黄冈市区育龄妇女抗苗勒管激素参考区间的建立

丰琳

【摘要】 目的：建立黃冈市区育龄女性抗苗勒管激素（AMH）参考区间。方法：选取2019年3-12月本院收治的黄冈市区育龄女性200例，依据年龄分为育龄早期（20～34岁，n=151）与育龄晚期（35～50岁，n=49）;根据研究期间处于的月经周期时期分为卵泡早期（n=118）与黄体中期（n=82）。比较不同育龄期及不同月经周期时期AMH及相关激素水平，分析AMH与年龄以及月经周期相关性。建立黄冈市地区育龄女性抗苗勒管激素的参考区间。结果：卵泡早期与黄体中期AMH水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）。育龄早期AMH水平明显高于育龄晚期（P<0.05）。卵泡早期雌二醇（E2）与黄体酮（P）水平明显低于黄体中期，且促卵泡激素（FSH）水平高于黄体中期（P<0.05）。育龄早期催乳素（PRL）水平高于育龄晚期（P<0.05）;AMH水平与年龄存在负相关性（P<0.05），AMH水平与月经周期时期无明显相关性，差异无统计学意义（P>0.05）。以百分位数法（P2.5，P97.5）作为标准，建立育龄女性的血清AMH参考值区间，21～30岁：0.9～11.5 ng/mL，31～40岁：0.23～11.45 ng/mL，41～50岁：0.35～3.28 ng/mL。结论：建立黄冈市区育龄区期女性AMH参考区间，有利于了解该地区不孕女性的卵巢功能以及生育潜力。

【关键词】 黄冈市 育龄期女性 抗苗勒管激素 参考区间 生育能力

[Abstract] Objective： To establish the reference interval of anti mullerian hormone （AMH） for women of childbearing age in Huanggang City. Method： A total of 200 women of childbearing age in Huanggang City were selected from March to December 2019. According to their age， they were divided into early childbearing age （20-34 years old， n=151） and late childbearing age （35-50 years old， n=49）. According to the menstrual cycle phase during the study period， they were divided into early follicle phase （n=118） and middle corpus luteum phase （n=82）. The levels of AMH and related hormones in different childbearing ages and different menstrual cycles phase were compared. The correlation between AMH and childbearing ages and menstrual cycle phase were analyzed. The reference interval of AMH in women of childbearing age in Huanggang City was established. Result： There was no significant difference in the level of AMH between early follicle phase and middle corpus luteum phase （P>0.05）. The level of AMH in early childbearing age was significantly higher than that in late childbearing age （P<0.05）. The levels of estradiol （E2） and progesterone （P） in early follicle phase were significantly lower than those in middle corpus luteum phase， and the levels of follicle-stimulating hormone （FSH） was higher than that in middle corpus luteum phase （P<0.05）. The level of prolactin （PRL） in early childbearing age was higher than that in late childbearing age （P<0.05）. AMH level was negatively correlated with age （P<0.05）. AMH level was not significantly correlated with menstrual cycles phase， and the difference was not statistically significant （P>0.05）. Percentile method （P2.5， P97.5） was used as the standard to establish the reference range of serum AMH in women of childbearing age， 21-30 years old： 0.9-11.5 ng/mL， 31-40 years old： 0.23-11.45 ng/mL， 41-50 years old： 0.35-3.28 ng/mL. Conclusion： The establishment of AMH reference interval for women of childbearing age in Huanggang City is beneficial to understand the ovarian function and fertility potential of infertile women in this area.

[Key words] Huanggang City Women of childbearing age Anti mullerian hormone Reference range Fertility

