9种三唑类杀菌剂对苹果轮纹病菌的毒力及田间防效

姜莉莉 付丽 薛雯 曲健禄 武海斌 范昆

关键词苹果轮纹病菌;三唑类杀菌剂;毒力;田间防效

我国是世界上最大的苹果生产国，轮纹病是苹果生产中的主要病害之一，其病原菌为贝氏葡萄座腔菌梨专化型Botryosphaeria dothidea，多发于苹果枝干和果实，造成枝干溃疡、树势衰弱、果实腐烂，严重影响苹果产业发展和果农种植收入。随着研究的不断深入，已证实苹果轮纹病与干腐病、欧美地区的苹果白腐病为同一种病害。同时，苹果轮纹病菌的寄主范围较广，除苹果外还可侵染梨、桃、杏等其他果树，对果业生产影响巨大。

目前，对苹果轮纹病的农业防治效果有限，抗性品种尚未广泛应用。生产上仍以化学药剂防治为主，主要化学药剂包括甲基硫菌灵、代森锰锌等。三唑类杀菌剂是20世纪70年代发展起来的一类高效杀菌剂，其通过抑制菌体麦角甾醇的生物合成而发挥药效，具有内吸性，且高效、低毒、持效期长、兼具预防和治疗作用，可用于防治子囊菌、担子菌及半知菌引起的多种病害。显微镜观察发现，三唑类杀菌剂可抑制苹果轮纹病菌的菌丝生长，使菌丝干瘪、畸形、龟裂，菌丝细胞解体死亡。由于三唑类杀菌剂对植株生长有一定的抑制作用，其在作物上的应用需进行安全性评价。中国农药信息网数据显示，戊唑醇和氟硅唑已获得登记，可用于苹果轮纹病的防治;含苯醚甲环唑、丙环唑、腈菌唑的复配制剂也已登记用于苹果轮纹病的防治。目前，不同三唑类杀菌剂对苹果轮纹病的作用效果的比较尚未见系统报道。

本研究在室内条件下测定戊唑醇、苯醚甲环唑、氟硅唑、氟菌唑、叶菌唑、丙环唑、腈菌唑、己唑醇和氟环唑9种三唑类杀菌剂对苹果轮纹病菌B.dothidea菌丝生长的毒力，在田间条件下评价4种未登记药剂对苹果树的安全性，并在轮纹病发生严重的果园进行两年田间药效试验，筛选防治苹果轮纹病的高效三唑类杀菌剂。

1材料与方法

1.1供试菌株

对采集于山东省曲阜市吴村镇苹果园的轮纹病病果进行病原菌分离，按照柯赫氏法则进行回接鉴定，获得苹果轮纹病菌贝氏葡萄座腔菌梨专化型Botryosphaeria dothidea。

1.2供试药剂

95%戊唑醇原药和430g/L戊唑醇悬浮剂（SC），拜耳股份公司;95%苯醚甲环唑原药，江西农大锐特化工科技有限公司;10%苯醚甲环唑水分散粒剂（WG），先正达南通作物保护有限公司;氟菌唑97%原药和30%可湿性粉剂（WP），日本曹达株式会社;95%氟硅唑原药和96%腈菌唑原药，山东潍坊润丰化工股份有限公司;400g/L氟硅唑乳油（EC）和12.5%腈菌唑微乳剂（ME），深圳诺普信农化股份有限公司;95%叶菌唑原药和50%叶菌唑水分散粒剂（WG），江苏辉丰生物农业股份有限公司;88%丙环唑原药和250g/L丙环唑乳油（EC），瑞士先正达作物保护有限公司;95%己唑醇原药和25%己唑醇懸浮剂（SC），97%氟环唑原药和12.5%氟环唑悬浮剂（SC），山东省联合农药工业有限公司。

1.3试验方法

1.3.1室内毒力测定

室内毒力测定采用生长速率法。在预试验的基础上，将供试药剂母液稀释成系列梯度浓度。将各浓度药液加入50℃左右的PDA培养基中，摇匀后倾倒至直径9cm的灭菌培养皿中，制成含药平板。在活化好的苹果轮纹病菌菌落边缘，以直径7mm的打孔器打取菌饼，接种至平板上。以无菌水代替药液为对照，每个平板为1个重复，每处理重复3次。25℃黑暗培养，待对照菌落长至培养皿2/3左右时，采用十字交叉法测量各处理菌落直径，计算各处理的菌丝生长抑制率。以毒力最低的药剂为标准药剂，计算其他药剂的相对毒力指数。

