不同产地不同采集期滇桂艾纳香中总黄酮及原儿茶酸的含量测定

周江煜，侯小涛，3，韦宏官，戴航

（1.广西中医药大学，广西南宁530200；2.广西万寿堂药业有限公司，广西南宁530219；3.广西中药药效研究重点实验室，广西南宁530200）

滇桂艾纳香为菊科植物假东风草Blumea riparia（Bl.）DC.的干燥全草，主要产于广西西南部和云南东南部［1］，为广西壮瑶族民间草药。其味淡，性平，具有活血化瘀、止血调经的功效［2-4］，在广西尤其是百色地区有较长的使用历史，有较好的开发利用前景。滇桂艾纳香的主要化学成分有黄酮类、原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、咖啡酸等［5-8］。本研究分别采用紫外分光光度法和高效液相色谱法对不同产地不同收集期滇桂艾纳香的总黄酮及原儿茶酸含量进行分析，为滇桂艾纳香的采收和进一步开发利用提供依据。

1 实验材料

1.1 药材滇桂艾纳香药材采自广西百色和河池，由广西中医药大学郭敏副教授鉴定为菊科植物滇桂艾纳香Blumea riparia（Bl.）DC.的干燥全草。

1.2 仪器岛津UV-2550紫外分光光度计；Agilent 1100高效液相色谱仪，包括G1311A系列四元梯度泵，Agilent VWD检测器，手动进样器，柱温箱，Agilent 1100色谱工作站；SB 2200型超声波清洗仪（上海）；赛多利斯BP211D电子天平（德国）。

1.3 试剂芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100080-200306，供含量测定用）；原儿茶酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110809-200503，供含量测定用）。亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、甲醇、乙醇均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 总黄酮的含量测定

2.1.1 对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品23.16 mg，加60%乙醇配制为100 ml溶液，置水浴中微热使溶解，放冷，制得浓度为0.115 8 mg/ml的芦丁对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备将滇桂艾纳香药材干燥、粉粹，过3号筛，准确称取粉末各约0.5 g至锥形瓶中，加50%乙醇50 ml，称定重量。超声提取45 min，冷却，补重，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.1.3 测定波长的选择取芦丁对照品溶液0.5 ml，置于10 ml容量瓶中，用30%乙醇补充至5 ml，加入0.3 ml的5%NaNO2溶 液，放 置5 min；加 入0.3 ml的10%Al（NO3）3溶液，放置6 min；加入2.0 ml的4%NaOH溶液，混匀后用30%乙醇稀释至刻度，静置10 min。在紫外分光光度计下进行全波长扫描，在510 nm处有最大吸收值，因此确定总黄酮的测定波长为510 nm。

2.1.4 标准曲线的绘制精密吸取芦丁对照品溶液0.0 ml、1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml、5.0 ml，分别置于10 ml量瓶中，各加30%乙醇使成5.0 ml，精密加入0.3 ml亚硝酸钠溶液（1→20），摇匀，放置6 min；再加入0.3 ml硝酸铝溶液（1→10），摇匀，放置6 min；加入氢氧化钠溶液4.0 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min。在510 nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。得标准曲线方程：Y=0.012 3X-0.001 2（r=0.999 9），表明线性关系良好。

2.1.5 精密度试验取10月份那坡县采收的滇桂艾纳香药材，按“2.1.2”项下方法制备样品溶液，再按“2.1.3”项下方法处理，于510 nm处连续5次测定吸光度，代入公式计算总黄酮含量，结果RSD为1.8%（n=5），表明该法精密度良好。

2.1.6 重复性试验取同一批药材6份，按“2.1.2”项下方法制备样品溶液，再按“2.1.3”项下方法分别测定吸光度，代入公式计算总黄酮含量，结果RSD=1.9%（n=6），表明方法的重复性良好。

2.1.7 稳定性试验取同一批药材，按“2.1.2”项下方法制备样品溶液，再按“2.1.3”项下方法，在3 h内每隔30 min测定吸光度，代入公式计算总黄酮含量，结果RSD=1.2%（n=6），表明样品在3 h内稳定性良好。

2.1.8 加样回收率试验取已知含量的滇桂艾纳香药材，加入一定量对照品，按“2.1.2”项下方法制备样品溶液，再按“2.1.3”项下方法处理后测定吸光度，计算加样回收率，结果总黄酮的平均回收率为101.8%，RSD=1.4%（n=6），表明加样回收良好，结果见表1。