随着生活习惯以及工作压力的改变，不孕的发生率明显增加，因此有效评估育龄期女性生育能力对于判断其卵巢功能及生育潜力有着非常重要的意义[1]。抗苗勒管激素（AMH）是转化生长因子-P家族的成员，属于卵巢特异性生长因子，主要在窦卵泡以及窦前泡中进行表达，由颗粒细胞进行分泌，在育龄期女性中具有较高水平的表达[2]。目前已经研究证实，不同直径的窦卵泡释放AMH的占比不同，其中5～8 mm的窦卵泡释放的AMH占比较高，而直径较大的窦卵泡释放AMH的能力明显降低。因此，分析其释放AMH的能力可以很好地反应窦卵泡大小，评估剩余原始卵泡的数量，分析女性生育能力[3]。当前临床主要是通过预测女性绝经年龄或评估卵巢储备功能的方式判断女性生育能力，但是其诊断复杂，经费较高，影响其临床推广[4]。本研究为进一步了解AMH水平在不同女性中的表达情况，特选取本院收治的200名育龄期女性，分析不同阶段育龄期女性的AMH水平以及相关激素水平，探究AMH的参考区间，为临床评估女性生育能力提供数据支持，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年3-12月本院收治的黄冈市区育龄女性200例。纳入标准：（1）近期未服用避孕药物;（2）基础体温典型双相;（3）临床资料完整。排除标准：（1）伴有高催乳素情况;（2）伴有妇科肿瘤;（3）既往存在卵巢手术史;（4）伴有内分泌失调情况;（5）经检查确定存在黄体功能不全情况。20～50岁，平均（27.6±2.6）岁。依据年龄分为育龄早期（20～34岁，n=151）与育龄晚期（35～50岁，n=49）;在根据研究期间处于的月经周期时期分为卵泡早期（n=118）与黄体中期（n=82）。所有研究对象均知情同意并签署知情同意书，本研究已经医院伦理委员会批准。

1.2 方法 （1）调查基本信息。了解月经情况，年龄等基础信息。（2）标本采集。卵泡早期的标本采集时间点为月经第2～5天;黄体中期的标本采集时间点为基础体温升高4～8 d。抽取空腹肘静脉血，抽血时间为上午8：00-11：00时，抽取剂量为5 mL，室温下静置1 h，然后对血液样本进行离心处理，转速设置为3 000 r/min，离心时间为10 min，离心后分离血清，并将制备好血清样本置于低温冰箱中进行保存。（3）指标检测。采用量子点荧光免疫法对患者AMH水平进行检测，试剂盒购于南京诺唯赞资料科技有限公司，仪器为Vazyme AFS-1000干式荧光免疫分析仪;采用量子点荧光免疫法对促卵泡激素（FSH）、雌二醇（E2）、黄体生成素（LH）、催乳素（PRL）及黄体酮（P）水平进行检测，试剂盒均购于南京诺唯赞资料科技有限公司。本次研究所有检测操作均由同组人员完成，并且严格按照试剂盒说明书进行操作，保障检测结果的准确性。（4）相关性分析。将AMH水平作为因变量，将年龄及月经周期作为自变量，分析健康育龄期女性AMH水平与自身年龄以及月经周期之间的关系。（5）建立女性血清正常AMH的参考区间。将200例黄冈市区育龄女性分为不同年龄段建立健康正常女性的血清AMH参考值区间，其中21～30岁：68例，31～40岁：75例，41～50岁：57例。

1.3 统计学处理 采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。相关性使用Spearman秩相关进行分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同月经周期时期及育龄期血清AMH水平 卵泡早期与黄体中期AMH水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。育龄早期AMH水平明显高于育龄晚期，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 不同月经周期时期女性相关生殖激素水平 卵泡早期与黄体中期T、LH及PRL水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。卵泡早期E2与P水平明显低于黄体中期，且FSH水平高于黄体中期，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 不同育龄期相关生殖激素水平 育龄早期与晚期T、E2、LH、FSH及P水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。育龄早期PRL水平高于育龄晚期，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表3。

2.4 AMH与年龄以及月经周期相关性分析 AMH水平与年龄呈负相关，差异有统计学意义（P<0.05）;AMH水平与月经周期时期无明显相关性，差异无统计学意义（P>0.05）。见表4。

2.5 建立女性血清正常AMH的參考区间 21～30岁女性AMH水平为（3.65±2.61）ng/mL;31～40岁女性AMH水平为（2.75±2.17）ng/mL，41～50岁女性AMH水平（1.77±1.13）ng/mL。结果提示，AMH水平不符合正态分布，根据CLSI的C28-A3文件建议，非正态性的数据使用的参考区间为2.5%～97.5%。以百分位数法（P2.5，P97.5）作为标准，建立健康正常女性的血清AMH参考值区间，21～30岁：0.9～11.5 ng/mL，31～40岁：0.23～11.45 ng/mL，41～50岁：0.35～3.28 ng/mL。