菌丝生长抑制率=（对照组菌落直径-处理组菌落直径）/对照组菌落增长直径×100%。

相对毒力指数=标准药剂EC50/供试药剂EC50。

1.3.2安全性试验

在山东省果树研究所五果园，选取‘红富士‘嘎啦和‘金帅3个品种5年生幼树，按照药剂推荐剂量的最高浓度的1、2倍和4倍进行全树均匀喷雾。每2株树为1小区，重复4次，随机区组排列，以清水处理为对照。施药时间分别为2018年6月1日、6月8日和6月15日。分另0于6月4日、6月8日、6月15日、6月25日观察药剂对苹果叶片和果实的安全性;并于6月25日进行一年生新梢长度调查，每小区随机选取15个枝条，测量基部到顶梢的长度。通过数据统计分析，判断药剂对果树生长有无刺激或抑制作用，以评价其安全性。

1.3.3田间防效试验

田间试验选址于山东省曲阜市吴村镇‘金帅苹果园，树龄20年，常规不套袋管理。2018年4月12日和2019年4月19日分别进行当年第1次施药，其后每10～15d施药1次，共喷施8次。根据各药剂在中国农药信息网上的标签信息确定施用剂量，施药液量以叶片、果面均匀着药、并稍有药液下滴为度，每株树所需药液量约为2.5～3L。每2株树为1个小区，每个处理重复4次，随机区组排列。

分别于2018年9月9日和2019年9月15日（果实近成熟期）统计各小区树上及树下掉落的果实总数和轮纹病果数，计算病果率。

病果率=（树上轮纹病果数+树下轮纹病果数）/（树上总果数+树下总果数）×100%。

果实采收期，在每株果树的东、南、西、北及顶部设5个取样点，每个点随机摘取5个果实，每个小区共采集50个果实放置于塑料保鲜袋中，室温存放30d后，调查病果数，计算病果率和各药剂的防治效果。

防治效果=（对照组病果率-处理组病果率）/对照组病果率×100%。

1.4数据分析

采用SPSS18.0计算EC50、EC95及95%置信限。采用Duncan氏新复极差法进行处理问数据的差异显著性分析。

2结果与分析

2.1 9种三唑类杀菌剂对苹果轮纹病菌的毒力

由表1可以看出，氟菌唑和叶菌唑对苹果轮纹病菌的毒力最低，EC50分别为1.751μg/mL和1.521μg/mL，EC95分别为57.805μg/mL和224.169μg/mL。苯醚甲环唑和氟硅唑的毒力最高，EC5。分别为0.107μg/mL和0.140μg/mL，分别为氟菌唑的16.364倍和12.507倍;EC95分别为4.479μg/mL和4.083μg/mL，分别为叶菌唑的50.049倍和54.903倍。氟环唑、丙环唑、己唑醇、戊唑醇和腈菌唑的EC50分别为0.220、0.238、0.452、0.578μg/mL和1.274μg/mL，毒力分别为氟菌唑的7.959、7.357、3.874、3.029倍和1.374倍;EC95分别为11.284、7.066、17.173、35.571μg/mL和42.834μg/mL，毒力分别为叶菌唑的19.866、31.725、13.054、6.302倍和5.233倍。

2.2 4种三唑类杀菌对苹果树的安全性评价

对4种未登记用于苹果轮纹病防治的三唑类杀菌剂进行安全性评价发现，末次用药10d后，30%氟菌唑WP、50%叶菌唑WG、25%己唑醇SC和12.5%氟环唑SC的1、2倍和4倍剂量处理的‘富士‘嘎啦和‘金帅3个品种苹果枝条长度与清水对照无显著差异，表明其对苹果枝条伸长无刺激或抑制作用（表2）。同时，各剂量药剂处理对苹果叶色、形态等无不良影响，表明其在推荐剂量下对苹果安全，可以用于苹果轮纹病的防治。

