2020年新疆部分地区猪瘟病毒抗体检测及分析

孙琼飞 王紫阳 张小玉 党瑞莹 常军帅 屈勇刚*李 岩

（1石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003；2动物疾病防控兵团重点实验室，新疆石河子 832003；3新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站，新疆乌鲁木齐 830063）

猪瘟（Classical swine fever,CSF）是由猪瘟病毒（CSFV）引起的家猪和野猪的一种急性、烈性、接触性传染病，是危害世界养猪业最严重的传染病之一，被世界动物卫生组织（OIE）列为必须报告的动物疫病之一[1]，被我国列为一类动物传染病。目前国内受非洲猪瘟疫情的影响，中国的生猪存栏量受到较大影响。猪瘟的防控工作，也是重中之重。通过猪瘟疫苗免疫措施的实施，我国基本控制了猪瘟的大范围发病。但在生产中，由于各样的影响因素，猪瘟免疫失败现象时常发生，造成非典型性和隐性感染猪的存在。因此，通过免疫抗体水平监测，制定合理的免疫程序，对提高疫苗免疫效果具有重要意义。为了解2020年全年新疆部分地区CSFV抗体水平，本试验选择乌苏、库车、石河子、双河、塔城、克拉玛依等6个地区的18个规模化猪场进行猪瘟病毒抗体检测与分析，以期为新疆地区规模化猪场的猪瘟免疫防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品来源

血液样品随机采自于乌苏（A）、库车（B）、石河子（C）、双河（D）、塔城（E）、克拉玛依（F）等6个地区的18个规模猪场，共采集血样1 085份。其中大型规模化猪场4个，采集血清样品557份；中型规模化猪场8个，采集血清样品392份；小型规模化猪场6个，采集血清样品136份。

1.2 材料与仪器

猪瘟病毒（CSFV）抗体检测试剂盒购自北京IDEXX公司，自动酶标仪购自美国BioTek公司。

1.3 试验方法

1.3.1 样品采集

猪只前腔静脉部位消毒，用一次性针管，从消毒部位刺入，采集血液3～5 mL，经室温静置，待血液凝固血清析出后，按照顺序吸取1 mL血清逐份转入灭菌后1.5 mL的离心管中，逐管编号，必要时经4 000 r/min的转速离心10 min，-20℃保存备用。

1.3.2 间接ELISA检测法

按照CSFV的ELISA抗体检测试剂盒说明书要求进行操作。使用前，试剂盒所有组分恢复到18～26℃。将阴性对照、阳性对照、1∶1稀释的待检血清样品（50 μL样品血清加50 μL稀释液）对应加入酶标板，震荡均匀后放入18～26℃的恒温箱孵育2 h，用洗涤液洗3次，扣板除去残留液体，加入酶标抗体，放入18～26℃的恒温箱中孵育30 min，再用洗涤液洗3次，扣板除去残留液体后，加入底物溶液，避光放入18～26℃的恒温箱，10 min后加入终止液终止反应，使用酶标仪于450 nm波长测定吸光度值，并进行结果分析。

1.3.3 结果判定

试验有效性判定：阴性对照OD450值（NCX）＞0.500，阳性对照OD450值（PCX）阻断率（%）＞50%。阻断率（%）＝100×（阴性对照平均OD450nm值－样品OD450nm值）/阴性对照平均OD450nm值。若被检样品阻断率≤30%，该样品为猪瘟病毒抗体阴性；若被检样品阻断率≥40%，该样品为猪瘟病毒抗体阳性；若被检样品阻断率在30%～40%，该样品判为可疑，需要重新检测。变异系数CV＝（标准差/平均数）×100%。若CV≤40%，则抗体水平稳定，免疫效果良好；若40%＜CV≤60%，则抗体水平一般；若CV＞60%，则抗体水平差异性大，整齐度不好，需要调整免疫程序[2]。

1.3.4 试验数据分析

用SPSS 20.0对所获数据进行统计学分析与判定。

2 试验结果与分析

2.1 不同地区规模化猪场猪瘟抗体水平

6个地区规模化猪场血清共1 085份，平均抗体合格率为83.59%，平均阻断率为（66.99±25.09）%，离散度为37.45%。6个地区规模化猪场（A、B、C、D、E、F） 的抗体合格率分别为 92.86%、81.62%、82.93%、70.00%、70.73%和93.75%。A、B、C、D、E、F等6个地区规模化猪场抗体合格率高于国家规定标准（70%），但E场离散度比较大。使用SPSS软件进行方差分析显示A、B、C、D、E地区规模化猪场之间差异显著（P＜0.05），见表1。

