尿源性脓毒症患者血清H-FABP、IL-9、sTREM-1水平及相关性研究

张铭立,刘建琳,魏 伟,程 琳,赵艳福

脓毒症是临床中较为常见的一种并发症，属于一种全身炎症反应综合征，其发病主要是因为感染导致机体出现应激反应。尿源性脓毒症是因为患者泌尿系统感染导致发病，在脓毒症中占9%～30%[1]。尿源性脓毒症在行泌尿外科腔镜手术患者中常发生，具有较高的病死率[2]，因此引起了广大专家和学者的关注。心型脂肪酸结合蛋白(heart-type fatty acid binding protein, H-FABP)作为一种可溶性蛋白质，其功能与肌红蛋白相似，但是其分子质量低，主要在细胞质中广泛存在，常作为心肌损伤标志物[3]，目前在脓毒症患者中研究也越来越多。Th9细胞属于一种新发现的Th细胞亚群，已经有研究证实，Th9细胞在过敏反应、自身免疫性疾病的发生过程中发挥着重要作用，白细胞介素-9(interleukin-9, IL-9)是Th9细胞产生的一种代表性因子[4]。可溶性髓样细胞触发受体1(soluble triggering receptors expressed on myeloid cells-1, sTREM-1)主要是通过TREM-1溶解产生，主要存在于血液和尿液中，参与急性炎症反应过程[5]。本研究旨在探讨H-FABP、IL-9、sTREM-1在尿源性脓毒症患者血清中的水平及相关性，为临床研究尿源性脓毒症的发病机制提供理论依据。

1 资料与方法

1.1纳入和排除标准 ①纳入标准：所有患者均符合《严重脓毒症和脓毒症休克管理指南》中关于脓毒症的诊断标准[6]：尿源性感染，序贯器官衰竭评分(sequential organ failure assessment, SOFA)≥2分；所有患者均进行中段尿细菌培养；患者及其家属对本研究均知情，签署知情同意书。②排除标准：合并肿瘤、血液疾病者；免疫功能异常者；合并全身性炎症反应综合征者；精神异常患者；进行免疫调节治疗者。本研究经过我院伦理委员会批准。

1.2临床资料 选取2019年5月—2020年5月在我院就诊的符合以上纳入标准和排除标准的尿源性脓毒症患者70例为尿源性脓毒症组，其中男42例，女28例；年龄39～78(55.58±15.60)岁。另取同期在我院就诊非尿源性脓毒症患者70例为非尿源性脓毒症组，其中男40例，女30例;年龄40～80(57.00±16.00)岁;原发感染部位:肺部感染35例，腹腔感染19例，导管相关性感染12例，胆道感染4例。2组性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.3方法

1.3.1不同亚型脓毒症评估及分组：①参考《严重脓毒症和脓毒症休克管理指南》中的诊断标准：脓毒症为感染明确，SOFA≥2分；严重脓毒症为感染明确，SOFA≥2分，伴有急性器官功能障碍；脓毒症休克为患者在进行体液复苏治疗后，需要辅助血管活性药物维持血压平衡，平均动脉压>65 mmHg，血乳酸≥2 mmol/L。按照该诊断标准，将70例尿源性脓毒症患者分为普通脓毒症组44例，严重脓毒症组16例，脓毒症休克组10例。②急性肾损伤评估：根据改善全球肾脏病预后组织(KDIGO)中关于急性肾损伤的诊断标准[7]。按照脓毒症是否合并急性肾损伤，分为肾损伤组18例，非肾损伤组52例。

机床厂原有的主电路需要完善的二次回路控制保护，其中的断路器起到主要保护作用，断路器控制回路的主要功能是对断路器进行通、断操作。原有的二次回路过于简单，不能显示断路器分、合状态，也没有相应的报警、指示信号，并且当发生过流时，不能及时控制断路器跳闸，给生产工作带来不便，新的断路器控制回路要能够解决上述问题。

2.4H-FABP、IL-9、sTREM-1水平相关性 H-FABP与IL-9呈正相关(r=0.515，P=0.001)，H-FABP与sTREM-1呈正相关(r=0.361，P=0.002)，IL-9与sTREM-1呈正相关(r=0.309，P=0.009)。见图1。

2.2不同亚型脓毒症患者H-FABP、IL-9、sTREM-1水平比较 与普通脓毒组比较，严重脓毒症组、脓毒症休克组H-FABP、IL-9、sTREM-1水平均升高，且脓毒症休克组H-FABP、IL-9、sTREM-1水平高于严重脓毒症组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2 结果

2.3肾损伤与非肾损伤肾源性脓毒症患者H-FABP、IL-9、sTREM-1水平比较 肾损伤组H-FABP、IL-9、sTREM-1水平均高于非肾损伤组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表1 2组脓毒症患者H-FABP、IL-9、sTREM-1水平比较

尿源性脓毒症发病特点是较隐匿且病情进展迅速，严重时会导致患者引发脓毒症休克，甚至是死亡，目前关于其发病机制尚不明确[8]。临床中大部分泌尿系结石表现为感染性结石，其结石成分不同含有的细菌内毒素也存在差异，结石容易引起患者出现尿潴留、泌尿系统梗阻，导致细菌逆行进入血液，最终导致尿源性脓毒症发生[9-10]。目前临床中主要采用C反应蛋白、降钙素原、白细胞计数等方式对脓毒症患者进行诊断，但是其特异性较低，在患者疗效及病情严重程度评估等方面存在明显的不足[11]，不能满足临床需求。