2.3 9种三唑类杀菌剂对苹果轮纹病的田间防效

由表3可以看出，在试验剂量下，9种三唑类杀菌剂对苹果轮纹病菌均表现出一定的田间防效，但药剂之间及年份之间均存在差异。在2018年，400g/L氟硅唑EC（57.1mg/kg）、250g/L丙环唑EC（166.7mg/kg）和10%苯醚甲环唑WG（66.7mg/kg）对苹果轮纹病的防效位列前三，果实采收前分别为84.75%、83.66%和82.05%，采后30d防效分别为73.33%、73.33%和68.33%。50%叶菌唑WG虽室内毒力较低，但按166.7mg/kg浓度喷施也有较高的防效，采前和采后30d防效分别为80.46%和66.67%。此外，430g/L戊唑醇SC（143.3 mg/kg）、12.5%氟环唑SC（83.3mg/kg）、12.5%腈菌唑ME（62.5mg/kg）、30%氟菌唑WP（100.0mg/kg）和25%己唑醇SC（62.5 mg/kg）的采前防效分别为78.76%、78.32%、75.67%、74.03%和73.47%，采后30d防效也均高于60.00%。在2019年，丙环唑、苯醚甲环唑和氟硅唑对苹果轮纹病的防效位列前三，采收前分别为87.66%、87.4%和82.25%，采后30d分别为70.49%、73.77%和75.41%。此外，腈菌唑、戊唑醇、叶菌唑和氟环唑的采前防效均高于70.00%，采后30d防效均高于65.00%。綜合分析两年的数据发现，氟硅唑、丙环唑和苯醚甲环唑对苹果轮纹病的防效较高。

3结论与讨论

目前，三唑类杀菌剂是品种较多、应用较广的一类杀菌剂，但不同药剂品种对不同靶标病原菌的作用效果又存在差异。Fan等报道，戊唑醇对苹果白腐病防效较高。温浩等报道，氟环唑、苯醚甲环唑和戊唑醇对草莓病原菌新拟盘多孢Neopestalotiopsis clavispora的室内EC50分别为0.399、0.468μg/mL和0.331μg/mL。胡起兴等报道，苯醚甲环唑和戊唑醇对瓜叶菊菌核病菌Sclerotinia sp.的EC50分别为0.197 3μg/mL和0.4365μg/mL。苏振国等报道，苯醚甲环唑、丙环唑、氟环唑和戊唑醇对桑褐斑病病原菌壳丰孢Phloespora maculans（Bereng.）Allesch具有较高的抑制活性，对菌丝生长的ECso分别为0.0066、0.0205、0.0289μg/mL和0.2580μg/mL。曹海潮等报道，丙环唑、戊唑醇和氟硅唑对番茄颈腐根腐病菌。本研究发现，苯醚甲环唑和氟硅唑对苹果轮纹病菌的室内毒力最高，EC50分别为0.107μg/mL和0.140μg/mL;氟环唑、丙环唑、己唑醇、戊唑醇和腈菌唑的EC50分别为0.220、0.238、0.452、0.578μg/mL和1.274μg/mL，氟菌唑和叶菌唑的毒力较低，EC50分别为1.751μg/mL和1.521μg/mL。

田间药效试验方面，张彬彬等报道，30%苯醚甲环唑悬浮剂和12.5%氟环唑悬浮剂对烟草赤星病的田间防效分别为73.99%和70.57%。宋益民等报道，10%己唑醇悬浮剂、20%苯醚甲环唑微乳剂、250g/L丙环唑乳油和12.5%氟硅唑乳油对水稻纹枯病的田间防效分别为85.14%、94.84%、93.38%和93.01%;12.5%氟环唑悬浮剂、430g/L戊唑醇悬浮剂和10.0%己唑醇悬浮剂对水稻穗颈瘟的防效分别为84.34%、78.61%和82.86%，12.5%氟环唑悬浮剂、430g/L戊唑醇悬浮剂、10.0%苯醚甲环唑水分散粒剂和250g/L丙环唑乳油对稻曲病的防效分别为83.56%、88.32%、85.43%和86.67%。本研究通过两年田间试验发现，氟硅唑（57.1mg/kg）、丙环唑（166.7mg/kg）和苯醚甲环唑（66.7mg/kg）对苹果轮纹病的防效最高，2018年的果实采收前防效分别为84.75%、83.66%和82.05%，采后30d防效分别为73.33%、73.33%和68.33%，2019年的果实采收前防效分别为82.25%、87.66%和87.41%，采后30d防效分别为75.41%、70.49%和73.77%。这可能是由于氟硅唑的渗透性较强，丙环唑对菌株过氧化氢酶有较强的结合能力，苯醚甲环唑能够破坏真菌细胞壁结构，造成细胞膜内外渗透压失衡、原生质渗漏。同时，安全性试验发现，各药剂对苹果树生长发育无不良影响。因此，供试9种三唑类杀菌剂均可用于苹果轮纹病的防治，其中氟硅唑、丙环唑、苯醚甲环唑的防治效果最佳。