胃肠宁胶囊质量标准提高研究

龙洋 李小华 夏永芳 宁知贵

摘要：目的：建立胃肠宁胶囊的质量标准。方法：采用TLC法对胃肠宁胶囊中的主要药味元胡、黄连、山楂进行定性鉴别;采用HPLC法测定元胡中延胡索乙素的含量，色谱柱：Agilent-C18（250mm×4.6mm，5um），流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（用三乙胺调节PH值至6.0）（55：45），检测波长：280nm，流速：1.0mL/min。结果：薄层色谱斑点清晰，在与对照药材或对照品相应的位置上显相同的斑点，阴性对照无干扰;元胡中延胡索乙素的线性范围40.16～401.6 ug，r=0.9995，平均回收率为99.21%，RSD为0.54%（n=9）。结论：本方法操作简单，结果准确可靠，重复性好，可作为胃肠宁胶囊的质量控制方法。

关键词：胃肠宁胶囊;延胡索乙素;薄层色谱法;高效液相色谱法;含量测定

【中图分类号】R453 【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2021）04-349-02

胃肠宁胶囊收载于《湖北省医疗机构制剂规范》（2011年版），是由苍术（炒）、延胡索（醋蒸）、砂仁、白头翁、山楂（炒）、猪苓、黄连、木香8味中药组成的复方制剂，具有清热燥湿，化滞之功效，临床主要用于湿热所致的急慢性胃炎、肠炎、痢疾等[1]。由于该制剂现行质量标准制定的年代久远，只有针对盐酸小檗碱的薄层鉴别，不能较全面的反映该中药制剂的质量。本研究对该制剂的质量标准进行了提高，增加了薄层层析法（TLC）用于定性鉴别该制剂中的延胡索、黄连，并采用高效液相色谱法（HPLC）测定主要药味延胡索中延胡索乙素的含量。

1仪器与试药

1.1仪器

BT-125D型电子分析天平（SartoriuS）;WaterS e 2695型高效液相仪（包括WaterS 2998型二极管阵列检测器，EmPower色谱工作站），PCDX-WJ-20超纯水机（成都品成科技有限公司）;JP-060S型超声波清洗机（深圳市洁盟清洗设备有限公司）;WFH-203B型三用紫外分析仪（上海精科实业有限公司）

1.2试药

延胡索乙素对照品（批号：110726-201819）、延胡索对照药材（批号：120928-201609）、黄连对照药材（批号：120913-201310）、盐酸小檗碱对照品（批号：110713-201814），均购自中国食品药品检定研究院;胃肠宁胶囊3批（批号：2019087、2019252、2020114，由恩施州中心医院制备）;阴性样品均为自制;甲醇（色谱级），其他试剂为分析纯。硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂）

2方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1延胡索的薄层鉴别 取本品20粒，加甲醇50mL，超声处理30min，滤过，滤液加中性氧化铝5g，振摇数分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水适量使溶解，加浓氨试液调节PH值至9～10，用乙醚振摇提取3次，每次10mL，乙醚液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，加甲醇50mL，超声处理30min，滤过，自“滤液蒸干 ”起，同法制成对照药材溶液。再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液;取缺延胡索的阴性样品20粒，按供试品溶液的方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2020年版通则0502）试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各5μL，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以正己烷-三氯甲烷-甲醇 （7.5：4：1）为展开剂，置用展开剂预饱和15min的展开缸内，展开，取出，晾干，置碘缸中约3min后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯（365 nm）下检视[2]。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点。阴性对照品无干扰。（结果见图1）

2.1.2黄连的薄层鉴别 取本品6粒，加甲醇20mL，超声处理20min，滤过，滤液作为供试品溶液[1]。另取黄连对照药材0.2g，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液;取缺黄连的阴性样品6粒，按供试品溶液的方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2020年版通则0502）试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（5：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照品无干扰。（结果见图2）

