当归对血虚大鼠Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的影响

段树丽

（靖远县畜牧兽医技术服务中心，甘肃 靖远 730600）

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验动物 SD大鼠，雄性50只，SPF清洁级，体重200±20 g。按组分笼饲养，通用饲料喂养，自由饮水，自然光照，温度20～30℃，适应环境3 d后进行试验。

1.1.2 试剂与材料 水合氯醛、乙酰苯肼（上海中秦化学试剂有限公司）、注射用环磷酰胺（江苏恒瑞医药股份有限公司）、ATP酶试剂盒（南京建成生物工程有限公司）、当归样品采自甘肃岷县、精密移液器及一次性吸头、蒸馏水、一次性试管、吸水纸等。

1.1.3 仪器 37℃恒温箱、酶标仪、动物血液细胞分析仪（南京普朗医疗器械设备有限公司）、RE-6000旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、SHB-III循环水式多用真空泵（郑州）等。

1.2 试验方法

1.2.1 当归水煎液的制备 称取生当归240 g，加1 200 ml蒸馏水浸泡1 h，然后煮沸，沸腾后小火继续加热持续30 min，趁热过滤，倒出上清液，剩余滤渣加蒸馏水600 ml，继续煮沸20 min，倒出上清液，合并2次上清液，过滤，用旋转蒸发仪浓缩至300 ml，然后用蒸馏水定容至400 ml[1]，使其相当于含生药0.6 g/ml（临用时以蒸馏水配成所需浓度），置于4℃冰箱中备用。

1.2.2 动物分组与造模 将实验动物随机分为5组，每组大鼠10只，分别为正常对照组、模型组和当归水煎液高、中、低剂量组。

正常对照组用灌胃针投服生理盐水1 ml/0.1 kg，1次/d，连续9 d，除正常对照组外，其余各组在试验第2天和第5天，分别皮下注射20 mg/kg、40 mg/kg的C8H10N2O，注射C8H10N2O 5 d后，其余各组每日腹部皮下注射环磷酰胺40 mg/kg，连续4 d[2]。当归水煎液高、中、低剂量组（低剂量相当于含生药0.15 g/ml、中剂量相当于含生药0.3 g/ml、高剂量相当于含生药0.6 g/ml）灌胃针投服当归水煎液1 ml/0.1 kg，1次/d，连续9 d[3]。

1.2.3 取材及处理 各组大鼠分别于末次给药后2 h水合氯醛麻醉，股动脉无菌取血，检测血常规，主要包括血红蛋白（HGB）等进行计数[4]。股动脉采血，肝素钠抗凝，分离血清，按照ATP酶试剂盒说明书，检测红细胞Na+-K+-ATP与Ca2+-Mg2+-ATP两种酶的活性。ATP酶活性以每小时分解1×107个红细胞产生的无机磷的量表示(单位nmol·10-7·h-1)。

用SPSS软件中的ANOVA分析正常组和模型组数据（p＜0.05），对数据进行分析。

2 结果与分析

2.1 一般体征特征

随着给药天数的增加，除正常对照组之外，其余各组大鼠口唇或粘膜淡白无泽，四肢无力或轻度擅毛，毛发失泽干枯，精神萎靡，行动迟缓，聚堆，耳、尾颜色苍白而凉，血呈暗红，嗜睡，体重下降，模型组更为明显。解剖后可观察到正常对照组肝脏、脾脏、胸腺正常，模型组胸腺明显萎缩。当归水煎液不同剂量组各种免疫器官不同程度淤血，颜色不同程度加深。

2.2 当归水煎液对血虚大鼠血常规的影响

与正常对照组比较，模型组大鼠血象显著降低(p＜0.01)，说明利用乙酰苯肼和环磷酰胺联合造模成功。通过分析、比较发现当归水煎液不同剂量对大鼠影响不同，详细情况见表1。

表1 当归水煎液对血虚大鼠血象的影响x±s

表2 当归水煎液对大鼠Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的影响x±s

2.3 当归水煎液对大鼠Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的影响

与正常对照组相比，模型组大鼠红细胞膜两种酶活力Na+-K+-ATP和Ca2+-Mg2+-ATP均显著降低。当归水煎液高、中、低剂量组红细胞膜Na+-K+-ATP酶活力和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力明显高于模型组和生理盐水对照组(p＜0.05)。详见表2。

3 讨论

3.1 血虚模型的建立

有文献报道[5]中医血虚模型建立常用的方法主要有乙酰苯肼[6]、环磷酰胺[7]等几种造模方法。在中医证型研究中乙酰苯肼诱导血虚模型在血虚动物模型的制作中具有代表性，相关研究多且已成熟。乙酰苯肼是一种强氧化剂，可干扰红细胞内多种酶的活性，使机体出现溶血性贫血，红细胞、白细胞和血红蛋白明显减少。试验观察到注射乙酰苯肼后次日，大鼠即表现精神萎靡，神疲乏力，易惊，行动迟缓，团缩弓腰，口唇、眼睑、耳廓苍白，易脱毛，毛蓬竖少光泽，饮水多，进食减少，大便干黑而少等贫血症状。

本试验采用环磷酰胺和乙酰苯肼联合应用造模，研究当归对血虚模型的改善作用。环磷酰胺作为细胞毒药物，损伤外周血细胞、骨髓细胞、白细胞，对后者损伤更明显。乙酰苯肼能损伤红细胞，两者联用对血液系统损伤更大，大鼠皮下注射两种药能较好地反映中医血虚的症候。随着环磷酰胺和乙酰苯肼用量的增加，各组大鼠呈现不同程度的精神萎靡，毛色失去光泽。当归能够改善化学物质所致血虚小鼠的造血功能，同时具有一定的免疫增强功能，从而达到扶正固本功效，但其补血和促进免疫功能的机理需要进一步研究。

3.2 当归对血虚大鼠外周血象的影响

本试验中乙酰苯肼和环磷酰胺联合造模使模型组大鼠的红细胞数、白细胞数、血红蛋白含量均显著降低，当归水煎液高、中、低剂量组能显著提高血虚大鼠RBC、WBC、HGB水平(p＜0.01)。乙酰苯肼和环磷酰胺联合应用成功造成大鼠血虚，当归具有良好的补血作用。

3.3 当归对血虚大鼠Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性的影响

Na+-K+-ATP和Ca2+-Mg2+-ATP是细胞膜上重要的酶蛋白，这两种蛋白酶基因起源相同，此外还有相似的结构功能，能主动将Ca2+、Na+运送到细胞外，摄入Mg2+、K+。Na+-K+-ATP酶是将细胞膜内Na+移到细胞外，同时将细胞外的K+移入膜内，从而形成两种离子的分布不平衡；Ca2+-Mg2+-ATP酶的作用是将Mg2+移入胞内，将Ca2+移到细胞外，维持内环境的相对稳定。血虚模型使能量代谢和离子平衡被破坏，形成膜离子泵功能障碍，导致ATP减少、细胞内外离子分布异常，通过增加ATP酶的活性调节离子分布、改善机体能量代谢、保护机体免受损伤 。

本试验中模型组红细胞膜Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力明显低于空白对照组（p＜0.05），模型组红细胞膜Na+-K+-ATP酶，Ca2+-Mg2+-ATP酶活性显著性降低（p＜0.01），说明血虚造模型成功 。试验表明当归水煎液可增强乙酰苯肼与环磷酰胺致大鼠血虚模型机体的能量代谢。