表1 新疆部分地区规模化猪场猪瘟病毒抗体水平检测结果

2.2 不同规模化猪场猪瘟抗体水平

不同规模化猪场猪瘟抗体水平见表2。小、中、大型规模化猪场抗体合格率为70.59%、83.42%和86.54%。小型规模化猪场和大型规模化猪场抗体水平差别较大，其中大型规模化猪场抗体合格率为86.54%，小型规模化猪场的抗体合格率刚刚超过国家标准，为70.59%。小、中、大型规模化猪场猪瘟抗体阻断率分别为（56.45±25.18）%、（65.77±25.11）%和（70.70±23.91）%。

表2 不同规模猪群猪瘟免疫抗体检测结果

3 讨论

3.1 新疆部分地区免疫情况

2020年新疆乌苏、库车、石河子、双河、塔城、克拉玛依6个地区，不同规模化猪场猪瘟免疫效果良好，均超过了国家规定标准。但不同地区猪瘟抗体水平差别较大（70.00%～93.97%）。猪瘟疫苗免疫抗体平均阻断率和变异系数是综合评估猪瘟疫苗免疫效果的2个重要参数，通过对检测数据的综合分析可以帮助猪场及时发现猪群免疫中可能存在的漏洞并制订相应的优化改进方案[3]。马晓艳等[4]对新疆的生猪进行猪瘟免疫抗体检测，发现猪瘟抗体平均阳性率为75.33%。刘鸽等[5]对新疆北部地区的生猪进行猪瘟病毒抗体检测，结果猪瘟抗体阳性率为89.89%。谷思颖等[6]对新疆石河子、昌吉、塔城、伊犁、巴州等5个地区的猪场进行猪瘟抗体检测，结果猪瘟抗体阳性率为84.11%。张家瑞等[7]对新疆巴州、伊犁、塔城、阿克苏、奎屯、石河子等6个地区的猪场进行猪瘟病毒抗体检测，结果猪瘟抗体阳性率为85.02%。通过分析2018—2020年新疆部分地区猪瘟抗体水平发现，2020年猪瘟抗体水平低于前2年水平，应根据实际情况查找具体因素，而制定合理的措施，提高猪群猪瘟抗体水平。从抗体水平和变异系数结果来看，A、B、C、F地区猪群的抗体水平稳定，免疫效果良好；E地区抗体水平偏低，变异系数较大，发生疫情的风险较大，建议查找具体原因，加强猪瘟免疫防控的力度。

3.2 不同规模养猪场的免疫情况

根据检测结果可以发现，猪瘟病毒的抗体水平高低与养猪的规模有较大关系，大型规模化养猪场的猪瘟疫苗免疫合格率和变异系数均高于小型规模化养猪场的免疫水平。在实践调查中发现大型规模化养猪场，有相对完善的免疫预防体系，有健全的人员培训制度，人员在生物安全防控时，往往表现得更加积极，能主动配合各项任务，保证消毒的效果，往往更有利于猪瘟的防控和净化。在饲养管理方面能做到合理饲喂，保证猪群整体均匀度，能给猪群营造一个安全和干净的环境，减少猪群应激反应的发生，减少免疫失败。大型规模化养猪场花费大量的物力和财力，有专业的基础兽医负责场区猪群的防疫工作，了解猪群的抗体水平，制定科学的疫苗免疫措施。大型规模化养猪场在疫苗购买和使用时，会更加注重疫苗的免疫效果。在疫苗运输阶段，往往按照严格的冷链运输，保证疫苗的效价。中、小型规模化养猪场虽然免疫效果达到国家标准，但应该积极学习大型规模化养猪场科学的饲养管理制度、严格的生物安全理念、完善的人员培训体系、科学的疫苗免疫措施。猪瘟的防控依旧要靠疫苗免疫，监测抗体水平依然是猪瘟防控的重要手段，及时做好猪瘟抗体检测，及时发现问题，及时补免或改进免疫方案，确保新疆养猪业的安全生产。