非酒精性脂肪性肝病患者血清Chemerin和颈动脉内膜中层厚度的相关性

高海丽 杨道坤 梁海军 王新伟 王燕平 陈宝鑫

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)是指除酒精及其他确定因素导致的以肝细胞内大量甘油三酯沉积为特征的慢性肝脏疾病[1]。NAFLD对肝脏的危害基本得到共识，但近年来研究发现[2-3]，NAFLD患者心脑血管疾病的发病风险显著升高，而动脉粥样硬化是心脑血管疾病发病的基本病理生理基础[4]，如何早期识别NAFLD患者是否发生动脉粥样硬化并尽早给予干预是提高其远期预后的关键。Chemerin为一种脂肪细胞因子，与颈动脉粥样硬化的发病机制密切相关[5]，颈动脉内膜中层厚度(carotid intima-media thickness, CIMT)增厚是评估亚临床动脉粥样硬化的一项指标，本研究通过回顾性收集新乡医学院第一附属医院NAFLD患者，探讨NAFLD患者血清Chemerin水平与CIMT的关系，现将具体内容报道如下。

资料与方法

一、研究对象

纳入2019年1月1日至2020年5月1日于新乡医学院第一附属医院感染科就诊的96例NAFLD患者和体检中心35例健康体检者(对照组)作为研究对象，NAFLD患者中男56例，女40例，平均年龄(42.56±5.22)周岁；对照组男20例，女15例，平均年龄(43.58±4.95)周岁，两组研究对象在性别和年龄上相比无显著差异。所有NAFLD患者均为住院后通过肝脏组织病理初次诊断，符合《非酒精性脂肪性肝病诊疗指南(2010年修订版)》中的标准[6]，且年龄超过18周岁，入院后临床资料完整；排除酒精性脂肪肝、病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、药物性肝损伤、遗传性肝病及合并其他恶性肿瘤、严重感染性疾病患者。入院后采用Philips IE33彩色多普勒超声诊断仪对所有研究对象进行CIMT检查，参考中国医师协会超声医师分会制定的《血管和浅表器官超声检查指南[7]》，CIMT≥1.0 mm定义为内膜增厚，本研究中CIMT≥1.0 mm共41例(ACIMT组)，男20例，女21例，平均年龄(42.02±4.23)周岁，其余CIMT<1.0 mm共55例(NCIMT组)，其中男36例，女19例，平均年龄(42.86±4.19)周岁。所有研究对象均知情同意且签署知情同意协议书，本课题经过医院伦理委员会同意并批准(批准号：2181102)。

二、研究方法

(一)基本临床特征及生化指标 所有研究对象的基本情况如性别、年龄、BMI(body mass index)、吸烟史、合并糖尿病病史、高血压病史、收缩压、舒张压等均来源于住院病历；清晨空腹抽取外周静脉血，生化指标如总胆固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triacylglycerol，TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-c)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(fasting blood glucose，FPG)、空腹胰岛素(fasting insulin，FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR=FPG*FINS/22.5)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase，AST)、尿酸(uric acid，UA)等均通过医院检验科进行检测。

(二)CIMT的检查 由1名高年资超声科医师对患者进行CIMT检查，仪器为Philips IE33彩色多普勒超声诊断仪，频率为10 MHz，分别检查颈总、颈内动脉和分叉部。CIMT距离为腔内膜交界面到外膜上层的距离，以后壁值为标准，检测6个点，取平均值。

(三) Chemerin表达水平的检测 所有研究对象均于清晨空腹抽取外周静脉血3 mL在4 ℃离心机离心，收集上层血清置于-80 ℃冰箱中保存备用。血清Chemerin浓度采用ELISA法检测，具体操作步骤按照ELISA试剂盒内说明书进行(美国，R&D公司)，最终研究对象血清Chemerin水平按照酶标仪(thermo酶标仪，美国Thermo Fisher Scientific公司)在450 nm波长下测定吸光度(OD值)。

三、统计学分析

结 果

一、一般资料的比较

对照组、NCIMT组和ACIMT组三组研究对象在性别、年龄、BMI、吸烟史、高血压病史、糖尿病病史、收缩压、舒张压、TC、HDL-c、HbA1c上相比较均无显著差异(P>0.05)；TG、LDL-c、FINS、HOMA-IR、ALT、AST、Chemerin在对照组、NCIMT组和ACIMT组中依次升高，组组比较均存在显著差异(P<0.05)；FPG、UA和CIMT在对照组和NCIMT组中相比较均无显著差异(P>0.05)；与对照组和NCIMT组相比较，ACIMT组中FPG、UA和CIMT均显著升高(P<0.05)。结果见表1。

二、相关性分析

96例NAFLD患者CIMT水平与TG、LDL-c、HOMA-IR、UA和Chemerin均呈现显著正相关性，相关系数分别为0.322、0.474、0.354、0.365和0.489，而与其他指标无明显相关性。结果见表2。

表1 NAFLD患者和对照组基线资料的比较

表2 NAFLD患者CIMT与临床参数的相关性分析

三、NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的危险因素

以CIMT为因变量(CIMT<1.0 mm为0，CIMT≥1.0 mm为1)，以表1中性别、年龄、吸烟史、合并糖尿病病史、高血压病史、BMI、收缩压、舒张压、FBG、TC、TG、HDL-c、LDL-c、HbA1c 、FPG、FINS、HOMA-IR、ALT、AST和UA等指标为自变量进行Logistic回归分析，结果显示，TG(OR=4.221)、HOMA-IR(OR=1.353)、LDL-c(OR=5.548)和Chemerin(OR=8.015)是NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的危险因素。结果见表3。