3 讨论

随着生活习惯以及工作压力的改变，不孕的发生率明显增加，因此有效评估育龄期女性生育能力对于判断其卵巢功能及生育潜力有着非常重要的意义[5]。已有学者在研究中指出，卵巢生长卵泡主要进行AMH分泌，其中包含小窦状卵泡颗粒细胞、窦前卵泡颗粒细胞以及初级卵泡细胞，而卵泡膜细胞或闭锁卵泡中不存在AMH表达[6]。AMH对于优势卵泡形成可以起到抑制原始卵泡池过快消耗的作用，对于原始卵泡的起始募集以及循环募集可以起到调控作用，促进优势卵泡的形成[7]。已有研究指出，AMH水平不会受到垂体-卵巢轴的影响，且经研究证实，在不同月经周期内育龄期女性的AMH水平不会出现明显波动，并在研究结论中指出，AMH可作为判断育龄期女性卵巢储备功能的准确指标[8]。有报道指出，对育龄期女性AMH水平进行检测，可以间接评估女性生殖能力，且不受检测周期限制，可实现随时测量，有效弥补传统血清指标受月经周期影响的弊端，更适用于临床推广[9]。

本研究结果显示，卵泡早期与黄体中期AMH水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）。育龄早期AMH水平明显高于育龄晚期（P<0.05），由此可以看出，不同月经周期健康育龄期女性AMH无明显差异，进一步证实以往研究中月经周期不会影响患者AMH水平这一结论[10]。年龄会影响健康育龄期女性的AMH水平，其中育龄期早期AMH水平更高，随年龄增长会出现AMH水平明显降低情况[11]。由此可以看出，年龄是影响健康女性生殖能力的关键因素[12]。本次研究不仅对健康育龄期女性AMH水平进行分析，还对其相关性激素水平进行分析，结果显示，卵泡早期与黄体中期T、LH及PRL水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。卵泡早期E2与P水平明显低于黄体中期，且FSH水平高于黄体中期（P<0.05），由此可以看出，E2、P以及FSH水平更容易受到月经周期的影响，降低其诊断的有效性。在对不同育龄期女性相关激素水平进行分析时发现，育龄早期与晚期T、E2、LH、FSH及P水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）;育龄早期PRL水平高于育龄晚期（P<0.05），由此可以看出，健康育龄期女性PRL水平会受到年龄的影响[13]。

本研究结果显示，AMH水平与年龄呈负相关（P<0.05），AMH水平与月经周期时期无明显相关性，差异无统计学意义（P>0.05），由此可以看出，AMH是评估健康女性生育能力的重要指标，且不会受月经周期影响[14]。已有研究指出，生育能力正常女性AMH水平与其年龄段存在明显相关性，且随年龄增长，育龄期女性AMH水平呈现下降趋势[15]。虽然女性年龄与生殖能力存在密切联系，但是并代表，女性的实际年龄与卵巢年龄相符，而卵巢年龄主要决定于卵巢内早期卵泡数量以及质量，也就是临床常说的卵巢储备量[16]。

为进一步分析黄冈市育龄期女性AMH参考区间，本研究对以往研究进行汇总分析，结果发现，国内外多关于AMH水平的研究并无统一定论，也无明确的参考范围[17]。曾有学者在研究中心指出，即使使用相同的试剂盒进行检查，不同地区以及不同国家的健康育龄期女性AMH水平同样存在明显差异，并在研究中指出，AMH参考范围水平会因为地域、种族等因素而发生改变，在进行鉴别时应当结合相关数据进行确定[18]。本次研究结果只用于临床数据参考，为进一步确定该数值区间的参考价值，还需纳入更多的研究样本，进行更加综合的分析，排除影响AMH水平的相关因素，证实本次研究数据的参考性[19]。虽然目前临床关于AMH参考区间的明确规定，但是已有大量研究证实，AMH水平与卵巢储备功能之间存在密切联系，AMH水平很大程度上可反映育龄期女性的生殖能力，相较于其他临床常用传统指标其稳定性更高，影响因素更少[20]。

综上所述，建立黄冈市区育龄区期女性AMH参考区间，有利于了解该地区不孕女性的卵巢功能以及生育潜力。

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（收稿日期：2020-05-29） （本文编辑：田婧）