定期监测猪群的猪蓝耳病抗体，可以有效评估猪群是存在猪蓝耳病野毒感染或者曾经感染过猪蓝耳病野毒。

基于IDEXX的实验室研究（爱德士猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒中文说明书），在95%的置信区间水平（CL）上，采用该试剂盒检测PRRSV抗 体 具 有98.8%的 敏感性和99.9%的特异性。意味着该试剂盒的检测结果在95%的可靠性的情况下，还会存在0.1%的假阳性结果。本次案例的假阳性比例分别为2.17%，100%和1.6%。

以上3个案例在收到阳性结果时，实验室第一时间对阳性样品再次进行检测，确保结果可靠性。同时通知相关负责人对场内猪只临床情况进行评估。对于异常结果除实验室进行复检和临床评估外，还通过抗体变化的监测和免疫荧光的检测来验证检测结果的可靠性。通过的抗体值的变化和免疫荧光的检测结果可以得知，本次3个案例中出现的5份阳性样品，均为假阳性。