QuEChERS 结合液相色谱-串联质谱法 快速测定鸡肉中磺胺类残留

◎ 吕 警，张建平，崔银仓

（1.乌鲁木齐市农产品质量安全检测中心，新疆 乌鲁木齐 830000；2.新疆昌源水务科学研究院有限公司，新疆 乌鲁木齐 830000）

磺胺类兽药，是一类具有对氨基苯磺酰胺结构的磺胺类兽药[1]，具有抗菌性[2]，且价格较低，应用效果理想，特别是在食源性动物细菌感染性疾病的预防与治疗中，受到了行业人士的青睐。鉴于在动物身上有残留的磺胺类兽药，如果人体长时间摄入，就会引发过敏等现象，严重者还会出现剥脱性皮炎，严重危害到人们的生命健康[3]。随着时代的发展，食品检测行业人士经过多年的研究，致力于推出检测食物残留磺胺类兽药的方法，就是希望能够维护好人们的生命健康。磺胺的分析方法主要有酶联免疫法[4]、胶体金免疫层析法、毛细管电泳法、表面等离子体共振技术、阻抑速差催化光度法、高效液相色谱法、液相色谱质谱法和高效液相色谱串联质谱法[5]等。本研究通过开发快速、简便的样品前处理方法，建立了鸡肉中12 种磺胺的液相色谱-串联质谱检测方法，能够满足对鸡肉样品中的磺胺类药物进行快速筛查和定量的 要求。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

甲醇、乙腈为色谱纯，购自上海安谱实验科技股份有限公司；实验用水为Milli-Q 高纯水；磺胺甲基异恶唑、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺二甲异噁唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺间二甲氧嘧啶和磺胺氯哒嗪，纯度均大于97%，均购自Dr.Ehrenstorfer Gmbh 公司。

Xevo TQS-micro 液相色谱质谱联用仪（美国Waters 公 司）、Milli-Q 超 纯 水 仪（美 国Millipore公司）、3-18K 冷冻离心机（德国Sigma 公司）、 KQ-700DE 超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、MS3 涡旋仪（德国IKA 公司）及R-210 旋转蒸发仪 （瑞士Buchi 公司）。

1.2 液相色谱条件

色谱柱：沃特世ACQUITY UPLC BEH C18 柱 （50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；进样量：10 μL；柱温：35 ℃；流速：0.2 mL·min-1；流动相：A 为0.1%甲酸水溶液，B 为乙腈。梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序表

1.3 质谱条件

ESI 离子源：正离子扫描；毛细管电压：1.5 kV；离子源温度：150 ℃；去溶剂气温度：500 ℃；去溶剂气流量（氮气）：800 L·h-1；气帘气流量：50 L·h-1；多重反应监测模式扫描（MRM）；所有物质的质谱分析参数见表2。

表2 所有待测物质的质谱分析参数表

1.4 样品处理

称取2 g（精确至0.01 g）样品于50 mL 塑料离心管中，加入15 mL 乙腈溶液，再加入缓冲盐包SBEQ- CA8802-B，涡旋混合5 min，超声波提取10 min， 5 000 ～10 000 r·min-1离心5 min，吸取上清液加至需要的净化管，重复提取两次，合并两次提取液。

上述提取液按先后顺序依次加入到净化管中，涡旋混合5 min，5 000 ～10 000 r·min-1离心5 min。取出净化管中所有上清液，40 ℃减压蒸发至近干。加入1 mL 乙腈-水溶液（1 ∶1）溶解，涡旋混合1 min，过0.22 µm 滤膜，供液相色谱-质谱测定。

1.5 标准曲线配制

分别称取各磺胺类标准品适量，用甲醇溶解并定容[6]，配成1.0 μg·mL-1的混合标准工作液，逐级稀释成浓度分别为0.01 μg·mL-1、0.02 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、 0.10 μg·mL-1和0.20 μg·mL-1的混合标准工作液，供液相色谱-串联质谱联用仪测定。

1.6 精密度和回收率测定

取鸡肉空白基质配制成添加水平为10 µg·kg-1的混合标准溶液，重复进样6 次，计算回收率和标准相对偏差。

2 结果与分析

2.1 样品提取方法的优化

相比较于甲醇和丙酮，分析样品沉淀蛋白质结果，乙腈表现出了良好的使用效果，本次在开展试验探究中，检测人员所使用的提取溶剂主要是乙腈。

2.2 质谱分析条件的优化

通过实际调查发现，针对磺胺类物质，其内部含有较多的氨基基团，检测人员确定的离子化模式主要是ESI+。检测人员在分析一级质谱环节中，应用的是直接式进样，面对药物中的准分子离子峰（[M+H]+），逐一实施针对性的研究，检测人员严格按照行业探究规范，确定好各项数据，保证最终试验结果具备较高精确性以及可靠性。

通过深入调查可以看出，分析磺胺药物，其中主要涵盖m/z 92 和m/z 156 等多种二级质谱离子碎片。通过选取不同的碰撞能量（0 ～40 eV）和表1 梯度洗脱程序对磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶分别进行二级质谱碎片分析，研究发现，分别在30 eV、28 eV的碰撞能量下，能有效分离磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶化合物。

2.3 流动相条件

相比较于甲醇+0.1%甲酸水溶液，乙腈+0.1%甲酸水溶液有着理想的色谱行为。甲酸为磺胺化合物提供质子，能够保证磺胺药物离子化顺利进行，与此同时，甲酸能够确保质子化色谱柱内的硅羟基，减少磺胺药物形成氢键，在极高响应效果下，更不会产生拖尾现象。鉴于此，在本次试验研究中，确定的流动相为乙腈+0.1%甲酸水溶液。

2.4 基质效应

在当前行业人士观点当中，在进行液相色谱串联质谱，其中基质形成机理并没有确定，主要就是在药物残留当中，不管是基质还是等待检测的磺胺药物，都处于离子源处竞争离子化。经过分析可知，在相同的条件下，开展液相色谱串联质谱检测，针对磺胺药物响应值，与样品基质之间有着直接的关系，随着响应值忽强或者是忽弱等现象下，从中并不能总结出相应的规律。鉴于基质效应问题下，本实验采用阴性样品基质溶液配制不同浓度的标准溶液。

2.5 线性范围与检出限

用 阴 性 样 品 基 质 溶 液 配 制0.01 μg·mL-1、 0.02 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1和 0.20 μg·mL-1标准工作液，按照上述设定的条件进行分析测定，以质量浓度、峰面积分别作为横坐标、纵坐标，绘制标准曲线，结果见表3。

表3 各种磺胺药物的表征参数表

由表3 可知，在0.01 ～0.20 μg·kg-1浓度范围内，各种磺胺的相关系数r 均大于0.999。检出限按照3 倍信噪比计算。

2.6 精密度和回收率测定结果

由表4 可知，10 µg·kg-1添加范围的平均回收率为87.6%～101.0%，相对标准偏差为3.53%～11.60%。

表4 回收率与精密度表

3 结论

本实验建立了QuEChERS 结合液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中12 种磺胺药物残留的分析方法，与标准方法相比，大大缩短了前处理周期，节约了检测成本。本实验方法操作简便、快速、准确，可有效去除基质中蛋白的干扰，提高了磺胺药物测定的灵敏度。