补阳还五汤对气虚血瘀模型大鼠血液流变学的影响

凌爽，毕悦，李孟，牛雯颖，肖洪彬，冯月男

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

中医学认为，血瘀证是因气滞、气虚、寒凝、火热等因素，导致血行不畅，或因外伤、各种急性、慢性病导致出血未消散者。气虚血瘀证是中医临床的常见证型，也是临床中多个学科、多种疾病的常见证候，其在心脑血管疾病、肾脏疾病及老年病中更为常见。目前对气虚血瘀证发病机理的现代研究主要集中在血液流变学及血流动力学异常、血管内皮细胞分泌活性物质的失衡、促凝血因子增加、抗凝血因子及纤溶活性物质减少等。临床研究也证明，气虚血瘀证患者均有不同程度的全血黏度及血浆黏度增高、红细胞聚集增加、红细胞变形指数降低等[1-6]。补阳还五汤是临床活血化瘀的经典方，运用了大量的补气药和多味活血药进行配伍，是以气虚血瘀为基本病机的疾病代表名方，受到医家重视而沿用至今。本实验主要侧重于研究补阳还五汤对于气虚血瘀型大鼠的血液流变学及红细胞相关指数的影响，为临床治疗气虚血瘀证候的相关疾病提供一定的实验依据。

1 材料

1.1 实验动物

清洁级健康的SD大鼠40只，雌、雄各半，体质量200～220 g，由辽宁长生生物技术有限公司提供。动物许可证号:SYXK(黑)2016-004。所有动物饲养于20～22 ℃的室内，自由摄食饮水。

1.2 实验药物

补阳还五汤组方：黄芪120 g，当归尾6 g，赤芍5 g，地龙3 g，桃仁3 g，川芎3 g和红花3 g。上述实验中所需要的中药饮片均严格遵守《中华人民共和国药典》(2015年版)中规定的科、属、种，均在黑龙江中医药大学附属第一医院采购。

1.3 主要仪器

全自动血液流变仪(型号：LBY-N7500B，北京普利生仪器有限公司)；全自动血液细胞分析仪(型号：X500，日本希森美康有限公司)；高速台式离心机(型号：TGL-16G，苏州捷美电子有限公司)；全自动血凝仪(型号：C2000-A，北京普利生仪器有限公司)。

1.4 实验试剂

凝血酶原时间 (prothrombin time，PT)试剂盒(批号：1812126)、凝血酶时间(thrombin time，TT)试剂盒(批号：1801007)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time，APTT)试剂盒(批号：1812009)、纤维蛋白原(Human Fibrinogen，FIB)试剂盒(批号：1804041)均来自于上海长岛生物技术有限公司。

2 方法

2.1 模型制备及给药方法

40只SD大鼠按体质量随机分为4组，分别为空白组、模型组和补阳还五汤高、低剂量组。每组大鼠10只，全部正常饮水摄食，适应性喂养7 d。各组大鼠以5%水合氯醛腹腔注射进行麻醉，大鼠麻醉成功后将其置于仰卧位，四肢与头部固定于老鼠固定板上，模型组及给药组采用气管插管的方式将注射博莱霉素生理盐水溶液(7 mg/kg)一次性经由气管内完成注射，空白组给予同体积生理盐水。完成注射后随即将大鼠直立旋转，使药液在其肺内均匀分布。结束等待大鼠清醒后，将其放回笼中正常喂养。造模14 d后，开始进行灌胃给药，空白组、模型组予等体积生理盐水，补阳还五汤高、低剂量组予相应药物(1 mL/100 g)，连续进行21 d灌胃治疗。治疗期间全部大鼠均自由进水，予普通的生长饲料喂养。

