复合芽孢杆菌对蛋鸡粪便微生物及蛋品质的影响

万学济，龚 萍，杨 宇，童新红，李中心，喻 婷，叶胜强，陈 星，王丽霞，凌明湖，陈 洁，钱运国

（武汉市农业科学院，武汉 430208）

中国是畜禽养殖大国，也是兽用抗菌药物生产和使用大国。兽用抗菌药物在防治动物疾病、提高养殖效益、保障畜禽产品有效供给中，发挥了重要作用。但是，由于市场秩序不够规范、养殖环节使用不尽合理、从业人员科学用药意识不强、公众对细菌耐药性认知度不高等问题依然存在，严重威胁了畜禽产品质量安全和公共卫生安全，给人类和动物健康带来隐患［1，2］。中国已于 2020 年 7 月 1 日起全面禁止促生长药物饲料添加剂的使用。大量的研究表明，在畜禽日粮中添加一定剂量的益生菌，可与肠黏膜共同构成一道保护屏障，阻止细菌、病毒和食物抗原的入侵，进而促进宿主健康［3］。芽孢杆菌可以形成芽孢，具有抗逆性强、耐酸碱、耐高温高压等特性，是畜禽养殖中研究和使用较多的一类益生菌［4］。其中地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）均已在中国得到批准可用作饲料添加剂。在家禽中，芽孢杆菌具有提高动物生产性能，促进营养物质消化吸收，提高饲料利用率，减少动物肠道中的有害菌群，调节动物胃肠道微生态平衡，提高抗病力等多种作用［5］。为此，试验选取前期研制的一种复合芽孢杆菌添加到蛋鸡饲粮中，研究其对蛋鸡肠道微生物及蛋品质的影响，旨在为益生菌在蛋鸡生产中的推广应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

复合芽孢杆菌由实验室研制（地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌含量分别为5×109CFU/g、2×1010CFU/g）。

1.2 试验设计

选取同一批次两栋海兰褐蛋鸡（30 周龄），一栋为对照组（10 416 只），一栋为试验组（10 224 只）。对照组饲喂基础日粮，试验组在基础日粮中添加1 g/kg 复合芽孢杆菌。

1.3 饲养管理

采用蛋鸡“124”标准化养殖模式，即1 栋全封闭式鸡舍，层叠式笼养蛋鸡2 万只以上，生产过程采用自动喂料机、自动集蛋鸡、传送带清粪机、湿帘风机4 机配套进行生产蛋鸡的高效健康养殖模式。试验期3 个月。

1.4 指标检测

1）粪便微生物检测。无菌采集新鲜粪便保存于冰盒中，每组5 个重复，每月测定一次。在超净台内稀释粪样，选择2~3个适宜稀释度分别接种于营养琼脂、乳酸菌培养基琼脂、伊红美蓝琼脂平板、SS 琼脂培养基（所用培养基均购自青岛海博生物技术有限公司），分别测定菌落总数、乳酸菌、大肠菌群和“沙门+志贺”氏菌的数量；选择2~3 个适宜稀释度，80 ℃水浴15 min 后，接种于营养琼脂平板，测定芽孢杆菌的数量。采用平板菌落计数法进行统计，结果用1 g粪便中细菌数量的对数值［log（CFU/g）］表示。

2）蛋品质测定。每组随机采集新鲜鸡蛋120枚，于12 h 内进行蛋品质测定，每月测定一次。采用电子天平测定蛋重，用数显卡尺、数显千分尺分别测定蛋的纵长、横宽及蛋壳厚度；用盐水漂浮法测定蛋比重，蛋壳强度测定仪（ROBOTMATION）测定蛋壳强度，蛋品质测定仪（ROBOTMATION）测定蛋白高度、哈氏单位和蛋黄颜色，用电子天平测定蛋黄重；并记录肉斑、血斑及鸡蛋破损情况。

1.5 数据处理

试验数据用SPSS 13.0 进行统计分析，结果用“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 复合芽孢杆菌对蛋鸡粪便微生物的影响

由图1 可以看出，在0 d 时，试验组与对照组鸡舍粪便中的细菌总数、大肠菌群、芽孢杆菌、乳酸菌及“沙门+志贺”氏菌的数量无显著差异（P>0.05）（图1A）；在30 d 时，与对照组相比，试验组“沙门+志贺”氏菌数显著降低（P<0.05），芽孢杆菌数显著增加（P<0.05）（图1B）；在 60 d 时，与对照组相比，试验组细菌总数、大肠菌群数显著降低（P<0.05），芽孢杆菌数显著增加（P<0.05）（图1C）；在90 d 时，与对照组相比，试验组细菌总数、大肠菌群、“沙门+志贺”氏菌数显著降低（P<0.05）（图1D）。从0~90 d 总体上看，试验组蛋鸡粪便中的细菌总数、大肠菌群和“沙门+志贺”氏菌的数量呈下降趋势，芽孢杆菌数呈上升趋势，90 d 时粪便中“沙门+志贺”氏菌数极显著低于0~60 d（P<0.05），芽孢杆菌数显著高于 0~30 d（P<0.05）。结果表明，在日粮中添加复合芽孢杆菌，可显著降低蛋鸡粪便中的有害微生物数量，改善蛋鸡肠道健康。