表1 总黄酮加样回收试验结果 （n=6）

2.1.9 总黄酮含量测定取不同产地不同采集期的滇桂艾纳香药材，分别按“2.1.2”项下方法制备样品溶液。精确吸取0.5 ml样品溶液，按“2.1.3”项下方法依次进行测定。将测得的吸光度代入回归方程计算出总黄酮含量，结果见表2。

表2 不同产地不同采集期滇桂艾纳香药材总黄酮的含量测定结果 （mg/g）

2.2原儿茶酸的含量测定参考文献［9-11］的方法进行测定。

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取原儿茶酸对照品12.51 mg，加甲醇配制成50 ml原儿茶酸对照品溶液，浓度为0.250 2 mg/ml。

2.2.2 供试品溶液的制备将滇桂艾纳香药材干燥、粉粹，过3号筛，取粉末各约0.5 g至锥形瓶中，加50%的乙醇50 ml，称定重量。超声提取45 min，冷却，补足重量，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 色谱条件色谱柱：Agilent Hypersil ODS Cl8柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（10∶89∶1）；检测波长：256 nm；柱温：室温；经测试，样品峰分离度＞1.5，原儿茶酸理论塔板数＞3 000。

2.2.4 标准曲线的绘制精密称取12.51 mg原儿茶酸对照品，加甲醇配制成50 ml的对照品贮备液。精密量取上述对照品贮备液1.0 ml，3.0 ml，5.0 ml，10 ml，25 ml，加甲醇分别配制成25 ml对照品溶液（浓度分别为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、250μg/ml），在“2.2.3”项下的色谱条件下，分别进样5μl进行测定。以原儿茶酸对照品进样量（μg）为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得回归方程：Y=5.849 9×103X+48.393 0（r=0.999 4）。结果表明：进样量在0.05～1.30μg范围内，原儿茶酸进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验取10月份那坡县采收的滇桂艾纳香药材，按“2.2.2”项下方法制备样品溶液后进行测定，重复进样5次，记录原儿茶酸峰面积比值，结果原儿茶酸的RSD值为1.8%（n=5），表明仪器的精密度良好。

2.2.6 重复性试验取同一批滇桂艾纳香药材5份，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备样品溶液后进样分析，结果原儿茶酸RSD=1.8%（n=5）；表明方法的重复性较好。

2.2.7 稳定性试验取同一批滇桂艾纳香药材样品溶液，在放置0 h，2 h，5 h，8 h，10 h，12 h后分别进样分析，结果原儿茶酸的RSD为1.9%（n=6），表明样品在12 h内稳定。

2.2.8 加样回收率试验取已知含量的滇桂艾纳香药材样品，加入一定量对照品，按“2.2.2”项下方法制备样品溶液后进样分析，测得原儿茶酸的平均回收率为98.5%，RSD=2.1%（n=6），表明加样回收良好，结果见表3。

表3 原儿茶酸加样回收试验结果 （n=6）

2.2.9 含量测定取不同产地不同采集期的滇桂艾纳香，按“2.2.2”项下方法制备样品溶液。分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，按“2.2.3”项下方法色谱条件进行测定，以峰面积代入回归方程计算出原儿茶酸含量，结果见表4。

表4 不同产地不同采集期滇桂艾纳香中原儿茶酸的含量测定结果 （μg/g）

3 讨论

本实验对广西8个不同产地不同采集期滇桂艾纳香总黄酮、原儿茶酸进行含量测定，并进行了方法学考察。对比表2、表4中的数据，滇桂艾纳香不同产地总黄酮、原儿茶酸的含量在不同月份差异较大：10月份百色那坡县采收的滇桂艾纳香总黄酮的含量最高，11月百色田林县采收的滇桂艾纳香原儿茶酸含量最高。

综合考虑药材中总黄酮、原儿茶酸的含量，以那坡县和田林县10月、11月份滇桂艾纳香中含量最高。其他生长月份虽然有某种有效成分含量较高，但其他有效成分含量却偏低。因此，滇桂艾纳香药材的最佳产地为百色那坡县和田林县，最佳采收期为10月、11月。本文的研究可为进一步开发利用滇桂艾纳香提供依据。