2.2延胡索中延胡索乙素的含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为Agilent C18柱（250mm×4.6mm，5μm）;流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（用三乙胺调节PH值至6.0）（55：45），检测波长：280nm[2]，流速：1.0mL/min。分别取对照品溶液、供试品溶液、陰性对照溶液10μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件记录色谱图（见图 5），阴性对照溶液在延胡索乙素峰位置处无干扰峰，延胡索乙素与样品中其他组分色谱峰可完全分离 。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取延胡索乙素对照品10.04mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解后稀释至刻度（延胡索乙素对照品浓度100ug/mL），摇匀，精密量取5mL置25mL量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过，即得对照品溶液（延胡索乙素对照品溶液浓度为 20.08ug/mL）。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品内容物2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25mL，蒸干，残渣水20mL，用稀盐酸调节PH为2，用乙醚振摇提取2次，每次20mL，弃去乙醚液，水层用氨试液调节PH至11，用乙醚振摇提取，3次，每次20mL，合并乙醚液，回收溶剂至干，加甲醇溶解，转移至10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45um微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

2.2.4 缺延胡索阴性样品溶液的制备 取缺延胡索阴性样品2g，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液，按上述色谱条件测定。结果在阴性样品色谱图上，在与对照品相应保留时间处无色谱峰出现，表明阴性样品不干扰延胡索乙素测定（见图5）。

2.2.5 线性关系考察 分别精密吸取2、5、10、15、20μL 对照品溶液，注入液相色谱仪，测得峰面积积分值。以峰面积积分值（Y ）为纵坐标，以进样量（X）的对数值为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y =31443X -4642.3，r =0.9995。线性范围为40.16μg～ 401.6μg 进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验 取同一对照品溶液20μL，按上述色谱条件重复进样6 次，测定峰面积，结果延胡索乙素对照品峰面积的RSD=0.38%。

2.2.7稳定性试验 取同一供试品溶液20μL，按上述色谱条件分别在 0、4、8、12、16、20、24 h 进样测定延胡索乙素的峰面积，计算延胡索乙素面积RSD为0.81%（n=6），结果表明供试品溶液在24h内稳定。

2.2.8 重现性试验 取同一批样品按“2.2.3”项下制备6份供试品溶液，依上述测定条件测定，延胡索乙素的平均含量为77.01ug/粒，RSD为 1.63 %。

2.2.9 加样回收试验 精密称取本品9份，每3组为一份，分别精密加入对照品溶液（浓度为 100.4ug/mL）1mL、1.5mL、2mL，按“2.2.3”项下制备供试液，按上述测定条件测定，计算回收率，结果表明，延胡索乙素的平均回收率为99.2 %，RSD为1.26 %。结果见表1

2.2.10 样品测定 取胃肠宁胶囊3批，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，精密量取10uL注入液相色谱仪，以外标法计算延胡索乙素的含量。结果见表2

3 讨论

3.1 延胡索的含量测定

延胡索为胃肠宁胶囊制剂中的君药，其主要药效成分为延胡索乙素，测定延胡索乙素的含量对控制制剂质量有较大意义，所以选用延胡索乙素作指标成分进行含量测定。延胡索中的延胡索乙素具有抗溃疡的药理作用，临床常配伍其他中药治疗多种消化系统疾病[4-6]。原质量标准中只有盐酸小檗碱的薄层鉴别，故本研究增加了延胡索乙素的含量测定，能够更好的控制该制剂的内在品质，保证药物的临床治疗效果[3]。

3.2 延胡索、黄连的鉴别方法优化

延胡索TLC鉴别中，供试品溶液的制备，采用酸沉碱提法除去干扰。黄连TLC鉴别中，展开剂用正丁醇-冰醋酸-水（5：1：1）替代甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液（12：6：3：3：1），降低了毒性，展开效果良好，阴性对照无干扰。

3.3 本研究在原有质量标准的基础上增加了延胡索药材的薄层鉴别。

综上所述，对胃肠宁胶囊进行质量标准研究，采用薄层色谱法对胃肠宁胶囊中对延胡索、黄连、山楂进行定性鉴别;采用HPLC对制剂中的延胡索乙素进行含量测定，该方法操作简单、重现性好、专属性高，可作为含量测定的指标。

参考文献

[1]湖北省食品药品监督管理局.湖北省医疗机构制剂规范[M].湖北：湖北科学技术出版社，2011：136-137.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典2015 年版[M].一部.北京：中国医药科技出版社，2015：139-140.

[3]李晰，吴丹，赵美，等.肠康胶囊的质量标准研究[J].中国医药导报，2020，17（31）：25-29.

[4]唐逸丰.延胡索化学成分与药理作用研究概况[J].中医临床研究，2018，10（23）：144-146.

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