2.2 复合芽孢杆菌对蛋品质的影响

由图2 可以看出，在0、30 d 时，试验组与对照组的蛋重、蛋形指数、蛋比重、蛋黄比率、蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋黄颜色、蛋白高度、哈氏单位均无显著差异（P>0.05）（图2A、2B）；在60 d 时，试验组的蛋黄比率显著高于对照组（P<0.05）（图2C）；在90 d时，试验组的蛋黄颜色显著高于对照组（P<0.05）（图2D）；在30~90 d，试验组的蛋壳强度、蛋白高度和哈氏单位均有高于对照组的趋势，但差异不显著（P>0.05）。从0~90 d 总体上看，试验组的蛋重、蛋白高度与哈氏单位有增加的趋势，但差异不显著（P>0.05）；60 d 的蛋黄比率极显著高于其他时期（P<0.05），90 d的蛋壳强度显著高于0 d（P<0.05），90 d 的蛋黄颜色显著高于其他时期（P<0.05）。结果表明，在日粮中添加复合芽孢杆菌，可显著提高鸡蛋的蛋黄比率、蛋黄颜色，具有增加蛋壳强度、蛋白高度和哈氏单位的潜力。

3 小结与讨论

3.1 复合芽孢杆菌对蛋鸡粪便微生物的影响

动物肠道微生物区系的平衡对于动物的生长发育有着直接的影响。在饲养管理中不可避免地会导致大肠杆菌、沙门氏菌等病原菌进入畜禽肠道内繁殖。进入肠道的病原菌会通过产生毒素和有害物质减少肠道微生物的种类与数量，降低肠道微生物的多样性［6］。肠道微生物多样性的减少会降低肠内稳态和抵御病原菌的能力。益生菌主要通过与肠道微生物之间、与宿主之间的相互作用而发挥作用［7］。Li 等［8］报道，芽孢杆菌能抑制肠道有害菌的繁殖，促进肠道有益菌的生长；郭军蕊等［9］研究发现，饲粮中添加枯草芽孢杆菌可降低蛋鸡粪和盲肠大肠杆菌数量，增加肠道双歧杆菌数量。本研究中，在30 d 时，试验组“沙门+志贺”氏菌数显著降低（P<0.05），芽孢杆菌数显著增加（P<0.05）；在60 d 时，试验组细菌总数、大肠菌群数显著降低（P<0.05），芽孢杆菌数显著增加（P<0.05）；在90 d 时，试验组细菌总数、大肠菌群、“沙门+志贺”氏菌数显著降低（P<0.05）。表明在日粮中添加复合芽孢杆菌，可显著降低蛋鸡粪便中的大肠菌群、“沙门+志贺”氏菌等有害微生物数量，增加芽孢杆菌等有益微生物的数量，进而改善蛋鸡肠道健康。

3.2 复合芽孢杆菌对蛋品质的影响

蛋品质是影响商品蛋经济效益的重要因素之一。哈氏单位是衡量蛋的新鲜度和蛋清质量的重要指标，蛋白高度和哈氏单位越高，蛋清品质越好，蛋越新鲜。Abdelqader 等［10］发现，在高产蛋鸡饲粮中添加枯草芽孢杆菌，可明显提高蛋鸡的蛋壳厚度、加深蛋黄的颜色，从而改善蛋壳的品质，使破蛋率降低，进一步提高养殖户的经济收入；雷凯［11］研究表明，蛋鸡饲粮中添加地衣芽孢杆菌可以改善蛋壳厚度、蛋壳强度、哈夫单位、蛋白高度和蛋黄颜色；郭军蕊等［9］研究显示，饲粮中添加枯草芽孢杆菌可显著提高鸡蛋的蛋黄颜色。本研究中，在60 d 时，试验组的蛋黄比率显著高于对照组（P<0.05）；在90 d 时，蛋黄颜色显著提高（P<0.05）；0~90 d，试验组的蛋重、蛋白高度与哈氏单位有增加的趋势，但差异不显著（P>0.05）。结果表明，在日粮中添加复合芽孢杆菌，可显著提高鸡蛋的蛋黄比率、蛋黄颜色，具有增加蛋壳强度、蛋白高度和哈氏单位的潜力。

在蛋鸡日粮中添加复合芽孢杆菌，可显著降低蛋鸡粪便中的大肠菌群、“沙门+志贺”氏菌等有害微生物数量，增加芽孢杆菌等有益微生物的数量，进而改善蛋鸡肠道健康；可显著提高鸡蛋的蛋黄比率、蛋黄颜色，具有增加蛋壳强度、蛋白高度和哈氏单位的潜力，进而改善蛋品质。