HPLC法检测5%丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚颗粒剂

徐勇存，金鑫雷，霍春梅，张平，周建成(浙江天丰生物科学有限公司检测中心，浙江 金华 321000)

0 引言

5%丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚颗粒剂为三元复配混剂，是由符合标准的丙草胺原药、噁草酮原药、乙氧氟草醚原药及载体和助剂制成。药剂通过杂草的根部、叶片吸收，是一种水稻田选择性除草剂。试验结果表明，该制剂对一年生杂草有优良的防除效果。目前此三元复配混剂的检测方法未见报道。本文列举的丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚检测方法可将丙草胺、噁草酮、乙氧氟草醚及其杂质快速的分离、测定。有利于帮助企业组织生产，并进行科学全面的质量管理，维护公司产品的信誉和用户的利益。

1 实验部分

1.1 仪器设备

高效液相色谱仪LC1260：配有二极管阵列检测器(美国Agilent 公司)、色谱柱：Eclipse Plus C18，4.6×50 mm(i.d.)1.8 μm(美国Agilent 公司)、超声波清洗器：KQ-400B(昆山市超声仪器有限公司)、超纯水机：Milli-Q(美国Millipore 公司)。

1.2 试剂

乙腈：色谱纯；异丙醇：色谱纯；磷酸：分析纯；丙草胺标样、噁草酮标样、乙氧氟草醚标样：采购自国家农药质量监督检验中心(沈阳)，其质量分数分别为98.3%、99.2%、98.9%；5%丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚颗粒剂(3.2%丙草胺+1.1%噁草酮+0.7%乙氧氟草醚)：浙江天丰生物科学有限公司。各有效成分结构式如图1、图2、图3 所示[1]。

图1 丙草胺结构式

图2 噁草酮结构式

图3 乙氧氟草醚结构式

1.3 标准溶液和试样溶液的制备

1.3.1 标样溶液的配制

准确称取丙草胺标样0.064 g、乙氧氟草醚标样0.014 g、噁草酮标样0.022 g(精确至0.000 02 g)置于100 mL 容量瓶中，加甲醇溶解，超声波浴槽中脱气10 min，取出降至室温后，用甲醇补加至刻度，摇匀，经微孔滤膜过滤，此为标样溶液。

1.3.2 试样溶液的配制

称取试样约2 g(精确至0.000 02 g)置于100 mL 容量瓶中，加入5 mL 水超声使样品化开，加甲醇溶解，超声波浴槽中脱气10 min，取出降至室温后，用甲醇补加至刻度，摇匀，经微孔滤膜过滤，此为试样溶液。

1.4 HPLC 分析条件

流动相：Ψ(乙腈+异丙醇+0.05%磷酸水溶液)=15+28+57(V/V/V)；流速：1.4 mL/min；检测器波长：245 nm；柱温：50 ℃；进样体积：5 μL[2]。

1.5 测定和分析

在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针有效成分响应值的重复性，待相连两针各有效成分的峰面积变化小于1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。5%丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚颗粒剂典型的标样、试样色谱图如图4和图5 所示，丙草胺保留时间约5 min、乙氧氟草醚保留时间约8min、噁草酮保留时间约9 min。

图4 标样色谱图

图5 5%丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚颗粒剂试样色谱图

1.6 计算

将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中的峰面积分别进行平均。丙草胺(乙氧氟草醚、噁草酮)的质量分数X1按式(1)进行计算：

式中：r1为标样溶液中丙草胺(乙氧氟草醚、噁草酮)峰面积的的平均值；r2为试样溶液中丙草胺(乙氧氟草醚、噁草酮)峰面积的平均值；m1为标样的质量(g)；m2为试样的质量(g)；p为标样中丙草胺(乙氧氟草醚、噁草酮)的质量分数(%)[3]。

2 结果和讨论

2.1 色谱条件的选择

检测波长的确定：用二极管阵列(DAD)检测器进行光谱扫描，在245 nm 波长处3 个有效成分(丙草胺、噁草酮、乙氧氟草醚)吸收值较大且杂质1、杂质2、杂质3 吸收值较小，故选择245 nm 为检测波长。

流动相的选择：流动相选用甲醇-0.05%磷酸水溶液、乙腈-0.05%磷酸水溶液不同配比浓度时，有效成分和杂质不能完全分离，在乙腈-0.05%磷酸水溶液中加入异丙醇时，分离度有明显改善，经过试验发现当流动相选用Ψ(乙腈+异丙醇+0.05%磷酸水溶液)=15+28+57(V/V/V)时，各有效成分及杂质得到很好地分离，峰形对称。

2.2 方法线性相关试验

结果表明，丙草胺(图6)在此分析条件下具有良好的线性关系。线性回归方程为y= 848.6x-5.664 5，相关系数R2=0.999 5。乙氧氟草醚(图7)在此分析条件下具有良好的线性关系。线性回归方程为y= 6 901.8x-8.346 9，相关系数R2=0.999 8。噁草酮(图8)在此分析条件下具有良好的线性关系。线性回归方程为y= 708 7x-9.534，相关系数R2=0.999 9。

图6 丙草胺标准曲线图

图7 乙氧氟草醚标准曲线图

图8 噁草酮标准曲线图

2.3 方法精密度的测定

按上述方法平行检测6 次，测得丙草胺标准偏差为0.02，变异系数为0.58%，乙氧氟草醚标准偏差为0.01，变异系数为1.77%，噁草酮标准偏差为0.01，变异系数为1.30%(如表1所示)。

2.4 方法准确度的测定

采用加标回收率法测定回收率，结果表明此方法具有较高的回收率(如表2 所示)。

表1 方法精密度

表2 丙草胺·噁草酮·乙氧氟草醚加标回收率

3 结语

经过上述试验表明，此检测方法具有线性关系好、精密度高、回收率高、分离效果好的特点，适用于企业生产过程中的定性定量分析。