不同灭菌程序对双黄连注射液质量的影响

石异 喻勇 佘宁

摘要：为优选双黄连注射液最佳灭菌条件，采用《中华人民共和国兽药典》2015版中灭菌法下湿热灭菌法中3种灭菌程序对双黄连注射液进行灭菌，运用高效液相色谱法、中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012.0版本）对3批双黄连注射液的3种有效成分含量、指纹图谱相似度进行比较。结果表明，在湿热灭菌法下，双黄连注射液采用121 ℃×30 min灭菌程序灭菌效果最佳。

关键词：双黄连注射液;灭菌程序;比较

中图分类号：S859.5        文献标识码：A        文章编号：1007-273X（2021）02-0007-02

双黄连注射液是兽药中常用的中成药制剂。其含有新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、连翘脂苷A、黄芩苷和黄芩素等多种成分[1]，这些成分大多含有苷健、酯健等结构[2]，在高温湿热灭菌条件下易发生水解或氧化反应，使双黄连注射液的有效成分发生变化，从而使其质量降低。因此，为了保障双黄连注射液的质量，研究灭菌温度和灭菌时间对双黄连注射液质量的影响是非常必要的。

目前生产上常用的灭菌方法有湿热灭菌法、干热灭菌法和气体灭菌法等。而湿热灭菌法由于灭菌能力强，是目前应用最广泛的灭菌方法。根据《中华人民共和国兽药典》（2015年版）灭菌法中相关要求，湿热灭菌法通常采用121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3种程序。

双黄连注射液主要活性成分是黄芩苷、绿原酸和连翘苷[3]。指纹谱图可以快速、准确地测定双黄连注射液中绿原酸、黄芩苷和连翘苷等有效成分的含量[1，4]。所以，本试验采用湿热灭菌法，在灭菌程序已验证，F0≥8的基础上，比较在121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3种灭菌程序下双黄连注射液的3种有效成分含量及指纹图谱相似度。通过试验数据得出双黄连注射液的最佳灭菌工艺，以期为双黄连注射液的质量保证提供科学依据。

1 仪器与试剂

SPD-20A型高效液相色谱仪[岛津企业管理（中国）有限公司]，320-S型pH计、AE-240型电子分析天平[梅特勒-托利多国际贸易（上海）有限公司]，YXQ.WF-Z型灭菌柜（广州市科洋医疗设备有限公司），中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012.0版本）

对照品：绿原酸、黄芩苷、连翘苷（中国兽药药品监察所），双黄连注射液若干（四川齐全红动物药业有限公司），其余试剂均为分析纯。

2 试验方法

2.1 生产工艺

将黄芩饮片加适量水煎煮3次，第1次2 h，第2次、第3次各1 h，合并煎液，过滤，滤液浓缩并在80 ℃时加入2 mol/L盐酸溶液调节pH至1.0～2.0，保温30 min，静置12 h，滤过;沉淀加6～8倍量水，搅拌，用40%氢氧化钠溶液调节pH至7.0，加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过;滤液用2 mol/L盐酸溶液调节pH至2.0，60 ℃保温30 min，静置12 h，滤过;沉淀用乙醇洗净，调节pH至7.0，回收乙醇。金银花、连翘加适量温水浸泡30 min，煎煮2次，每次1.5 h，合并煎液，滤过;滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25（70～80 ℃），冷却至40 ℃时缓慢加入乙醇，使含醇量达75%，充分攪匀，静置12 h，滤取上清液，残渣加75%乙醇适量，搅匀，静置12 h，滤过，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味，加入上述黄芩提取物，并加水适量，用40%氢氧化钠溶液调节pH至7.0，搅匀，冷藏（4～8 ℃）72 h，滤过，滤液调节pH至7.0，加水至1 000 mL，搅匀，静置12 h，滤过，灌封，灭菌，即得。

2.2 灭菌工艺

采用湿热灭菌法，比较在121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3种灭菌程序下3批双黄连注射液的3种有效成分含量及指纹图谱相似度。

3 结果与分析

不同灭菌程序下3批双黄连注射液3种有效成分含量、指纹图谱相似度见表1。由表1可见，在116 ℃×40 min的灭菌程序下，双黄连注射液绿原酸的含量最高，这是由于绿原酸受热会水解。121 ℃×30 min的灭菌程序下，双黄连注射液的指纹图谱相似度最高。

4 结论

试验按照《中华人民共和国兽药典》2015版中湿热灭菌法测定在121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3种灭菌程序下3批双黄连注射液的3种有效成分含量。结果表明，在湿热灭菌法下，双黄连注射液采用121 ℃×30 min灭菌程序灭菌效果最好，双黄连注射液的指纹图谱相似度最高。

由于《中华人民共和国兽药典》（2015版）灭菌法中规定：湿热灭菌法除了可以采用121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3种灭菌程序外，还可以采用其他的温度和时间参数。但无论采用何种灭菌温度和时间参数，都必须证明所采用的灭菌工艺和监控措施在日常运行过程中能确保物品灭菌后的SAL≤10-6。本试验只验证了灭菌法中121 ℃×15 min、121 ℃×30 min及116 ℃×40 min 3种灭菌程序。在这3种程序中，121 ℃×30 min灭菌程序对双黄连注射液影响程度最小。

参考文献：

[1] 王艳伟，宋立言，代雪平，等.双黄连注射液HPLC指纹图谱研究[J].中成药，2011，33（9）：1461-1464.

[2] 吴立军.天然药物化学[M].北京：人民卫生出版社，2007.

[3] 林仙军. 中兽药双黄连注射液鉴伪技术研究[D].杭州：浙江大学，2016.

[4] 李 楠，杜怡婷，马 鑫，等.双黄连色谱指纹图谱和谱效关系研究进展[J/OL].首都师范大学学报（自然科学版）：1-13[2020-12-09].