饲料中苏丹红的测定方法及仪器适用性验证

蒋婷婷，郑金星

（浙江福立分析仪器股份有限公司，浙江台州317500）

苏丹红是一种由亲脂性偶氮化合物合成的红色染料，并非食品添加剂，被广泛应用于溶剂、油、蜡、汽油的增色以及鞋、地板等增光。由于苏丹红对食品具有染色功能，而且比天然色素价格低廉且染色牢固，导致一些厂商受利益驱使仍违禁使用。而在禽用饲料中，使用苏丹红会使禽类所产的蛋黄颜色发红，人食用后会在体内缓慢蓄积，对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用。我国及欧盟（EU）等国家已禁止苏丹红在食品及饲料中添加。

在食品方面有关苏丹红的检测方法有国家标准2005《食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法》及欧盟标准方法《辣椒粉及以辣椒为主要成分的产品中苏丹红和胭脂树橙的含量分析》。在饲料方面我国农业部在2007年颁布了关于使用高效液相色谱仪测定饲料中苏丹红染料的行业标准。本文根据饲料行业标准对某饲料中的苏丹红进行检测，验证方法以及仪器的适用性。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：LC5090（配置为LC5090 四元低压输液泵、LC5090脱气机、LC5090自动进样器、LC5090柱温箱、LC5090 紫外检测器、LC5090+色谱工作站），浙江福立分析仪器股份有限公司；KS康氏振荡器，常州隆和仪器制造有限公司；GT16-3高速台式离心机，北京时代北利离心机有限公司；CYNS-12氮吹仪，杭州川一实验仪器有限公司；注射器滤膜（有机系），13 mm×0.45 μm，上海安谱科学仪器有限公司；乙腈，色谱级；苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，纯度不低于85.0%，5 g，上海安谱科学仪器有限公司。

苏丹红标准贮备液：分别准确称取苏丹红标准品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各10 mg，精确至0.000 1 g，分别置于100 mL容量瓶中，加乙腈超声至完全溶解并定容至刻度。

苏丹红标准中间液：准确移取苏丹红标准贮备液10 mL 至100 mL 棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度配制成浓度为10 μg/mL的苏丹红溶液。

苏丹红标准工作液：分别准确移取苏丹红标准中间液1 mL、2 mL、5 mL、10 mL、20 mL 于100 mL 棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度配制成浓度分别为0.1 μg/mL、0.2 μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL、2 μg/mL 的标准工作液。

1.2 色谱条件

色谱柱：Sapphiresil C18 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：A相-水，B相-乙腈（0～8 min，B相95%～100%保持20 min，28～29 min；B 相100%～95%保持6 min）；流速：1 mL/min；柱温：40℃；进样体积：10 μL；检测波长：苏丹红Ⅰ478 nm，苏丹红Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ520 nm。

1.3 样品前处理

准确称取某饲料样品10 g（精确至0.001 g）置于150 mL具塞锥形瓶中，加入50 mL乙腈，置于振荡器振荡提取30 min，取上清液于5 000 rpm 下离心3 min，静置后取上清液5 mL，设置氮吹仪水浴温度50℃，用氮气吹干后加1 mL乙腈超声30 s，过孔径为0.45 μm的有机滤膜，滤液根据上述色谱条件上机测定。

2 结果与分析

2.1 标准曲线

将0.1 μg/mL、0.2 μg/mL、0.5 μg/mL、1 μg/mL、2 μg/mL的标准工作液按1.2中的色谱条件进行测定，外标法定量。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，所得标准曲线线性关系良好，相关系数均大于0.999 5（见表1），符合定量要求。

表1 苏丹红的标准曲线

2.2 检出限

经计算，基线噪音为32.8 μAU，当苏丹红浓度为0.02 μg/mL 时，S/N=3.1，经计算换算，该方法检出限为0.02 mg/kg，达到了NY/T 1258-2007《饲料中苏丹红染料的测定高效液相色谱法》0.5 mg/kg的要求。

2.3 精密度

对0.5 μg/mL 的标准溶液连续进样7 次，考查仪器的精密度，保留时间和峰面积的重复性结果如表2 所示。保留时间RSD 在0.039%～0.047%之间，峰面积RSD 在0.152%～0.410%之间，仪器的精密度良好（见表2）。

表2 重复性结果（n=7）

2.4 样品及加标回收率

对某饲料进行苏丹红检测，经保留时间比对，苏丹红四组分均未检出。同时对某饲料进行加标，加标浓度为0.5 μg/mL，加标回收率结果见表3，色谱图见图1、图2。

图1 某饲料未加标色谱图

图2 某饲料加标后色谱图

表3 回收率结果

3 结论

采用福立高效液相色谱仪LC5090 低压梯度系统测定饲料中的苏丹红，具有灵敏度、精密度和准确度高的特点，满足NY/T 1258-2007《饲料中苏丹红染料的测定高效液相色谱法》的检测要求。四种苏丹红分离度良好，标准曲线线性度均大于0.999 5，仪器检出限计算值为0.02 mg/kg。连续进样7次，四种苏丹红的保留时间和峰面积RSD分别在0.039%～0.047%和0.152%～0.410%，仪器精密度良好。对某饲料进行苏丹红检测，检测结果未检出四种组分，样品的加标回收率在92%～103%。使用该行业标准测定饲料中的苏丹红灵敏度高，分离度好，且仪器测定结果准确可靠，仪器适用性好。