2.2 取血

取血前大鼠禁食12 h，但不禁水，末次给药1 h后腹腔注射5%水合氯醛5 mL/kg进行麻醉，将大鼠仰卧于手术台上腹主动脉采血，然后检测相关指标。

2.3 指标检测

2.3.1 血液流变学指标检测

取肝素钠抗凝血4 mL，进行全血黏度的测定。剪切参数分别设为低、中和高切变率，用血液流变仪测定全血黏度。

取枸橼酸钠抗凝血2 mL，3 000 r/min转速离心10 min，取上层血浆，利用全自动血液流变仪测定血浆黏度。

2.3.2 红细胞压积、聚集、刚性、变形指数测定

取EDTA-K2抗凝血2 mL，利用全自动血液细胞分析仪，测定红细胞压积、聚集、刚性及变形指数相关参数指标。

2.3.3 凝血四项测定方法

取枸橼酸钠抗凝血2 mL，3 000 r/min离心10 min得到血浆，按试剂盒的说明书操作，利用全自动血凝仪测定凝血四项FIB、PT、TT和APTT值。

2.4 统计学方法

3 结果

3.1 补阳还五汤对大鼠全血黏度、血浆黏度的影响

与空白组比较，模型组在低、中切变率下全血黏度极显著上升(P<0.01)、高切变率下全血黏度显著上升(P<0.05)，血浆黏度显著上升(P<0.05)；与模型组比较，补阳还五汤高剂量组高、中、低切变率下的全血黏度及血浆黏度均显著下降(P<0.05)；补阳还五汤低剂量组高、中、低切变率下的全血黏度及血浆黏度均显著下降(P<0.05)。见表1。

表1 补阳还五汤对大鼠全血黏度、血浆黏度的影响

3.2 补阳还五汤对大鼠红细胞相关参数的影响

与空白组比较，模型组RBC压积、RBC聚集指数、RBC刚性指数显著升高(P<0.05)，RBC变形指数显著降低(P<0.05)；与模型组比较，补阳还五汤高、低剂量组RBC压积、RBC聚集指数、RBC刚性指数显著降低(P<0.05)，红细胞变形指数显著升高(P<0.05)。见表2。

表2 补阳还五汤对大鼠红细胞相关参数的影响

3.3 补阳还五汤对大鼠凝血功能的影响

与空白组比较，模型组的APTT、TT、PT时间显著缩短(P<0.05)，FIB含量显著增加(P<0.05)；与模型组比较，补阳还五汤高、低剂量组APTT、TT、PT时间显著延长(P<0.05)，同时显著降低了FIB含量(P<0.05)。见表3。

表3 补阳还五汤对大鼠凝血功能的影响

4 讨论

补阳还五汤出自清代王清任的《医林改错》，有补气活血通络之功效，主治气虚血瘀之中风。补阳还五汤可以广泛用于临床各科疾病的治疗，主要以脑缺血、脑梗死、糖尿病等为主[7-14]。血液黏度增高是气虚血瘀证的主要表现之一，多种因素均可以影响血液黏度，其中红细胞自身的变形性和聚集性的改变是其发生变化的主要因素。而用来衡量血液黏滞程度的一项重要指标就是全血黏度。全血黏度从切变率上分为高、中、低切3个不同程度，而对全血黏度产生影响的因素又包括红细胞压积、红细胞聚集性、变形能力以及血浆的黏稠程度等。在高切变率下的全血黏度主要由红细胞的变形性决定，在该切变率下的血液黏度越高，说明红细胞的变形能力或弹性越差；而在低切变率的条件下，全血黏度主要反映的是红细胞聚集性，其全血黏度越高，表明红细胞聚集性越高。全血黏度的变化在血栓性疾病的诊断、治疗以及预防方面起着十分重要的作用。血浆黏度是反应血液黏滞程度的又一项重要指标，而影响血浆黏度的重要指标之一就是纤维蛋白原。凝血酶原时间(PT)是评价外源性凝血系统较为敏感和常用的试验参数，它的变化主要反映凝血因子和纤维蛋白原的血浆水平的改变；活化部分凝血活酶时间及凝血酶时间的延长与内源系统的凝血酶的抑制有关；纤维蛋白原(FIB)通过凝血酶作用可以直接破坏内皮细胞，使其在血液中发生迁移，变性，导致平滑肌细胞增生、肥大，最终形成网状结构，从而使血液黏度增高[15-17]。

本研究中，与空白组比较，模型组大鼠的全血黏度在高、中、低3个切变率下均显著升高，血浆黏度也发生明显的异常改变，同时，红细胞压积增大、红细胞聚集力增强、红细胞刚性增强以及红细胞变形性出现下降；FIB、APTT、TT、PT均出现不同程度的病理改变，说明气虚血瘀模型血液黏度升高。与模型组比较，补阳还五汤高、低剂量组均能够显著降低各切变率下的全血黏度，对血浆黏度、红细胞聚集性、红细胞压积、红细胞变形性以及凝血四项均有不同程度的改善作用。说明补阳还五汤可通过降低纤维蛋白原的含量、抑制凝血因子活性等途径抑制内、外源性凝血途径的激活，通过激活凝血酶原、促进凝血酶原激活物的生成、抑制凝血酶原激活物抑制物的释放等途径增强纤溶活性，改善血液瘀滞状态。这一研究结果对于临床治疗气虚血瘀证，改善血液浓、黏、凝、聚状态具有一定的临床指导意义。