血清半乳糖凝集素-9水平与宫颈癌患者化疗耐药性的相关性

李艳

(长垣市人民医院 检验科，河南 新乡 453400)

化疗是部分中期和晚期患者主要治疗方法之一，可有效缓解患者主要症状，延长生存时间，并为尚可接受手术治疗的患者提供机会[1]。但有部分宫颈癌患者会出现化疗耐药性，导致治疗效果下降，甚至治疗失败，从而影响疾病恢复[2]。因此，早期预测、判断患者化疗耐药风险很有必要。研究[3]表明，肿瘤对化疗的耐药与细胞凋亡抑制、表观遗传学及DNA损伤修复机制等多个方面有关。目前，临床已有研究[4]指出，P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)、谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-trans-ferase，GST)与宫颈癌化疗耐药有关，但具体机制也仍尚未明确，且上述指标检测操作复杂，不易检测。半乳糖凝集素(galectin，Gal)是动物凝集素家族的成员之一，其在肿瘤、免疫等信号传导中占据重要角色，尤其在肿瘤的发生、发展过程中发挥关键性作用[5]。其中Gal-9是Gal家族成员之一，可参与诱导细胞凋亡、肿瘤转移等多种生物学活动[6]。由此推测，宫颈癌患者血清Gal-9水平与宫颈癌患者化疗耐药性可能存在一定关系。本研究选取120例宫颈癌患者作为研究对象，重点分析宫颈癌患者血清Gal-9水平与宫颈癌化疗耐药性的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2018年1月至2019年12月长垣市人民医院接受化疗的120例宫颈癌患者作为研究对象，年龄43～55岁，平均(49.12±1.63)岁；鳞癌930例，腺癌27例；根据国际妇产科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO)[7]病理分期标准：ⅡB期11例，Ⅲ期40例、Ⅳ期69例。全部患者及其家属均签署研究同意书。本研究获得长垣市人民医院医学伦理委员会批准。

1.2 选取标准(1)纳入标准：①符合《妇产科学》[8]中宫颈癌相关诊断标准，并经宫颈活检、阴道镜等检查确诊；②首次接受化疗；③肿瘤分期≥ⅡB期。(2)排除标准：①近2周内使用抗生素治疗；②合并尿毒症、糖尿病；③急性附件炎、盆腔炎等；④经期或宫腔流血量较多；⑤伴有真菌、细菌感染急性期等急性炎症疾病；⑥其他原发性恶性肿瘤；⑦既往有盆腹腔手术史；⑧既往有放、化疗史。

1.3 方法

1.3.1化疗方法 全部患者均接受TP化疗方案：采用全身静脉滴注化疗，紫杉醇(海口市制药厂有限公司，国药准字10980170，规格30 mg∶5 mL)135 mg·m-2～175 mg·m-2+顺铂(云南植物药业有限公司，国药准字H53021740，规格2 mL∶10 mg)75 mg·m-2，每3周进行1次，3周为1个疗程，共化疗4个疗程，每个疗程之间间隔10 d。

1.3.2化疗耐药性评估及分组方法 化疗结束后，结合妇科和影像学检查判定耐药性情况。评估标准[9]：完全缓解(complete remission，CR)为肿瘤体积肉眼完全消失，持续至少1个月；部分缓解(partial response，PR)为肿瘤体积缩小>50%，且无新发病灶，持续至少1个月；肿瘤稳定(stable disease，SD)为肿瘤体积缩小<50%，但无新发病灶，持续至少1个月；肿瘤进展(progression disease，PD)为肿瘤体积无缩小或有新发病灶。将疗效为CR和PR的患者纳入敏感组，SD、PD患者纳入耐药组。

1.3.3基线资料调查方法 自制基线资料调查问卷，记录患者一般情况，包括年龄、体质量指数、肿瘤直径、病理类型、饮酒史(饮酒时间>5 a，每次摄入酒精量>10 g)、吸烟史(连续或累计吸烟6个月或以上)。

1.3.4实验室指标检测方法 (1)血清Gal-9：分别采集患者化疗前清晨空腹静脉血3 mL，进行离心处理，以3 500 r·min-1的离心速度共离心15 min，离心完毕后取上清液待检。使用武汉优尔生科技股份有限公司的试剂盒，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清Gal-9水平。(2)肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)：分别采集患者化疗前的空腹外周静脉血，进行离心处理，设置离心速度为2 000 r·min-1，共离心30 min，离心完毕后取上清液待检。选用上海晶抗生物工程有限公司提供的试剂盒，采用酶联免疫吸附试验法测定TNF-α水平。(3)血清糖类抗原(carbohydrate antigen，CA)125、CA199：采集患者清晨空腹静脉血5 mL，进行离心处理，设置离心速度为8 000 r·min-1，共离心6 min，离心完毕后取上清液待检。使用上海酶联生物的试剂盒测定血清CA125、CA199水平。

2 结果

2.1 宫颈癌化疗耐药性情况本研究纳入的120例患者中，经4个疗程化疗后，有43例CR，53例PR，17例SD，7例PD，分别为35.83%(43/120)、44.17%(53/120)、14.17%(17/120)、5.83%(7/120)。

2.2 不同化疗耐药患者的基线资料、实验室指标耐药组血清Gal-9水平低于敏感组，TNF-α水平高于敏感组，差异有统计学意义(P<0.05)，组间其他资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组不同化疗耐药情况患者基线资料、实验室指标比较