四、血清Chemerin诊断NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的ROC曲线

ROC曲线结果发现，血清中Chemerin表达水平诊断NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的曲线下面积为0.885(95%CI:0.813～0.942，P<0.000)，当截断值为265.29 ng/mL时，诊断敏感度和特异度分别为 93.24%和95.25%。ROC曲线见图1。

讨 论

研究认为NAFLD属于代谢综合征的肝脏表现[8]，NAFLD患者不仅发生肝脏损伤，也是心脑血管疾病发病的一项独立危险因素。meta分析结果显示[9]，相对于非NAFLD患者，NAFLD患者发生致命性和(或)非致命性心血管疾病的风险显著升高(OR=1.64，95%CI：1.26～2.13)。此外，Ekstedt M等[2]对88例NAFLD患者进行长达13.7年左右的随访后发现，NAFLD患者发生心脑血管疾病的风险高达29%，而肝癌的发病风险仅仅为10%。动脉粥样硬化是心脑血管疾病发病的基础[4]，而NAFLD也会促进动脉粥样硬化的发生[10]，因此，动脉粥样硬化可能是连接NAFLD和心脑血管疾病的“桥梁”，近年来寻找能反映NAFLD患者发生颈动脉粥样硬化的生物学标志物已成为研究的重点。

Chemerin属于一种脂肪细胞因子，由163个氨基酸构成，由肝脏和脂肪组织分泌，研究认为血清中Chemerin主要来源于肝脏的分泌[11]。大量研究报道认为，Chemerin与NAFLD的发病机制有关。吕骥等[12]研究显示，NAFLD患者血清中Chemerin水平显著升高，且与HOMA-IR及TG等呈现显著正相关性；Krautbauer S等[13]同样证实NAFLD患者肝脏组织中Chemerin表达水平升高，且Docke S等[14]认为肝脏的脂肪变性、肝小叶炎症、气球样变及肝纤维化等与肝脏组织中Chemerin高表达有关。上述结果提示，Chemerin在NAFLD患者肝脏病变进展中可能扮演了重要作用。Chemerin在动脉粥样硬化的发病机制中同样扮演了重要作用，Liu H等[15]构建动脉粥样硬化小鼠模型后发现，小鼠血清中Chemerin及其他炎症因子如NF-κB、IL-1β等水平显著升高，但Chemerin基因表达被抑制后，小鼠动脉粥样硬化得到明显改善，NF-κB和IL-1β表达水平显著降低；Dimitriadis

表3 Logistic回归分析NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的影响因素

图1 血清Chemerin诊断NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的ROC曲线

GK等[16]证实Chemerin通过上调NF-κB和IL-1β的表达参与血管内皮细胞的异常活化增殖、功能障碍和收缩异常，从而加速动脉粥样硬化的发展。本研究结果发现，相对于对照组和NCIMT组，ACIMT组患者Chemerin表达水平显著升高，且与CIMT呈现显著正相关性，提示NAFLD患者血清Chemerin表达水平在一定程度上反映了颈动脉粥样硬化的严重程度；其他研究也进一步发现颈动脉粥样斑块不稳定组患者血清Chemerin表达水平高于斑块稳定组，且与斑块指数呈现显著正相关性(r=0.301)[17]，Zhao D等[18]证实血清Chemerin是中国人群颈动脉斑块不稳定的危险因素。因此，本研究结果提示血清Chemerin表达水平与NAFLD患者CIMT密切相关，Logistic回归分析也证实Chemerin(OR=8.015)是NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的一项独立危险因素，而Lachine NA等[19]也同样证实Chemerin是2型糖尿病患者CIMT的独立危险因素；另一方面，本研究发现其他指标如TG(OR=4.221)、HOMA-IR(OR=1.353)、LDL-c(OR=5.548)同样是NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的独立危险因素，NAFLD患者TG、LDL-c水平均显著高于对照组，与王萍等[20]研究结果基本一致，说明NAFLD患者常常发生血脂水平紊乱，而血脂水平异常升高导致大量脂质沉积于动脉内皮下，被平滑肌及巨噬细胞等吞噬形成泡沫细胞，最终引起CIMT增厚。胰岛素抵抗早已被证实属于动脉粥样硬化的独立危险因素之一，胰岛素抵抗与炎症反应、内皮细胞功能紊乱、脂质代谢异常等均密切相关，共同参与了动脉粥样硬化的发生[21]，冯南山[22]证实HOMA-IR是脑卒中患者动脉粥样硬化的独立危险因素。

为进一步探讨Chemerin是否可以作为NAFLD患者动脉粥样硬化的一项血清学指标，本研究发现，血清Chemerin在诊断NAFLD患者CIMT≥1.0 mm的AUC高达0.885，诊断敏感度和特异度分别为 93.24%和95.25%，提示血清中Chemerin可作为诊断NAFLD患者动脉粥样硬化的一项血清学标志物。

综上所述，NAFLD患者血清中Chemerin表达水平显著升高，可作为NAFLD患者动脉粥样硬化的一项血清学标志物，但本研究为一项横断面研究，存在着样本量不足等缺陷，以后可开展大型队列研究探讨血清中Chemerin表达水平与NAFLD患者心脑血管疾病发生风险的相关性。