表2 不同亚型尿源性脓毒症患者H-FABP、IL-9、sTREM-1水平比较

2.1H-FABP、IL-9、sTREM-1水平比较 尿源性脓毒症组H-FABP、IL-9、sTREM-1水平均高于非尿源性脓毒症组，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表3 尿源性脓毒症是否合并急性肾损伤患者的H-FABP、IL-9、sTREM-1水平比较

1.3.2H-FABP、IL-9、sTREM-1水平检测：抽取2组入院当天空腹静脉血5 ml，离心速度3000 r/min，10 min后提取上层血清，采用酶联免疫吸附法检测H-FABP、IL-9、sTREM-1水平。将提前稀释好的血液标本100 μl加入相应的微孔板反应孔中，第1孔只加样品稀释液为零孔，混合均匀，在37℃下处理90 min，甩去孔内液体，吸干水分；将准备好的抗体加入到每孔中0.1 ml，在37℃下处理60 min，底物四甲基联苯胺(TMB)空白孔不加；甩去孔内液体，每孔中加满磷酸盐缓冲液(PBS)0.01 mmol/L，浸泡1～2 min，甩去孔内液体，吸干水分；每孔中加入90 μl的TMB，避光处理15～20 min；每孔中加入90 μl TMB终止液，即蓝色变为黄色。在波长450 nm处分析H-FABP、IL-9、sTREM-1的水平。

式中：和分别为语言变量和对应的三角模糊数，当Rij≻时，Fij表示Rij相对于产生的损失，Rij越优，产生的损失越大；当Rij时，Fij表示Rij相对于产生的损失，Rij越劣，产生的损失越大；当时，Fij表示Rij相对于既无获得收益也无产生损失。

图1 尿源性脓毒症患者H-FABP、IL-9、sTREM-1水平相关性A. IL-9与H-FABP相关性；B. sTREM-1与H-FABP相关性；C. sTREM-1与IL-9相关性；H-FABP为心型脂肪酸结合蛋白，IL-9为白细胞介素-9，sTREM-1为可溶性髓样细胞触发受体

3 讨论

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H-FABP在人体多种器官和组织中广泛存在，当心肌细胞发生损伤，H-FABP会从心肌细胞向血液中释放，导致血液中H-FABP含量增加[12]。既往研究证实，大多数脓毒症患者伴随心肌损伤症状[13-14]。但目前关于H-FABP对脓毒症患者病情严重程度评估的相关研究较少。本研究结果显示，尿源性脓毒症组H-FABP高于非尿源性脓毒症组，与齐洪娜等[15]研究结果一致；该研究认为在脓毒症心肌损伤患者中H-FABP显示高表达。本研究结果同时显示，脓毒症休克组和肾损伤组H-FABP水平明显高于严重脓毒症组和非肾损伤组，提示IL-9可能参与了尿源性脓毒症的发病过程。

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IL-9是Th9细胞中主要的细胞因子，属于一种重要的炎性因子，在机体生理、免疫过程中发挥着关键性的作用。相关研究指出，在小鼠模型中对其注射致死剂量的绿脓杆菌再注射IL-9，小鼠死亡率显著降低，提示Th9细胞在脓毒症中起到一定的保护功能[16]。本研究结果显示，尿源性脓毒症组IL-9高于非尿源性脓毒症组，且脓毒症休克组和肾损伤组IL-9水平最高，提示IL-9参与了尿源性脓毒症的发病。

TREM-1属于免疫球蛋白超家族中的主要成员之一，主要在成熟的中性粒细胞、单核-巨噬细胞等细胞表面进行表达，发挥一定的促炎作用。在一些感染性疾病如化脓性关节炎、肺炎、腹膜炎中，患者体液中sTREM-1水平相对较高，并且与患者感染的严重程度有关[17-20]。Aksaray等[21]学者研究指出，sTREM-1作为TREM-1可溶性形式，在脓毒症的临床诊断中具有一定的价值。本研究证实，尿源性脓毒症患者血清中sTREM-1浓度较高。Alkan等[22]研究指出，sTREM-1水平的高低与脓毒症患者病情严重程度呈正相关。本研究结果显示，尿源性脓毒症组sTREM-1高于非尿源性脓毒症组，且脓毒症休克组sTREM-1水平最高；与上述文献报道一致。在急性肾损伤早期，肾小管、肾间质均可出现不同程度的损伤，尿液中的各种生物标志物异常，在疾病早期预警中起到重要作用[23-24]。本研究结果显示，肾损伤组sTREM-1水平高于非肾损伤组，提示sTREM-1可能参与了尿源性脓毒症急性肾损伤过程。本研究结果显示，与严重脓毒症组和非肾损伤组比较，脓毒症休克组和肾损伤组H-FABP、IL-9、sTREM-1水平均显著升高，提示H-FABP、IL-9、sTREM-1水平与尿源性脓毒症的病情发展有关。H-FABP、IL-9、sTREM-1三者之间呈正相关，并且随尿源性脓毒症病情发展，其含量水平不断升高。

综上所述，H-FABP、IL-9、sTREM-1在尿源性脓毒症患者血清中表达水平升高，与患者病情严重程度、有无急性肾损伤有关；且三者之间呈正相关，并参与了尿源性脓毒症的发病过程，为临床研究尿源性脓毒症发病机制提供了理论依据。