2.3 宫颈癌患者化疗耐药与血清Gal-9、TNF-α的相关性分析经Kendall’s tau-b相关性检验结果显示，宫颈癌化疗耐药与血清Gal-9水平呈负相关(r<0，P<0.05)，与TNF-α水平呈正相关(r>0，P<0.05)。见表2。

表2 宫颈癌患者化疗耐药与血清Gal-9、TNF-α的相关性分析结果

2.4 血清Gal-9、TNF-α水平预测宫颈癌患者化疗耐药风险的效能分析将宫颈癌患者化疗前的血清Gal-9、TNF-α水平作为检验变量，化疗耐药性情况作为状态变量(1=耐药，0=敏感)，绘制ROC曲线，结果显示，血清Gal-9、TNF-α水平预测宫颈癌患者化疗耐药风险的AUC均>0.70，预测价值较理想，且血清Gal-9的预测AUC高于TNF-α。见图1。各指标对应最佳阈值、特异度、敏感度及约登指数见表3。

表3 血清Gal-9、TNF-α水平预测宫颈癌患者化疗耐药性高风险的效能分析结果

Gal-9为半乳糖凝集素-9；TNF-α为肿瘤坏死因子-α。

3 讨论

有研究指出，化疗虽是宫颈癌主要治疗手段之一，但部分患者仍对药物的应用存在耐药情况，这将影响化疗效果；化疗耐药的存在，不仅影响化疗效果，同时患者在治疗期间因对药物不敏感，还可能存在耽误治疗，导致疾病进一步进展的情况发生[10-11]。为降低宫颈癌患者化疗耐药性，可早期预测患者化疗耐药风险，并给出针对性建议。

吴少敏等[12]研究指出，30%左右的中晚期宫颈癌患者存在化疗耐药现象。本研究结果显示，化疗后，出现化疗耐药的患者24例，耐药率为20.00%，低于上述研究结果，分析原因可能与本研究纳入的样本量、入选标准限制等原因有关。但仍表明宫颈癌患者化疗耐药性较高，肿瘤转移复发风险高，故本研究着重分析可能与宫颈癌化疗耐药相关的因子。研究指出，免疫调节、细胞凋亡等机制在调节机体抗肿瘤免疫的同时，还参与调控肿瘤化疗耐药[13]。TNF-α是一种炎症因子，可促进T细胞合成分泌多种炎症因子，继而引发炎症反应，且TNF-α在肿瘤耐药方面也发挥关键作用[14]。研究指出，抑制TNF-α可增强抗癌药物在肿瘤细胞中的敏感性[15-16]，分析机制可能与抑制TNF受体、丝/苏氨酸蛋白质激酶哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、核因子-κB信号通路有关。TNF-α在本研究被证实与化疗耐药有关，但该指标检测时容易受其他感染性疾病、患者自身情况等多种因素影响，早期应用价值不高，所以本研究未将其作为主要的指标说明。

半乳糖凝集素在多种动物体内广泛存在，对β半乳糖苷具有特殊的亲和力，在细胞凋亡、炎症反应等多种生理、病理过程中发挥重要作用。Gal-9是半乳糖凝集素家族的成员之一，是T细胞黏蛋白-3(T-cell Ig-mucin-3，Tim-3)的天然配体，二者结合后可诱导免疫耐受，抑制辅助性T细胞1和辅助性T细胞12细胞因子释放，并促使调节性T细胞发展，激活抗病原体的免疫系统，从而抑制TNF-α、白细胞介素-12等炎症因子的表达上调[17]。同时，研究指出，细胞凋亡机制在肿瘤发生发展和化疗耐药等方面占据重要角色[18]。而Gal-9可与细胞外和细胞表面糖蛋白、糖脂上的特殊糖类配体相互结合，继而控制细胞凋亡。因此，结合上述，推测Gal-9与宫颈癌化疗耐药性存在一定的关系。本研究结果显示，耐药组血清Gal-9水平低于敏感组，且经Kendall’s tau-b相关性检验结果显示，宫颈癌化疗耐药与血清Gal-9水平呈负相关。分析血清Gal-9异常表达影响患者化疗耐药的可能原因如下：Gal-9能够抑制脂多糖所引起TNF-α和IL-12等炎症因子的合成分泌，阻止大量TNF-α释放，从而减少由TNF-α所引起的化疗耐药风险[19]。并且，Gal-9可通过半胱天冬酶8、9、3参与的细胞凋亡途径实现对肿瘤细胞的增殖抑制，而半胱天冬酶结构缺陷和激活阻断等因素可导致对化疗药物的抵抗和耐受，因而Gal-9降低可导致化疗耐药[20]。最后本研究对血清Gal-9预测患者化疗耐药风险绘制了ROC曲线，结果显示，血清Gal-9预测宫颈癌患者化疗耐药风险的AUC>0.80。上述结果证实，血清Gal-9低表达与宫颈癌患者化疗耐药有关。虽本研究得到了血清Gal-9与肿瘤化疗耐药存在相关性，但该相关性结果可能受纳入样本量、纳入标准等因素影响，导致研究结果呈弱相关性，相关性较低，加之目前与之相关的研究较少，尚无较多的循证学结果可以支持本研究结论，二者间具体的关系仍需要在未来展开大样本、前瞻性、多中心的研究加以明确。

综上所述，宫颈癌患者化疗实施前血清Gal-9表达与化疗耐药存在一定联系，临床可考虑通过检测宫颈癌患者化疗前血清Gal-9表达，辅助评估分析患者化疗耐药风险。