果梢斑螟高毒力白僵菌菌株的筛选

陈越渠，刘庆珍，王晓霞，王晓丹，韩 姣 ，宋丽文

( 1.吉林省林业科学研究院，吉林 长春 130033；2.吉林省林业勘察设计院，吉林 长春 130022；3.长春市绿园区林业水利管理服务站，吉林 长春 130000 )

随着红松Pinuskoraiensis人工林面积的增加和采摘红松球果等人为活动干扰的加剧，原有的森林生态平衡被打破，致使红松病虫害频繁发生，尤其是红松球果及枝梢害虫猖獗发生，造成了巨大损失[1,2]。红松球果害虫种类较多，一般在东北林区以梢斑螟属Dioryctria类群为主，常以两种甚至多种害虫同域混合发生。在吉林省东部红松分布区以果梢斑螟(Dioryctriapryeri)、冷杉梢斑螟(D.abietella)及球果小花尺蛾(Eupitheciagigantea)三种蛀果害虫危害为主。因红松树体较高、害虫幼虫生活隐蔽、成虫产卵分散、多种害虫混合发生等诸多因素，导致常规防治方法难以达到理想防治效果。

球孢白僵菌(Beauveriabassiana) 是一种广谱性的昆虫病原真菌，能侵染鳞翅目Lepidoptera、鞘翅目Coleoptera、膜翅目Hymenoptera等 15 个目 149 个科700 多种昆虫[3]。由于白僵菌对环境友好，对人、畜和作物无害，杀虫谱广且致病性强，是目前国内外研究较多的生防真菌，已被广泛应用于农林业害虫的防治[4]。目前，有关红松球果害虫生物防治方面研究开展较少，为探索防治新方法，减少化学农药使用，项目组开展了对红松球果害虫具高毒力的白僵菌菌株筛选研究，为拓展球果害虫防治新途径提供依据。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1供试菌株

球孢白僵菌菌株为野外采集、分离、培养获得，共10株(表1)。

表1 菌株编号与来源

1.1.2供试虫源

果梢斑螟幼虫采于吉林省露水河林业局。

1.1.3培养基

PDA培养基：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g、蒸馏水1 000 mL。

1.2不同菌株对果梢斑螟的毒力测定

1.2.1半致死时间测定

用PDA培养基将供试菌株于25 ℃培养7 d，置显微镜下观察，长出分生孢子后，用0.05 %吐温-80配制成1×107个·mL-1悬浮液。取20 mL孢子悬浮液放在培养皿中。接种时，将果梢斑螟幼虫在孢子悬液中浸渍5 s后取出，25 ℃单头饲养。每组20头果梢斑螟幼虫，3次重复，以0.05 %吐温-80为对照。每日记录死亡虫数，持续10 d，统计幼虫死亡率与LT50。

1.2.2致死中浓度测定

1.2.3数据统计与分析

采用Excel和SPSS 19.0 软件对数据进行统计分析。

2结果与分析

2.1不同菌株对果梢斑螟幼虫的半致死时间(LT50)

接种后第2 d起，处理组幼虫出现不同程度的感病反应，主要表现为食欲不振，活动力明显减弱等特征，随后部分幼虫死亡、僵化(图1)。菌株间的致病力差异显著(表2)，菌株A3、J2对果梢斑螟幼虫的致病力最高，10 d死亡率均为100 %，LT50无显著差异。

表2 不同菌株对果梢斑螟幼虫致死中时间比较

图1 被球孢白僵菌感染的果梢斑螟幼虫

2.2不同菌株对果梢斑螟幼虫的致死中浓度(LC50)

各菌株间对果梢斑螟致死中浓度有显著差异(表3)，其中菌株A3毒力最高，LC50为2.97×105个·mL-1。其次为菌株J2，LC50为4.18×105个·mL-1。

表3 不同菌株对果梢斑螟幼虫的致死中浓度比较

3结论与讨论

通过10株球孢白僵菌对果梢斑螟幼虫致死中浓度和致死中时间的测定，获得了A3和J2两株高毒力球孢白僵菌菌株。其LT50分别为4.13 d和4.22 d，处理10 d的LC50分别为2.97×105个·mL-1和4.18×105个·mL-1，具有进一步研究开发价值。

针对农林害虫的白僵菌毒力测定研究较多，多数靶标虫种可在实验室内饲养或野外大量采集获得，通常会选取低龄幼虫开展试验。而目前尚无成熟的红松球果害虫繁育技术，无法获取低龄幼虫用于试验。本试验中，供试虫体为即将进入越冬期老龄幼虫，与低龄幼虫相比，其致死中浓度或为更高、致死中时间更长。在林间，球果害虫通常散产卵于球果表面，幼虫孵化后很快钻蛀球果内，这段时间是应用白僵菌防治的最佳时期，所以，这与实验室内测试的虫龄或许差异很大，关于所筛选菌株的林间防治效果，还有待于探索研究。